液相色谱仪使用中常见故障处理及工作原理

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液相色谱仪，在分析仪表中具有、快速、灵敏等特点，应用于生物化学、生物医学、环境化学、石油化工等部门。但是在使用过程中由于多方面因素的影响，会导致液相色谱仪显现故障问题。液相色谱仪常见的故障问题紧要有如下几种：

一、柱压高

缓冲液盐分如（乙酸铵等）沉积于柱内或样品污染沉积。处理对于*种情况先用40～50℃的纯水，低速正向冲洗柱子，待柱压渐渐下降后，相应提高流速冲洗，柱压大幅度下降后，用常温纯水冲洗，之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟；对于第二种情况，由样品的沉积引起污染的C18柱，和纯水反向冲洗柱子，然后换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇（4+6）冲洗柱子（冲洗时间的长短由样品污染的情况而定），再用换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，zui后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。

二、峰拖尾

色谱柱超载时，要削减进样量或稀释样品或使用高溶量的色谱柱；色谱柱性能不佳时，更换色谱柱；死体积或柱外体积过大时，将连接降至zui低，并对全部连接点作合理的调整，尽可能接受细内径的连接；加入硅羟基，其作用是纯化色谱柱，加添缓冲液的浓度，降低流动相的pH值，纯化样品；显现峰干扰时，应清洁样品，调整流动相。

三、压力波动大，流量不稳定

原因系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物，使得两者不能密封。处理工作中注意察看流动相的量，保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底，避开吸入空气，流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物，拆下单向阀，放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。

四、基线产生不规定噪声，

起因于系统不稳定或没达到化学平衡（使其平衡，若用离子对试剂，在使用使需要充分的时间和溶剂体积，色谱柱才能达到充分的平衡），流动相被污染（更换流动相，清洗储液器、过滤器，冲洗并重新平衡系统），色谱柱被污染（为证明可能的原因更换系统的色谱柱或使用一根同类的被证明性能好的色谱柱），检测器不稳定。

五、短期有规定的噪声，

可能起因于泵压不稳或泵脉冲，调整溶剂不适当（如，两种溶剂的互溶性问题），泵入口管路松或堵塞，泵太脏，泵柱塞磨损，检测器不稳定；液相色谱仪的原理结构高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分构成。储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的调配系数；在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附—解吸的调配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分别成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。液相色谱仪系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分构成。储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内；由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的调配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附—解吸的调配过程；各组分在移动速度上产生较大的差别，被分别成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。高效液相色谱法只要求样品能制成溶液，不受样品挥发性的限制，流动相可选择的范围宽，固定相的种类繁多，因而可以分别热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。与试样预处理技术相搭配，HPLC所达到的高辨别率和高灵敏度,使分别和同时测定性质上特别相近的物质成为可能,能够分别多而杂相体中的微量成分。随着固定相的进展，有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分别HPLC成为解决生化分析问题zui有前途的方法。由于HPLC具有高辨别率、高灵敏度、速