第三章 红细胞检验

第三章红细胞检验

第一节红细胞生理

第二节红细胞计数

第三节血红蛋白测定

第四节红细胞计数和血红蛋白测定的临床意义

第五节网织红细胞概述

第六节红细胞比容测定

第七节红细胞直径测定

第八节计算红细胞平均数

第九节红细胞形态检验

第十节点彩红细胞检验

学习目标

1.概述红细胞的生成、形态与功能以及血红蛋白的结构和吸收光谱。

2.叙述红细胞显微镜计数原理、试剂、操作、计算、注意事项。

3.比较红细胞计数和白细胞计数的异同。

4.概述红细胞计数的计数误差及质量控制。

第一节红细胞生理

一、红细胞的发育过程

二、红细胞形态与功能

三、血红蛋白结构与吸收光谱

红细胞的发育过程

造血干细胞

f早幼红细胞一中幼红细胞f晚幼红细胞

f网织红细胞一成熟红细胞

一、红细胞的发育过程

成熟红细胞

120天

二、红细胞的形态与功能

形态：双凹圆盘状；

直径：6~9um,平均7.2Rm；

厚度：边缘部分约2Hm,中央约1Hm

侧面观呈哑铃形。

在高渗溶液中：

红细胞皱缩，边缘呈锯齿状；

在低渗溶液中：

红细胞肿涨甚至破裂，血红蛋白逸出后形成影细胞。

血涂片经瑞特染色后，细胞呈粉红色，中央着色较淡，有明显的

中央淡染区，淡染区的直径约占红细胞直径的1/3〜2/5。

红细胞主要成分

血红蛋白和水（64%〜70%）,其余成分为蛋白质、磷脂、无机盐和

酶。

功能：

1.运输02和CO2

2.调节酸碱平衡

3.免疫粘附

三、血红蛋白结构与吸收光谱

Hb的结构：

Hb的分子量：64458o

1分子Hb：4个亚铁血红素，4个Fe,

可结合4个02。

ImolHb：4moiFe,可结合4moi02。

1克Hb：含3.47mgFe,结合1.39ml02。

在正常情况下，外周血中的血红蛋白主要有：

氧合血红蛋白(HbO2)

还原血红蛋白(Hbred)

碳氧血红蛋白(HbCO)

高铁血红蛋白(Hi或MHb)。

吸收光谱特征：

氧合血红蛋白(HbO2)：呈鲜红色，在578nm(黄色光)和540nm(绿

色光)处有两条

吸收光带。

还原血红蛋白(Hbred)：呈暗红色，在556nm(黄、绿色光之间)处

有一条吸收光

市o

碳氧血红蛋白(HbCO)：呈樱红色，在572nm(黄色光)和535nm(绿

色光）处有两

条吸收光带。

高铁血红蛋白（Hi）：呈红褐色，在634nm、578nm、540nm和500nm

处有4条吸收光

市o

第二节红细胞计数

原理

第二节红细胞计数

器材

稀释液

甲醛枸椽酸盐稀释液

Hayem稀释液

稀释液

1.甲醛枸椽酸盐稀释液

成分功能

枸椽酸钠抗凝、维持渗透压

36%甲醛液防腐并固定红细胞

氯化钠维持渗透压

蒸储水

稀释液

2.Hayem稀释液

成分功能

氯化钠调节渗透压

硫酸钠提高相对密度，防止细胞粘连

氯化高汞防腐剂

蒸储水

操作

加稀释液：2.0ml

I

采血：10UI

I

混匀

I

充液

I

静貉：2〜3min

操作

I

计数：高倍镜下中央大方格

五个中方格的RBC

I

计算：

RBC/L=五个中方格的RBC

Z5Z10Z200Z106

报告：RBC：△.AAZ1012/L

请您练习

取稀释液1.99ml,加血10口I,计数中央大格内五个中方格红细胞为500

个，请报告结果？

答案：

RBC=500=5Z10=200=106

=5.00Z1012/L

请您练习

取稀释液2.0ml,加血20口I,计数中央大格内10个中方格红细胞为800

个，请报告结果？

答案：

RBC=800/10=25Z10=(2000+20)/20Z106

=2.02Z1012/L

压线红细胞的计数方法：

注意事项

1,血量要准确。

2.稀释液要过滤。

3.红细胞计数池内要分布均匀。

注意事项

4.实验器材应清洁干燥。

5.自身凝集素增高者，宜用不含甲醛的枸椽酸盐稀释液。

6.同时做白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白测定，应先取红细胞计

数用血。

7.如实记录实验结果，每次签发报告前应仔细核对。

计数误差

1.技术误差

同白细胞计数

白细胞数过高时应进行校正。

2.固有误差

严重贫血的标本，应缩小稀释倍数或扩大计数

范围。

质量控制

1.两差比值评价法

DR=--------------

质量控制

2.变异系数评价法

|Xm-X|

V=----------------Z100

Xm

质量得分=100-（2ZV）

目标形成性检测与校正

请您思考

红细胞计数与白细胞计数方法上有哪些不同？

答案

（1）红细胞稀释液是等渗溶液而白细胞稀释液是低渗溶液。pH也不

相同。

（2）红细胞稀释液不破坏细胞。

（3）稀释倍数不同。

（4）选用计数池区域不同。

（5）计数域误差大小不同。

思考题：

1.试着比较显微镜红细胞计数、白细胞计数、嗜酸性粒细胞计数的异

同。

2.常用红细胞稀释液由哪些成分配成，各有何作用？为什么有的患者

可致浑浊？该怎样处理？

作业

1.测知一Hb含铁量是416mg/L,氧结合量是16.68%,问含血红蛋白

多少？

2.取红细胞稀释液1.98ml,加外周血20HI,混匀后充入计数池，计数

中央大

方格中5个中方格，平均每个中方格的红细胞为80个，试报告该标

本的RBC计数结果。

第三节血红蛋白测定

一、氧化高铁血红蛋白测定

二、其他测定方法

学习目标

叙述血红蛋白HiCN法的原理、操作、注意事项。

说出HiCN转化液的成分及作用。

概述十二烷基硫酸钠.碱羟高铁血红素血红蛋白测定方法。

复习旧课

HiCN的吸收光谱与Hi、HbO2、HbCO、Hbred等的吸收光谱有何不同？

第三节血红蛋白测定

【定义】

Hb测定包括浓度测定和质量测定。本单元是指测定血液中各种血红蛋

白的总浓度，用g/L表示。

第三节血红蛋白测定

【方法】

比密法

氧化高铁血红蛋白测定法

比色法十二烷基硫酸钠法

碱羟高铁血红素法

血氧结合力法

全血铁法

一、氟化高铁血红蛋白测定法

HiCN法：ICSH推荐

WHO确认的参考方法

我国推荐为首选方法

一、氟化高铁血红蛋白测定法

原理

表面活性剂溶解红细胞膜，释放血红蛋白。血红蛋白被高铁氟化钾氧

化

一为高铁血红蛋白（Hi）,在一定的PH值下，Hi与鼠离子（C

N）结合生成稳

定棕红色氟化高铁血红蛋白（HiCN）。HiCN在540nm处有一吸

收峰，测定其吸光度，可求得血红蛋白浓度（g/L）o

一、氟化高铁血红蛋白测定法

一、氟化高铁血红蛋白测定法

试齐U

文齐血红蛋白转化液

氟化钾提供CN离子

高铁氟化钾氧化剂

无水磷酸二氢钾调节pH

TritonX-100

（非离子表面活性剂）加速溶血、防止浑浊

蒸储水

一、氟化高铁血红蛋白测定法

配成后用滤纸过滤，络棕色玻瓶中（不能用塑料瓶！），塞紧后保存于

冷暗处，勿使结冰，可保存数月。

此液应呈透明、淡黄色，pH在7.0〜7.4之间，以蒸储水作空白,

用540nm比色，吸光度应＜0.001。若变浑、变绿或发生混浊则应废弃。

一、氟化高铁血红蛋白测定法

操作

1.取指血20口1,加入5ml转化液中，充分混匀，静络5min。

2.用分光光度计（带宽应小于8um）比色。波长540nm,光径（比

色杯内径）1.000cm,以转化液或蒸储水为空白，测定其吸光度“A”。

一、氟化高铁血红蛋白测定法

操作

加转化液:5ml

I

采血：20UI

I

静貉：混匀后放辂5min

I

比色：X=540nm,比色杯1.000cm,转化液

（蒸储水）为空白，测A值

一、氟化高铁血红蛋白测定法

【操作】

计算：分光光度计符合国际标准

一、氟化高铁血红蛋白测定法

【操作】

分光光度计不符合国际标准时，结果不能直接计算得出，可采用的方

法为：

一、氟化高铁血红蛋白测定法

【操作】

⑴HiCN标准曲线制备

用HICN标准液在所用的分光光度计或光电比色计上，分别测定其吸

光度

（A）,以A为纵坐标，血红蛋白标准溶液的参考值为横坐标，绘制标

准曲线，或求出K值，以后根据测定管吸光度即可在标准曲线上查出Hb

浓度值。

一、氟化高铁血红蛋白测定法

【操作】⑴标准曲线法

一、氟化高铁血红蛋白测定法

【操作】（2）K值法

一、氟化高铁血红蛋白测定法

专用血红蛋白仪测定法

依据氟化高铁血红蛋白比色法的专用血红蛋白仪，采用交流蠕动泵自

动进液排液，流动比色池微量比色，半导体冷光源及光电转换器件，电子

线路采用模拟桥式光电转换。信号经处理放大，送至模/数转换液晶显示器,

直接显示出所测血红蛋白浓度值（g/L）。测试速度快，操作简便，更适

合于临床。

专用血红蛋白仪测定法

操作

按说明调试好仪器。取全血20ul,加入5mlHICN转换液中，混匀,

静

貉5min,吸入仪器测定，待显示屏上的数字稳定不跳动时，此读数即

为该血样的Hb值。

方法学评价

主要优点：

1.操作简便。

2.试剂较稳定，易保存，测定结果稳定。

3.血标本中的血红蛋白(除SHb外)在转化液的作用下能迅速被转

化为HiCN,且HiCN

稳定便于测定。

4.HiCN参考品可长期保存，便于质控。

方法学评价

缺点与不足：

1.试剂含剧毒品氧化钾，使用、处理不当可能污染环境，引起公害。

2.对碳氧血红蛋白(HbCO)转化太慢。

3.不能转化硫化血红蛋白(SHb)。

4.遇高白细胞和高球蛋白血症的血标本会出现浑浊，标本或试剂应

经处理后才能

比色。

注意事项

1.可由指血直接测定，耳血结果偏高。静脉血可按每毫升血

1.5mgEDTA二钠的比例抗凝，不可用肝素抗凝（可致混浊）。

注意事项

2.有条件的单位应校正分光光度计的波长准确性、波长重复性、谱

带半宽度（狭缝）。杂散光、光度线性和比色杯光径。

注意事项

3.专用血红蛋白仪、标准曲线或K值应定期检查、校正。专用血红

蛋白仪零点漂移绝对值超过2g/L,需重新调零。分光光度计必须有良好

的线性才可用K值法。

注意事项

4.转化液（文齐氏液）pH应稳定7.2十0.2,放络在棕色硼硅有塞玻

璃瓶中，20℃室温保存，冰箱保存稳定时间更长，但勿使结冰，不然会使

K3Fe（CN）6失效。

-放白色瓶、塑料瓶和强光照射会使CN下降，结果偏低。

注意事项

5.转化液中KCN是剧毒药品，极不安全，也污染环境。这是HiCN

法的缺点。KCN必须按剧毒药品管理规定保存，在配制和保存过程中应提

高警惕，防止污染。用后废液应分散稀释处理，或按每升加次氯酸钠液35

m1混匀后敞开过夜，使CN一氧化成C02和N2。挥发后，再排入下水道。

注意事项

6.高丙种球蛋白血症、变性血红蛋白血症和白细胞特高的病例都可

出现混浊，可于每升试剂中加氯化钠15g甚至50g防止混浊。

但高浓度有核红细胞所致混浊尚不能防止。

质量控制

1.氟化高铁血红蛋白参考液的纯度检查：

1)波峰540nm,

波谷504nm；

2)A540/A504：1.59〜1.63；

3)A710-800<0.002；

质量控制

2、室内质量控制

将三种已知不同浓度的血红蛋白参考液每日用HiCN法测定一次，连

续

20天；将结果经统计学处理后，作质控图。

质量控制

3.室间质量控制

由临检中心发放质控血红蛋白液，各实验室分别测定其结果，经统计

计算偏离指数、变异值后进行评价。

二、其他测定方法

(―)十二烷基硫酸钠血红蛋白(SLS-Hb)测定法

原理

除SHb外，血液中各种血红蛋白均可与十二烷基硫酸钠作用，生成

SLS-Hb棕红色化合物，SLS-Hb最大吸收峰538nm,波谷在500nm。由于其

摩尔吸光系数尚未确定，不能直接用吸光度换算Hb浓度。一般先用HiCN

法标定新鲜血标本，再用来制备本法的标准曲线。

二、其他测定方法

（二）碱羟高铁血红素（AHD-575）法

原理

AHD试剂为非离子化去垢剂碱性溶液，能使血红素、血红蛋白及其衍

生物全部转化为一种稳定的碱性高铁血红素，在575nm处有一特征性的吸

收峰。

（三）方法学评价

SLS-Hb法操作简便，呈色稳定，试剂中不含KCN,无公害，准确性和

精确性好，但SLS质量差异较大，且试剂成分破坏白细胞，不能同时测定

白细胞数。AHD试剂简单，不含有毒剂，呈色稳定，对光不敏感，室温中

能长期保存。可用氯化血红素作标准品，准确度、精密度较高。但该法的

反应产物的吸收峰位于575nm波长，自动分析仪的选定波长多为540nm,

限制了此法在自动分析仪上的应用。

总结

比色分析的依据是郎伯一比尔定律

Al/A2=C1/C2

NiCN法具有主要优点是：操作简便、结果稳定、试剂易保存、能测定

除硫化血红蛋白（SHb）以外的所有血红蛋白。因而是Hb测定的参考

方法。总结

AHD-575法优点是AHD试剂对光不敏感，放室温中能长期保存，基

本

无毒性。

血液与AHD试剂混合后立即发生溶血，生成橄榄绿溶液色泽稳定。

作业

1.概括HiCN测定的注意事项

2.为何HiCN与AHD-575测定计算公式不同？

第四节红细胞计数和血红蛋白测定的临床意义

一、参考区间

二、生理性变化

三、病理性变化

学习目标

1.说出红细胞计数和血红蛋白测定的参考值

2.简述红细胞计数和血红蛋白测定的生理变化

3.简述红细胞计数和血红蛋白测定的病理变化

复习旧课

红细胞的主要功能有哪些？

答案：

1.运输气体（02、C02）；

2.维持酸碱平衡；

3.运输类脂、蛋白、激素、维生素、碳水化合物；

4.免疫粘附。

新课学习

红细胞的主要成分是血红蛋白，在正常增况下，每个红细胞含有一定

量的血红蛋白。随着红细胞的增多或减少，血红蛋白含量也发生相应

的变化，它们的临床意义基本相同。

在贫血时，由于病因不同，红细胞和血红蛋白降低的程度并非完全平

行。

一、参考区间

血红蛋白(g/L)红细胞数(S1012/L)

成年男性131〜1724.09〜5.74

成年女性113—1513.68-5.13

新生儿180〜1905.2〜6.4

婴儿110〜1204.0〜4.3

儿童120―1404.0~4.5

二、生理变化

1.年龄与性别的变化

二、生理变化

2.精神因素：红细胞及血红蛋白

3.剧烈的体育运动和劳动：红细胞及血红蛋白

4.气压因素：气压低则红细胞及血红蛋白

5.妊娠因素：红细胞及血红蛋白

三、病理变化

(-)红细胞和血红蛋白病理性减少

1.造血原料不足或利用障碍：见于缺铁性贫血；铁粒幼细胞性贫血;

巨幼细胞性贫血等。

2.红细胞丢失过多：各种原因导致的急、慢性失血。

三、病理变化

3.红细胞寿命缩短：见于溶血性贫血。

4.促红细胞生成素（EPO）分泌减少：慢性肾疾病所致的贫血。

5.造血功能障碍：见于再生障碍性贫血、白血病

三、病理变化

（二）红细胞和血红蛋白病理性增多

1.相对性增多血液浓缩，造成红细胞和血红蛋白浓度相对增高。

三、病理变化

2.绝对性增多指血浆容量不变，红细胞和血红蛋白的绝对值增加。

三、病理变化

（1）继发性红细胞生成增多：机体因长期缺氧，刺激促红细胞生成

分泌增多，使红细胞、血红蛋白代偿性增加，

（2）原发性红细胞生成增多：机体并不缺氧，无促红细胞生成素分

增加而红细胞数量持续增多，见于真性红细胞增多症。

目标形成性检测与校正

1.细胞计数池结构下列哪项不对：

A.池内分九大格加盖片后深度为0.1毫米

B.每个大方格长宽为1毫米

C.每个白细胞计数大格分为16个中方格

D.中央大格分25个中方格盖片后每格体积0.04

E.中央大格分为400个小格

目标形成性检测与校正

2.缩小血细胞计数固有误差唯一的方法是:

A.充液前充分混匀

B.提高操作熟练程度

C.提高镜下识别能力

D.多进行此项练习

E.扩大计数范围

目标形成性检测与校正

3.HiCN转化液中KCN的作用：

A.溶血

B.氧化Hb为Hi

C.防腐

D.与Hi结合成HiCN

E.以上都不对

目标形成性检测与校正

4.指出与红细胞不符合的：

A.平均直径7.2um

B.主要成分磷脂，水

C.成熟后无细胞核

D.寿命3-4月

E.具有免疫粘附性

目标形成性检测与校正

5.除哪项外，均可引起RBC,Hb相对增高：

A.反复腹泻

B.排汗过多

C.连续呕吐

D.骨髓功能亢进

E.大面积烧伤

目标形成性检测与校正

6.一种Hb衍生物是棕红色，在540nm波长处有较宽的吸光带,它是:

A.Hi

B.Hbred

C.HbCO

D.HbO2

E.HiCN

目标形成性检测与校正

7.引起RBC和Hb代偿性增高的疾病：

A.肺气肿

B.反复腹泻

C.大面积烧伤

D.真红

E.妊娠期

目标形成性检测与校正

8.某人细胞内铁含量为48.58mg/dL,其Hb含量应为:

A.140g/L

B.130g/L

C.120g/L

D.110g/L

E.100g/L

目标形成性检测与校正

9.Hb属于：

A.白蛋白

B.球蛋白

C.结合蛋白

D.纤维蛋白

E.酸性蛋白

目标形成性检测与校正

10.不符合正常成熟红细胞形态特征是：

A.瑞特染色后呈粉红色

B.两面微凹的圆盘形

C.平均直径7.2U

D.平均厚度2U

E.以上都不是

目标形成性检测与校正

11.不能转化为HiCN的Hb的衍生物是:

A.HbO2

B.硫化血红蛋白

C.Hbred

D.Hi

E.HbCO

目标形成性检测与校正

12.HICN测定，下述哪项有错：

A.波长为540千111171

B.转化液透明淡黄色

C.将外血稀释251倍

D.氟化钾将Fe++>Fe+++

E.HbO2可转化为HiCN

目标形成性检测与校正

13.对于HiCN的描述，有错的是：

A.为Hb衍生物

B.呈棕红色

C.吸收峰在540nm

D.稳定性较差

E.只有一较宽的吸收光带

目标形成性检测与校正

14.下列哪种试剂可用于红细胞稀释液:

A.碳酸钱

B.碳酸氢钠

C.氯化汞

D.铁氟化钾

E.以上都不行

目标形成性检测与校正

15.采用HiCN参考标准液是因为：

A.仪器的差异

B.技术误差

C.操作方便

D.快速

E.以上均不对

目标形成性检测与校正

16.对Hb的描述，除哪一条件，均正确:

A.由4条多肽链组成

B.为结合蛋白质

C.含有4个Fe+++原子

D.每克含铁3.47mg

E.每克结合氧1.39ml

目标形成性检测与校正

17.对于转化液的要求，有错的是：

A.淡黄透明

B.贮存于棕色瓶

C.不能偏碱

D.不宜用塑料瓶装

E.变深后不宜再用

目标形成性检测与校正

18.下述哪种试剂不能用于HiCN转化液：

A.亚铁氟化钾

B.氟化钾

C.磷酸二氢钾

D.TritonX-100

E.O-P乳化剂

目标形成性检测与校正

19.关于RBC正确的是：

A.只需将血液稀释

B.通常稀释20倍

C.在镜下计数四角大格

12D.报告：△.△△=10/L

E.计数域误差较WBC大

目标形成性检测与校正

20.血细胞计数池充液后，数RBC用的中方格体积是:

A.0.4|11

B.0.1|11

C.0.04|11

D.0.01。

E.0.004pl

目标形成性检测与校正

21.RBC液（显微镜计数法）中最主要成分：

A.氯化钠

B.硫酸钠

C.氯化汞

D.氯化低汞

E.碳酸钠

目标形成性检测与校正

22.除哪一条件，均可使RBC的结果偏高：

A.混入酵母菌

B.白细胞过高

C.管尖外血液未擦净

D.稀释液蒸发

E.血液凝固

目标形成性检测与校正

23.HiCN正确的是：

A.高浓度有核红细胞混浊可加NaCl防止

B.OP乳化剂可代替TritonX-100

C.转化液不能偏磴

D.转化液用棕色瓶保存

再见！

第五节网织红细胞计数

一、网织红细胞概述

二、网织红细胞显微镜计数

学习目标

1.描述网织红细胞的形态结构

2.叙述网织红细胞的计数方法和注意事项

3.阐述网织红细胞计数的临床意义

一、网织红细胞概述

（一）概念

网织红细胞：是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间尚未完全成熟的红

细胞，因其胞质中残存的核糖核酸经碱性染料活体染色后呈现蓝色点状或

网状结构。活体染色：是指细胞未经固定，在保持细胞生物活性的

情况下加染料进行染色的方法。

（二）分型及形态特征

I型：丝球型，无核红细胞中央的嗜碱性物质交织成密集的丝团状。

（-）分型及形态特征

II型：网型，无核红细胞中央的丝团状结构开始松散，呈疏松网眼状

结构排列。

（二）分型及形态特征

in型：破网型，网织状结构开始减少，形成残破不全的网状。

（二）分型及形态特征

IV型：点粒型，只有少数蓝色点状颗粒（两个以上），或极小的网状

残余，散布于胞质一侧。

网织红细胞

?|型丝球型

n型网型

m型破网型??

?iv型颗粒型

经瑞特染色复染的网织红细胞形态

二、网织红细胞显微镜计数

原理

煌焦油蓝、新亚甲蓝和天青等染料都是杂葱的衍生物，虽然取代基不

同，但都含有氨基，在水溶液中呈弱碱性，带阳电荷，可与酸性基团发生

电偶合，特别是与核酸分子中的磷酸基结合，使RNA胶体的电位发生变

化，分子间排斥力下降，

胶体分散力降低而凝集成蓝色颗粒。

二、网织红细胞显微镜计数

试齐U

1.10g/L新亚甲蓝（或煌焦油蓝）生理盐水溶液

2.10g/L新亚甲蓝ACD溶液

3.新亚甲蓝染液

试齐I」

1,煌焦油蓝溶液

煌焦油蓝1.0g

枸椽酸钠0.4g

氯化钠0.85g

双蒸水加至100m1

充分振荡溶解，过滤后备用。

试齐I」

2.新亚甲蓝溶液

新亚甲蓝1g

枸椽酸盐生理盐水（30g/L枸椽酸钠溶液1份，9g/L氯化钠溶液4

份，混合

而成）100m1

待染料溶解后过滤备用。

试齐I」

3.天青B溶液

将新亚甲蓝1g改为天青B1g,

其余与新亚甲蓝溶液配制相同。

二、网织红细胞显微镜计数

操作

加试剂：2滴

外周血：2滴

染色：混匀，37℃15-20min

制薄血片：取1滴制片，干燥后镜检

操作

1.试管法

（1）于小试管中加煌焦油蓝溶液2滴〜3滴，加外周血2滴〜3滴，

混匀，塞

紧管口，室温珞15min。

（2）取上述混匀的细胞悬液1滴，推制薄血片。

操作

（3）低倍镜选择细胞分布均匀、着色清晰的部位，于目镜内加一圆

形硬纸，中央开一约4mm=4mm方孔，油镜计数1000个红细胞

（包括网织红细

胞）中网织红细胞数，除以1000,即得网织红细胞分数数（=10—3）。

二、网织红细胞显微镜计数

1.直接计数法

油镜下计数1000个红细胞中的网织红细胞一计算：

2.米勒窥盘法

窥盘为一直径19mm,厚1mm的圆形玻片，玻片上用微细刻线划出

大小两个

正方形格子，图中大方格B的面积是小方格A的9倍。

将Miller窥盘貉于目镜内，油镜计数大方格内的网织红细胞数，同时

计数小方格内的红细胞数。然后移动视野进行同样的观察计数。

对压线的红细胞采取统一的计数原则：凡压小方格下线、右线及右下

角的一律不计数；凡压上线、左线及左上角的一律计数。凡压大方格下线、

右线及右下角的网织红细胞一律不计数；凡压上线、左线及左上角的一律

计数。

注意

由于本法是用1/9面积推断整个大方格内的红细胞数，所以细胞分布

必

须很均匀，否则会得出错误的结果。判断方法及标准如下：

2.米勒窥盘法

当小方格内计数的红细胞达到2111时.，即相当于至少观察了1000个

红细

胞，计录在此过程中计数到的所有网织红细胞数。

请您练习

计数10个视野小方格中红细胞数是120个，同时计数大方格中网织

红细胞

总数为16个，如何报告结果？

解：

网织红细胞％=16/(120Z9)=100

=1.5%

请您练习

计数10个视野小方格中红细胞数是102个，同时计数大方格中网织

红细

胞总数为15个，请报告网红结果？

答案：

网织红细胞％=15/（102=9）=100

=1.63%

1.网织红细胞相对值：百分率或分数数。

2.网织红细胞绝对值：

12红细胞浓度数（10/L）=网织红细胞百分数

3.网织红细胞生成指数（RPI）:

网织红细胞成熟时间与红细胞比积的关系

__________________________________红细胞比容（L/L）网

红成熟时间（天）--------------------------

0.451

0.351.5

0.252

0.152.5

请您练习

己知一患者网红分数数为0.045,红细胞比积为0.35,求网红生成指

数是多少？解：查表得红细胞比积为0.35时，网红成熟时间为1.5

天，代入公式答案：

RPI=0.045/l.5=0.35/0.45

=0.023

注意事项

1.静脉血标本在4小时内完成计数。

2.需活体染色。

3.血液与染液的比1：lo

注意事项

4.染色时间要充足，温度应控制在37℃。

5.涂片应薄而均匀。

6.网织红细胞偏低时可增加计数至2000〜3000个。

7.瑞特染液复染或二甲苯擦血膜可使结果偏低。

临床意义

1.正常参考值

网织红细胞百分数：

成人：0.005-0.015

新生儿:0.03—0.06

儿童：0.005〜0.015

网织红细胞绝对值：

成人：（24〜84）Z109/L

临床意义

2.临床应用

（1）判断骨髓红细胞系增生情况

网织红细胞计数增加：增生性贫血。

网织红细胞减少：再障、白血病等。

（2）观察贫血疗效的指标

（3）监测骨髓移植术后造血功能

（4）监测肿瘤放、化疗后骨髓抑制及其恢复情况

网织红细胞计数增加

表示骨髓红细胞系统增生旺盛，多见于各种增生性贫血。急性溶血性

贫血时，网织红细胞显著升高，其数值可达20%或更高。急性失血性贫血

也较明显增高，缺铁性贫血和巨幼细胞性贫血常仅轻度增高。骨髓受白血

病、癌肿等浸润时也呈不规则轻度增加，此系病理刺激所致，并不反映骨

髓造血机能。

网织红细胞减少

表示骨髓造血机能减退，常见于再生障碍性贫血，某些溶血性贫血发

生

再生障碍危象时可一过性明显减少。

观察贫血疗效

缺铁性贫血和巨幼细胞性贫血用铁剂及维生素B12、叶酸治疗后，网

红

迅速增加，1周左右达到高峰。由于网红增加先于红细胞和血红蛋白

增加，可用于疗效评价。

作为骨髓造血功能恢复的敏感指标

骨髓移植和造血系统恶性肿瘤化疗后，血小板、中性粒细胞、白细胞

和网红计数4项指标在移植后恢复的天数以网红计数出现的最早（13.7天）,

可作为造血功能恢复的早期指标。

嗜多色性红细胞

红细胞中残存的

嗜碱性物质，在瑞特染色血片中，呈均匀分布，染灰蓝、红蓝等，称

为嗜多色性红细胞。

二、仪器计数法

1.流式细胞仪（FCM）进行网织红细胞计数

FCM是高档次的血细胞分析仪，是一种快速的单细胞定量分析仪器,

FCM同CT一样，被认为是现代医学中重要的诊断和科研工具。它可以测

量细胞的生化成分，如DNA、RNA、蛋白质、各种股成分及各种酶活性等。

FCM测定网织红细胞基本原理

某些染料（如Y咤橙）与网织红细胞中的RNA结合，在FCM测定时

发出特定颜色的荧光，进行单参数定量RNA。

不同阶段的网织红细胞RNA的含量不同，通过FCM可以精确的测定

网织红细胞的百分率。

2.自动网织红细胞计数仪

测定原理

血液标本计数前不经固定和染色，标本直接吸入仪器内计数，以氢激

光束为光源，碱性槐黄0为染料与网织红细胞内的RNA结合，应用鞘流原

理使网织红细胞呈单行排列通过波长488nm的激光束，测量散射光强度判

断细胞体积的大小，测量荧光强度显示细胞内RNA多少。

3.血细胞分析仪检测网织红细胞

将仪器转换到网红计数的操作程序，即可得到网红绝对值、百分比、

平均体积、体积分布宽度、血红蛋白浓度、平均血红蛋白浓度、血红蛋白

分布宽度及网红分类等多项参数。

总结

网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，分为四型。正常人外周血中大

多是IV型（点粒型）。

传统的网红检查方法是根据其胞质内残存核糖体、核糖核酸等嗜碱性

物质，经新亚甲蓝、煌焦油蓝活体染色后而显示出来。

总结

检查网红的目的是了解骨髓红细胞系统的增生情况。以判断贪血类型,

观察贫血疗效。因其数量变化十分敏感，可作为骨髓造血功能恢复的敏感

指标。

正常成人参考值为0.005〜0.015

想一想

说出HiCN法测定Hb的优点和不足。

说出红细胞及血红蛋白病理性减少的原因。

什么是网织红细胞？可分为几型？

有何临床应用？

第六节血细胞比容测定

一、温氏管法

二、毛细管法

三、临床意义

学习目标

说出红细胞比容的测定原理、方法和临床意义。

概括红细胞直径测定方法和直径曲线变化的临床意义。能够计算红

细胞平均值并分析临床意义。

定义与方法

一、温氏管法

原理

?

?

?

?定量抗凝血一温氏管f离心f观察压实红细胞高度f求得红细

胞的容积/血液容积：即为Het。器材和试剂操作采血：静脉血2ml,

EDTA-K2或肝素钠抗凝I加样：用细长毛细滴管将抗凝血加至比容管

刻度“10”处操作I

离心：RCF为2264g,时间为30min。

I

读数：红细胞层高度

操作

再离心：同样RCF,lOmin

读数：红细胞层柱高度

计算：Het值

离心后的血液分五层

血浆层

血小板层

有核细胞层

还原红细胞层

带氧红细胞层

注意事项

1.器材清洁干燥。

2.抗凝剂应对红细胞体积无影响且溶解迅速。

3.血浆若有黄疸、溶血现象应注明。

4.离心条件必须恒定。

本试验要求的相对离心力是2264g,离心时间为30分钟。

注意事项

相对离心力(RCF)g

=1.118X10-5=有效离心半径(cm)

=每分钟转速的平方(n2)

有效离心半径是指由离心机轴心至水平位貉时管底的距离(cm)。

例：有效离心半径为22.5cm,要求RCF为2264g时，每分钟离心速度

是：练习

某离心机有效半径是15〃9cm,用作比积测定时其离心速度每秒

应为多少转?解:

亦可由相对离心力计算图查出所需离心速度。

在左侧找出离心半径，右侧找出每分钟转速，将两点连成一条直线,

与中间相交的一点为相对离心力。

二、毛细管法

??原理

定量的抗凝血f特制的毛细管一高速离心机离心沉淀f观察压实的

红细胞层的高度f求得每升血液中红细胞与全血的容积比：即为Hcto

二、毛细管法

器材和试剂

1.专用高速离心机

2.一次性使用的专用毛细管

3.毛细管密封胶

4.刻度读数器

5.抗凝剂：肝素或EDTA-K2

二、毛细管法

操作

准备：抗凝剂处理毛细管

?I

?I

混匀吸血：血液吸入毛细管内60〜65mm处

?封口

二、毛细管法

操作

编号

I

离心：12000r/min,5min。

I

读数：用刻度读数器测量红细胞比容的读数I

计算

注意事项

1.末梢血采血应防止混入组织液。

2.静脉血标本收集后搁络时间不可超过6小时。

3.同一标本的两次测量结果之差不可大于0.015o

4.毛细管不能用烧熔的方法密封。

5.严格控制离心条件。

6.读数应尽量避免视差，不能将白细胞和血小板层的高度算入

三、临床意义

正常参考值

成年男性0.380〜0.508L/L

成年女性0.335〜0.450L/L

儿童0.35—0.49L/L

新生儿0.49〜0.54L/L

微量法较温氏法平均低1%〜2%

临床意义

1.红细胞比容增高

⑴生理性增高：见于红细胞生理性增多的情况。⑵病理性增高：

见于真性红细胞增多症、血液浓缩。临床意义

2.红细胞比容减低见于各种贫血时。

3.红细胞比容可作为计算静脉补液量的指标。

4.红细胞比容可用于红细胞平均值中的计算。

5.红细胞比容可作为判断全血粘度的指标。

临床意义

通过比容测定可决定是否需要静脉输液及输液量。

例：一男性腹泻病人测得HCT为0.62L/L（62%）,问每升血容量应补

液多少升？

解：由0.62=0.49（1+X）得

补液量=0.62/0.49-1

=0.26（升）

总结

1.红细胞比容测定，是将定量的抗凝血貉于比积管中，用一定速度（相

对离

心力2246g）和时间（30min）离心沉淀，由此获得压实红细胞和上层

血浆体积的比值的测定方法。

2.所用抗凝剂不能影响和改变红细胞体积。

总结

3.离心条件要恒定。离心半径不同的离心机转速应测算确定。

4.读取红细胞层的柱高以还原红细胞层表面为准，其毫米数乘以0.01,

即为

每升血液中红细胞体积的升数，以L/L为单位报告结果。

总结

5.HCT参考值随性别和年龄有一定变化幅度。

6.HCT主要用于诊断贫血和判断贫血类型，了解血液粘度，输液时确

定

剂量等。

第七节红细胞直径测量

一、测微计的校正

二、红细胞直径的测量方法

三、临床意义

一、测微计的校正

（一）测微计的组成

1.目镜测微计

为一个直径18〜20mm,圆形玻璃片，中央刻有精确等距离的平行线

刻度，一般有50或100等分格。

2.镜台测微计

是一种特制的载玻片，正中有一圆形盖片封有标准尺，总长为1mm,

被

划分为100等分，每一小格长为10Um。

（二）目镜测微计的校正

1.将目镜测微计有刻度一面向下装入目镜筒。

2.将镜台测微计有刻度一面朝上放在载物台上夹好，使标准尺位于视

野中央。

（二）目镜测微计的校正

3.换用测量被测物所用的物镜头。

4.使两种测微计的刻度平行，先使左边的“0”刻度重合，然后由左

向

右找出寻找另一次重合的刻度。

5.记录两刻度的读数，并根据比值计算出在此条件下目镜测微计每小

格

所相当的长度（um）o

（二）目镜测微计的校正

二、红细胞直径测量方法

红细胞直径测量：即在显微镜下用专用的测微计测量一定数量的红细

胞直径。根据测得直径数据，可计算出红细胞平均直径，绘制红细胞

直径分布曲线（Price-Jones曲线），从而了解红细胞大小的变化，可判断红

细胞形态有无改变，从而对贫血类型的鉴别有一定的意义。

原理

用已经校正目镜测微计，在显微镜下测量一定数量红细胞的直径。求

出红细胞的平均直径（MCD）,并绘制红细胞直径曲线。

【操作】

制备薄血片

选择合适区域

I

测量红细胞直径：200〜500个

I

计算平均直径

I

绘制P-J曲线

P-J曲线

注意事项

1.血片要求厚薄均匀，较白细胞分类血片略薄，红细胞无重叠和皱缩

变

形。

2.应依次测量红细胞直径，不可任意取舍，对异形红细胞，应测量其

长.短径，取其平均值。

3.目镜测微计一经校正，就不得更换物镜。

4.镜台测微计的标准尺因油镜放大而成粗线，目镜测微计放大倍数较

小而呈细线，细线重合在粗线上的位络应前后一致。

三、临床意义

1.正常人及正常细胞性贫血红细胞直径曲线特征红细胞直径范围在

6.0~9.0Um之间，平均直径7.2口m左右；曲线顶峰在7〜8口m之间,

基底部窄，呈尖峰状。

三、临床意义

2.大细胞性贫血红细胞直径曲线特征红细胞直径增大，MCD7.4-

9.6um,曲线顶峰右移，基底部明显增宽，多见于巨幼细胞性贫血等。

三、临床意义

3.小细胞素性贫血红细胞直径曲线特征红细胞直径减少，MCD6.2〜

6.7

口m,曲线顶峰左移，基底部增宽。见于缺铁性贫血和单纯小细胞性

贫血等。

第八节计算红细胞平均值

一、平均红细胞体积

二、平均红细胞血红蛋白含量

三、平均红细胞血红蛋白浓度

四、临床意义

一、平均红细胞体积

平均红细胞体积（MCV）：

是指每个红细胞的平均体积。以飞升（f|）为单位，lL=1015fl。

二、平均红细胞血红蛋白含量

平均红细胞血红蛋白含量（MCH）：

是指每个红细胞内所含血红蛋白的平均量。以皮克（pg）为单位，1g

=1012pg

三、平均红细胞血红蛋白浓度

平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）：

是指平均每升红细胞中所含血红蛋白浓度（g/L）o

四、临床意义

贫血类型MCV(fl)MCH(pg)MCHC(g/L)

正常细胞性贫血正常正常正常

大细胞性贫血＞正常＞正常正常

单纯小细胞性

贫血（正常〈正常正常

小细胞低色素

性贫血（正常（正常〈正常

例题

12红细胞3.6=10/L,红细胞比积0.393L/L,求MCV并判断是否

正常。

解：

1512MCV=0.392=10/3.6=10

=109（fL）

答：由于结果＞92fL,不正常。

例题

红细胞3.6=1012/L。血红蛋白136g/L。求MCH并判断结果正

常与否？解：

MCH=136=1012/3.6=1012

=38pg

答:计算结果＞31pg,不在正常范围内

例题

血红蛋白136g/L,红细胞比积0.392L/L,求MCHC并判断结果是否正

常？解：

MCHC=136/0.392

=347g/L

答：计算结果在正常范围内。

综合练习

己知一患者的红细胞为4.1=1012/L；血红蛋白为128g/L；红细胞比积

为

0.39L/L,求红细胞的三个平均值是多少？

答案：

MCV=0.39Z1015/4.1Z1012

=95fL

1212MCH=128=10/4.1Z10

=31.22pg

MCHC=128/0.39

=328g/L

注意

在正常细胞性贫血时，其红细胞平均直径及其曲线图形与正常相同。

想一想

比较红细胞比容测定的两种方法?

如何校正目镜测微计?

如何根据红细胞数、血红蛋白量和红细胞比容计算红细胞平均值?

如何根据红细胞平均值判断贫血的类型？

目标形成性检测与校正

1.红细胞的三个平均值（MCV、MCH、MCHC）是依据RBC、Hb、HCT

数据按一定方式计

算出来的。根据三个平均值可将贫血按形态学改变分成（

）四种类型。

目标形成性检测与校正

2.MCV通过（）计算单位是（）参考值

（），增大示红细胞（）o

目标形成性检测与校正

3.MCH通过（）计算，单位是

）,

参考值是（）,增加示红细胞中

）,

常与平均值中的（）变化相同。

目标形成性检测与校正

4.MCHC通过（）计算，单位是（），

参考值为（

)o

）o减小示红细胞呈（

目标形成性检测与校正

5.由红细胞直径测定数据绘制的曲线叫（

）0横轴是红细胞的

（）,纵轴是红细胞的百分率。正

常人曲线顶峰在（

）之间。巨幼红细胞性贫血时，曲线顶峰将

（）,基底部明显（）o

第九节红细胞形态检验

一、红细胞大小异常

二、红细胞形态异常

三、红细胞染色异常

四、红细胞结构异常

学习目标

1.描述异常红细胞的形态特点

2.描述点彩红细胞的形态结构

3.概述异常红细胞的主要临床意义

正常成熟红细胞为两面微凹的圆盘形，平均直径7.2口m,厚约2Rm,

无核，经瑞特染色后，红细胞呈粉红色，边缘较深，中央着色较淡。

各种贫血患者，红细胞形态和着色有不同程度的改变，观察成熟红细

胞形态，有助于贫血的诊断和鉴别诊断。

成熟红细胞的形态改变，常见以下几种类型。

、大小异常

1.小红细胞

直径小于611m称小红细胞，正常人偶见。出现较多中央淡染区扩大

的小红

细胞，提示血红蛋白合成减少，多见于缺铁性贫血。

一、大小异常

2.大红细胞

直径大于10nm称为大红细胞，有时中央淡染区不明显，见于巨幼细

胞性贫血。

一、大小异常

3.巨红细胞

直径大于15Um者称巨红细胞，常见于巨幼细胞性贫血。肝脏疾病等。

一、大小异常

4.红细胞大小不均

红细胞之间直径相差一倍以上者称为红细胞大小不均，常见于增生性

贫血及巨幼细胞性贫血。

二、