【苏氨酸发酵工艺探究综述报告9400字（论文）】

苏氨酸发酵工艺研究综述报告目录TOC\o"1-2"\h\u327031苏氨酸概述 156491.1L-苏氨酸生产方法 129361.2苏氨酸生产菌 2292181.3苏氨酸生物合成途径 2229682苏氨酸发酵工艺 2162942.1培养基成分对苏氨酸发酵的影响 3106181、种子罐培养基优化 410442、发酵罐培养基优化 511060VB族 5213692.2.3pH 7313353展望 831831参考文献 8摘要：L-苏氨酸是一种必需氨基酸，具有非常广泛的应用价值，其需求量增长迅速。发酵法生产L一苏氨酸是目前广泛采用的方法，经过近十多年的发展，中国已经成为全球苏氨酸产量最大的国家，然而全球苏氨酸产能的扩张速度远远大于市场需求量的增长速度，已经形成了产能严重过剩的局面，市场竞争非常惨烈。本文主要是对苏氨酸发酵工艺过程进行综述。关键词：苏氨酸发酵；工艺；综述1苏氨酸概述L-苏氨酸对生物体而言是一种必需的氨基酸，其主要应用在医疗药品、化学品、食品及饲料添加剂等领域[1]。尤其是在牲畜饲料的添加剂领域的需求量增长快速，它经常被添加到未成年仔猪和家禽的食用饲料中，是猪食用饲料的第二限制氨基酸和家禽类饲料的第三限制氨基酸[2-3]。在很长一段时间内，国内外市场对苏氨酸的需求量有一个持续稳定的增长，苏氨酸是需求量涨幅最大的氨基酸品种之一，预计很有可能超过色氨酸成为发展较快的第三大氨基酸[4]。很难想象在20多年之前，那时苏氨酸产业还只是氨基酸中极其小的一部分，当时的苏氨酸的全球产量仅仅在4000吨左右。然而到了2010年，苏氨酸的产量大大提升，其全球总产量早已经突破了20万吨，其增长速度可谓极其迅猛[5-6]。1.1L-苏氨酸生产方法微生物发酵法、蛋白质水解法和化学合成法是L-苏氨酸目前能在技术上实现的生产方法。早在20世纪90年代之前，苏氨酸的生产方法主要有2种，一种是利用微生物发酵生产，另一种是利用化学反应进行合成，伴随着苏氨酸发酵技术的改善突破，现在发酵法被很多苏氨酸生产企业所采用[7-8]。值得一提的是，苏氨酸生产企业和研究学者利用生物工程技术，转接优良菌种基因，提高了发酵菌种的产酸率，从整体上大大提高了苏氨酸生产的效率，降低了苏氨酸的生产成本[9]。目前，国内企业对微生物发酵法生产苏氨酸工艺技术掌握程度不一，大型企业有核心的发酵技术，小型企业发酵工艺相对落后，国内整体而言苏氨酸发酵工艺技术没有大的突破，相对国外缺乏竞争力。如何降低生产成本、提高苏氨酸的产品质量，在激烈的市场中立足成为各大企业必须面对的实际问题。1.2苏氨酸生产菌经过研究者多年辛苦的研究，开发出了丰富多样发酵菌种，主要包含大肠杆菌、粘质沙雷氏菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌等菌株。研究者们对苏氨酸菌种从诱变改造，基因测序及分析，合成代谢途径研究等方面做了大量工作，已经基本掌握了苏氨酸优势菌株的特性，并开发利用这些特性，提高了苏氨酸生产菌株的产酸率，同时在物质能量转化率方面也得到了很大突破。在大肠杆菌遗传图谱的Zerominute处有一个操纵子，它是由基因thrABC序列排列形成的，基因thrA的上游是调控区，转录区方向为A到C。这个操纵子的启动子受到苏氨酸和异亮氨酸的多维抑制，它们的抑制力是逐步递减的。1.3苏氨酸生物合成途径苏氨酸属于天冬氨酸族氨基酸，从天门冬氨酸出发，主要有四个代谢方向，分别可以合成L一苏氨酸、L一蛋氨酸、L一赖氨酸和L一异亮氨酸四种氨基酸，而天门冬氨基酸的生物合成前体是草酞乙酸，所以草酞乙酸是L一苏氨酸合成的关键物质。苏氨酸的生物合成主要有三个关键控制点，第一个反应是由三种天冬氨酸激酶I,II,III>催化进行的。天冬氨酸激酶I是由thrA基因编码，天冬氨酸激酶II由metL基因编码，天冬氨酸激酶III由IysC基因编码，以上三个激酶的活性特点为:激酶III的活性受苏氨酸抑制，苏氨酸和异亮氨酸的协同作用下抑制它的合成;激酶且虽然其活性不受蛋氨酸影响，但它的合成却受到蛋氨酸的抑制;激酶m的活性和合成都受到赖氨酸的抑制。所以，苏氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、赖氨酸对三种天冬氨酸激酶都有反馈抑制作用。thrA和metL基因编码天冬氨酸激酶和高丝氨酸脱氢酶的合成，这两种酶是一个含有个催化区域的多区域蛋白质，它们分别催化苏氨酸合成途径中第一步和第三步反应。第二个反应是由天冬氨酸半醛脱氢酶催化的，该酶是由asd基因编码的。该酶虽然在理论上不受氨基酸的抑制，但高浓度的赖氨酸、苏氨酸和蛋氨酸协同作用可部分抑制该酶。通过研究表明:高浓度的苏氨酸和蛋氨酸可以抑制一半的天冬氨酸半醛脱氢酶活性，而赖氨酸却能够抑制该酶_50倍的活性，目前我们还不清楚这个抑制的分子机制，还有待进一步的研究。另外，葡萄糖一6一磷酸可以影响基因asd的表达，进而影响天冬氨酸半醛脱氢酶的活性。2苏氨酸发酵工艺制取苏氨酸的技术研究最早是从20世纪30年代开始的，那时候已有研究者能够从血纤蛋白中分离得到了苏氨酸，从那时起，苏氨酸的制取与生产技术经历了很长的发展。20世纪50年代有研究者通过添加前体物的方法发酵制取苏氨酸获得了成功。值得一提的是，国外到1960年代后，直接发酵法来生产L-苏氨酸才获得成功。之后的十年，随着基因工程技术的出现，前苏联的科学家成功地运用基因工程菌发酵生产苏氨酸。生物工程技术的发展也使得发酵法生产苏氨酸变得更加经济易实现，早在2007年前，国际上最高产酸能力就已经达到100g/L以上[31,32]。苏氨酸发酵生产技术发展到现在，发酵所用的菌株目前主要是大肠杆菌(Escherichiacoli)[33-34]，(1)通过化学诱变处理，来选育出具有营养缺陷型或抗结构类似物菌株；(2)生产基因工程菌，运用基因工程技术来构造高效的苏氨酸发酵菌种。基因工程技术大大提高了苏氨酸的发酵效率[35-36]。在苏氨酸工业大批量生产过程中，菌种在经过多级培养后接种到发酵罐内进行发酵，发酵过程中，通入无菌空气，持续流加法补充葡萄糖、无机盐等，通过添加氨水来控制罐内PH，通过添加消泡剂防止罐内上层气泡过多而填满发酵罐。当发酵到一定阶段后，菌种处于衰亡期，产酸量将趋于平稳，后对发酵液进行过滤、结晶、提纯等处理，从而得到苏氨酸成品[37]。其中在发酵罐内发酵过程是其中的关键，在这个过程如何维持发酵的高效进行进而提高产酸率一直是研究的重点。2.1培养基成分对苏氨酸发酵的影响2.1.1碳源苏氨酸发酵底物包含很多物质，碳、氮源为菌种发酵所需要的主要物质，它们的浓度高低直接会影响发酵速率，碳、氮源浓度过高对菌体的生长不利，过低会使发酵速度降低[39-40].葡萄糖1990年常尊学等[28]通过亚硝基肌和紫外诱变对黄色短杆菌T6-13定向筛选AHV和AEC抗性突变株和甲硫氨酸营养缺陷性，再继续筛选乙硫氨酸(Eth)敏感突变株得到一株苏氨酸高产菌株ME7,在葡萄糖含量为10%的发酵培养基中，经发酵48h/L-苏氨酸产量达到17.5g/L。2005年王焕章、吴新等[29]人以大肠杆菌为出发菌株，筛选出L-异亮氨酸营养缺陷型菌株，然后再通过基因工程技术，获得高产L-苏氨酸的基因工程菌大肠杆菌THR6，将其发酵32h，产酸达到了75g/L。2.1.2氮源氮源是指能被微生物用于构成细胞物质和代谢产物中氮素来源的营养物质氨基酸因为含有氨基，故在发酵过程中需要大量的氮源。铵盐是发酵中最常用的无机氮源，但NH4+在某些情况下会引起代谢流的偏转，直接影响到菌体的生长和产酸水平[40]。冯志彬等[26]利用正交旋转回归法研究了氮源对L一苏氨酸产量的影响，发现培养基中硫酸按、酵母粉的含量及配比对L一苏氨酸发酵水平有明显的影响，到:硫酸按最佳浓度为17.66g/L,酵母粉最佳浓度为2.51g/L，在lOL他们通过研究得自动发酵罐补料分批发酵38h,L一苏氨酸发酵产酸率可达到119.7g/L，糖酸转化率可达到为47.9%。玉米浆玉米浆是玉米制淀粉或制糖生产中产生的一种副产物，由于国内淀粉糖产量非常大，所以玉米浆也有很大量的产量。关于玉米浆用于微生物发酵培养的报道也比较多，据报道，牛福华、张安红等[32]，通过对玉米浆进行不同工艺的预处理，获得酸化玉米浆、酸水解玉米浆和酶水解玉米浆。2.1.3营养因子黄金[19]等人研究，经过发酵培养36h，细胞菌体量达到29.5g/L，苏氨酸的发酵产酸率达到118.9g/L，另外还发现，乙酸浓度下降到0.8g/L，其他氨基酸也大大降低。主要原因是由于随着HMP途径的代谢流量提高，CO2固定反应代谢流量也提高，TCA循环相对代谢流量提高至17.78%，从而导致苏氨酸对葡萄糖的质量转化率增加。另外也有对产苏氨酸大肠杆菌发酵进行其他调控的，如温度、底物流加、生物素和甜菜碱添加等方面进行的优化。[9,20]甜菜碱张久丽（2018）[58]等人认为甜菜碱作为新型培养基，现已大批使用在氨基酸(谷氨酸、赖氨酸、苏氨酸)发酵培养过程中，甜菜碱是一种从甜菜中发现的生物碱，其分子式为C5H11NO2。主要有维持细胞对酶的保护作用、抗盐持久性等特殊效应。甜菜碱盐酸盐中含有赖氨酸发酵所需大量生长因子，因来自甜菜提取物，并经过精制，所以添加效果要强于甜菜糖蜜，生化反应过程中甜菜碱盐酸盐作为甲基供体提供活性甲基，高半肌氨酸转变为蛋氨酸的过程，能够减少配料中蛋氨酸的添加，有利于降低生产成本。甜菜碱能够保护微生物避免受渗透压激变的影响提高了微生物的成活率，而且甜菜碱与很多催化生物酶具有很好的兼容性，甜菜碱有如此之多好处，引起氨基酸发酵行业人士高度关注，甜菜碱已成为氨基酸发酵的产酸促进剂，成为发酵行业研究的最新课题。1、种子罐培养基优化以赖氨酸菌(黄色短杆菌)为生长菌，研究确定菌种在种子罐快速生长，保持菌种活力，缩短培养时间的氮源配方比例。在种子罐培养基中减少或不添加毛发粉后，因氮源配比数量减少，根据菌种生产需要适当增加其它氮源，我们以玉米浆作为补充，调高玉米浆比例以补充毛发粉减少量。通过试验确定种子罐配料可以不使用毛发粉，增加玉米浆的配料比例，将玉米浆配料比例提高到9%，可实现种子罐OD值快速生长，效果基本与添加毛发粉一致，并缩短培养时间。2、发酵罐培养基优化在发酵罐培养中，当菌种繁殖到一定程度，需代谢赖氨酸。因此我们着力研究经济而环保的培养基原材料。试验生产不使用毛发粉，提高玉米浆在培养基中比例到3.1，不使用甜菜糖蜜，提高甜菜碱在培养基中比例到0.32%，减少蛋氨酸在培养基中的比例，将蛋氨酸添加量降低到0.013%，调整并优化培养基成分，在发酵罐培养中用苏氨酸生产离心工序中产生的母液代替商品苏氨酸用在配料中，节省商品苏氨酸的使用量，商品苏氨酸是固体，而苏氨酸母液是液体，使用苏氨酸母液不但降低了包装与干燥成本，并消化处理了苏氨酸母液，苏氨酸母液末加入发酵时，经常回配系统，增加处理成本。VB族Yue-wenSU（2017）[66]通过添加不同发酵VB族探究其对L苏氨酸发酵生产的影响。使用的维生素B有氯化胆碱(VB4)、烟酰胺(VB3)、泛酸钙(VB5)以及钴胺素(VB12)，实验表明:添加氯化胆碱对L-苏氨酸的促进效果最显著，L-苏氨酸产量达到133.4g/L。VB3对L-苏氨酸发酵促进效果较显著，产量达到130.6g/L。添加甜菜碱盐酸盐、VB4和VB3的混合发酵促进剂，L-苏氨酸产量达到138.4g/L。2.1.4无机盐和微量元素将非金属矿物材料浸渍在无机盐溶液中，是一种方便有效的提高材料吸附能力的方法。王斌(王斌，2009)利用无机钠盐、钾盐和按盐置换麦饭石空隙中的钙、镁离子，并研究了无机盐改性对麦饭石吸附按氮的吸附率的影响。结果表明，无机盐如硫酸钠、氯化钾等中的Na+和K+能够置换麦饭石孔道中的Cat+和Mga+，当改性麦饭石吸附按氮时，这些Na+和K+由于交换能力比Cat+和Mga+更强与(NH4)2S04溶液中大量的NH4+发生交换，从而麦饭石对按氮的吸附率提高；同时还发现了在钠盐中，对麦饭石影响效果从大到小的无机盐顺序为:硫酸钠>>氯化钠>亚硫酸钠>碳酸钠>苯甲酸钠的规律。邓妮等(邓妮等，2014)利用不同浓度氯化钙对硅藻土进行改性并研究了硅藻土的调湿性能。结果表明，改性硅藻土的最大平衡湿含量和吸放湿速率随着氯化钙的浓度提高而明显增大。这是因为钙离子与硅藻土内部的离子发生了离子交换，这能够有效的拓宽硅藻土的平均孔径，促进了水合反应，提高了硅藻土的物理吸附量。在水溶液或在酸预处理中用作催化剂是无机盐最新的天然植物纤维的预处理技术之一，无机盐的加入已被证明可以有效的提高纤维素的产率和半纤维的水解速率(Kangeta1.,2013)，这些有效的无机盐包括NaCI,KCI,CaC12,MgC12,Fe2(S04)3FeCl3和A1C13等，其中对于芒草纤维而言，FeCI:是最有的无机盐，可以替代酸将芒草纤维中的半纤维素溶解成可被水洗掉的低聚糖，Kang等(Kangeta1.,2013)比较了五种无机盐对芒杆纤维的影响，发现三价无机盐的影响最为显著，二价和一价无机盐影响相对较小。Zhang等(Zhangeta1.,2012)用Fe(N03):处理香蒲纤维后，发现以不规则团状形式存在的无定型区半纤维素几乎完全被除去，更多的纤维素暴露出来，相似的情况也发生在Kang等(Kangeta1.,2013)用NH4C1和MgCI，处理后的芒草纤维表面上。将无机盐加入可降解生物基树脂中是一种高效增塑的方法，Kubo等(Kuboeta1.,2009).将Mg(N03):与PVA共混后，发现PVA的结晶度下降；Jiang等(Jiangeta1.,2012)则将MgCI:加入PVA后制成PVA膜并研究了薄膜的热加工和力学性能，结果表明，无机盐的加入使PVA的氢键强度被破坏，PVA的熔点大幅度降低，显著改善PVA的热加工性能。Du等(Dueta1.,2019)提出许多无机盐中的金属离子可以与经基(-OH)上的氧原子相互作用，阴离子可以与-OH上的氢原子相互作用，这两种作用都是非常强烈的，足以破坏氢键，破坏PVA和ST的晶体结构。Jiang等((Jungeta1.,2016)比较了四种不同的亲水性无机盐对淀粉/PVA膜的J陛能影响，研究发现，四种无机盐都对PVA和ST的结晶具有很强的破坏作用，其中A1C1:是对淀粉/PVA影响最大，这是由于铝离子和氯离子和PVA,ST分子链之间有较强的相互作用和亲水性。在Kraus首次提出Cue2+的存在会影响污泥厌氧发酵产气量，人们就开始关注于金属对厌氧发酵过程的影响。1965年，Lawrence等发现硫化物可以减弱重金属对厌氧发酵的毒害作用。1980年，Diekert等人发现Ni元素是细胞质中F430重要组成成分。1988年，Lovley等人提出微生物能量代谢有微量元素Fe或Mn的参加。随着人们对厌氧发酵预处理手段、发酵基质和影响因素等的研究，越来越多的研究着重于微量元素对厌氧发酵的影响。2000年开始，研究者们致力于研究金属对发酵过程、发酵动力学的影响，也涉及到基质模拟、多金属复合污染等方面。2001年，李亚新等人，研究了厌氧发酵过程中甲烷菌所需要的微量金属营养元素的种类和优化组合及它们的最佳投加量，结果表明，厌氧发酵过程甲烷菌的活性会被微量元素激活，最佳微量元素组合和投加量为1.0mgFe/L.d,0.1mgCo/L.d和0.2mgNi/L.d。2011年GunrngA与Pobeheimh研究发现添加适量的镍、钻金属元素可以明显促进微生物对有机物的厌氧发酵。微量元素种类繁多，对于厌氧发酵过程作用机制也不尽相同，所以下文针对具体微量元素强化发酵技术处理畜禽养殖废水研究进展进行综述。2.2培养条件对苏氨酸发酵的影响微生物的生长是一个不断地与外界环境进行物质和能量交换的过程。环境条件会影响着代谢的速度与进程，因此微生物的生长繁殖需要适宜的环境条件。而各种环境条件中，温度、pH和溶解氧对微生物生长起着主要作用。2.2.1温度温度对于发酵的影响也是比较大的。温度为发酵的影响主要表现在三方面上:一是对细胞生长的影响:二是温度对目标产物产量的影响;三是对发酵液的物理性质的影响(如粘稠度等)，从而改变基质溶解程度及溶解氧的传递[66]。而这三个方面直接或间接对目标产物的积累。因此对温度的调控具有十分重要的意义。菌种发酵过程会经历不同阶段，每个阶段对温度的要求不一样，菌种的的繁殖的最快温度不等于发酵过程的最适温度，当然也不是积累某一种代谢所需的产物的最适合温度，寻找菌种的不同阶段产生苏氨酸的适合温度对提高整个发酵效率有很大意义。2.2.2溶氧溶解氧是微生物发酵过程中的诸多影响因素中最容易成为发酵过程的限制因素[58]。这是由于氧气在水中的溶解度较低[59]。在发酵液中溶解氧的变化是由于氧的供需不平衡造成的，控制溶解氧就可以从氧的供需两方面考虑。[60,61]发酵生产L一苏氨酸过程中，在不同阶段的溶解氧不一样。在延迟期时，菌体需氧较少，溶解氧较高，此时不需要增大通气量。到了发酵的对数期后，菌体由于生长繁殖以及产物合成，需要消耗大量的，此时溶解氧下降，必须采取一些措施增大通气量，则促进细胞生长及产物的产量[62-63]。此外还可以采取控制分段供氧模型，徐庆阳[62]等研究溶氧对L-苏氨酸发酵过程中，在延迟期维持20%溶氧，对数期时维持50%溶氧，稳定期时维持溶氧20%，通过l0L罐补料分批发酵36h后产酸达118.9%g/L，糖酸转化率为47.6%。在苏氨酸发酵过程中，菌种对氧气的吸收是菌体繁殖速率的综合体现。发酵过程中提供氧气满足菌种的摄氧速率，使菌种能够持续不断的生产，是发酵过程的一个必要工艺环节[41]。。2.2.3pHpH是L-苏氨酸发酵代谢活动中的综合指标之一，是重要的发酵参数。pH对菌体生长和目标产物的积累具有很大的影响。李丽通过及时监测发酵过程中pH的变化并进行控制可有利于菌体生长和L-苏氨酸的积累。L-苏氨酸发酵生产中常用的pH调控手段有:一、通过补加氨水来调节pH氨水还可以充当氮源使用；二、在发酵培养基中添加碳酸钙作为缓冲剂；三、通过改变补糖速率来控制。3展望长期以来，全球苏氨酸产业蓬勃发展，苏氨酸在国际市场上的需求持续稳定增长，其增长率高达20%以上，是氨基酸产品中需求增长最快的品种之一。苏氨酸在化学与生化方面、食品添加剂方面及饲料添加剂方面的用量增长猛快，将有可能取代色氨酸而成为发展最为迅速的第三大氨基酸。在苏氨酸研究方面，国外的一些国家很早就开始对苏氨酸的合成、分离及应用等方面进行了深入研究，特别是日本在生产苏氨酸方面具有较高的优势。而我国对苏氨酸的研究相对较晚，20世纪90年代前根本没有生产苏氨酸，每年都需要从国外大量进口。通过20多年的努力，国内的苏氨酸产业呈现出欣欣向荣气息。伴随着苏氨酸多领域的广泛应用，市场生命力旺盛，国内涌现出一大批的企业将投向苏氨酸产品的研制开发中。随着发酵技术和分离工艺的逐渐成熟，与国外的差距慢慢的缩小。其中包括吉林大成、广东星湖等一批企业，他们通过引进和自主研发想结合，先后成功研发发酵法生产苏氨酸，并建立大型的生产线。目前，国内用于发酵生产的苏氨酸生产菌基本上是基因工程菌，使苏氨酸产量有了十分明显的提高，但其发酵工艺较为落后，对苏氨酸发酵工艺的研究不够深入，尤其是在对环境条件方面的研究。工业发酵法生产制取苏氨酸是一个复杂的过程，仅在发酵这一阶段就对工艺的要求非常高，大型苏氨酸发酵罐设备的设计与工艺制定需要考虑很多因素。通过对研究结果的分析以及实际发酵过程中深入，发现研究存在一些不足，由于自身因素以及其它外部因素，未能继续深入，在此列出一些研究问题和思路，以供后来学者能更好的研究。（1）由于发酵罐模型巨大以及计算机的计算条件有限，对苏氨酸发酵罐的模型进行了相关简化，未对局部的流场进行研究，研究罐内局部位置是否存在不利于发酵的流场环境值得注意。(2）进行小型苏氨酸发酵试验，由于发酵周期长，也限于企业公司限制，很多地方未能深入研究，包括流加补料的策略研究、发酵过程更高的溶氧发酵效果的研究、转速通气对发酵效果的研究等。参考文献[1]刘元涛，刘树海.L一苏氨酸性质、应用、生产及市场现状[J].发酵科技通讯，2010,39(03):52-54.[2]蔡友华，严杰能，陆最青.L一苏氨酸工业研究进展[J].广东饲料，2012,21(12):26-28.[3]DebabovVG.TheThreonineStory[J].AdvancesinBiochemicalEngineering/Biotechnology,2003,79(1):113-136.[4]王健.中国氨基酸产业现状[J].生物产业技术，2014,(04):17-22.[5]贾冬舒.苏氨酸市场现状及发展前景[J].饲料广角，2006,(01):28-30.[6]徐铮奎.苏氨酸产业:中国能量重构市场[N].医药经济报，2014-11-21(005).[7]黄金，徐庆阳，陈宁.L一苏氨酸的生产方法及研究进展[J].河南工业大学学报(自然科学版),2007(05):88-92.[8]LeuchtenbergerW，HuthmacherK，DrauzK.Biotechnologicalproductionofaminoacidsandderivatives:currentstatusandprospects[J].AppliedMicrobiology&Biotechnology,2005,69(1):1-8.[9]冯烁.L一苏氨酸的生产工艺[J].饲料博览，2010(06):20-23.[10]冯珍泉，董吉子，董力青.苏氨酸发酵过程中自动化控制系统的应用[J].发酵科技通讯，2012,41(03):35-36.[11]张春.L一苏氨酸生产菌的选育及其发酵条件的优化[D].吉林农业大学，2011.[12]周茜.L一苏氨酸生产菌的构建及发酵优化[D].天津科技大学，2016.[13]杨雪，张彦飞，郑阳阳，马红武.大肠杆菌苏氨酸合成途径动力学模型的构建与分析[J].生物工程学报，2014,30(01):18-29.[14]宋金礼.发酵罐内搅拌过程的数值模拟与参数优化[D].大连理工大学，2015.[15]樊梨明，李庆生，卢建新.发酵罐内流场的数值模拟及桨叶优化[J].轻工机械，2016,34(03):30-33+38.[16]黄志坚，邹晨，吴亮，谢明辉.发酵罐用搅拌设备的防染菌的结构设计[J].北工与医药工程，2015,36(05):56-59.[17]罗宇笛，李啸，石小丹.采用计算流体力学仿真优化SOL发酵罐搅拌系统[J].天津农业科学，2015,21(05):46-50.[18]常尊学，李福德.L一苏氨酸产生菌选育的研究[J].沈阳药学院学报，1990,7(3):185-188.[19]Yamada.ProcessforproducingL-threoninebyfermentationwithPrettgeriU.S.A:5342766[P].1994-08-30.[20]KramerR.Geneticandphysiologicalapproachesforproductionofaminoacid[J].JBio-technol,1996,45(1):1-21[21]FurukawaS,OzakiH.,KotaniY,etal.BreedingofL-threoninehyperproducerofEscherichiacoliK12[J].BiochinBiophysResCommun,1988,18:788-795.[22]黄金，徐庆阳，陈宁.L一苏氨酸的生产方法及研究进展[J].河南工业大学学报，2007,28(5).[23]KomatsubaraS.Transductionalconstructionofathreonine-producingstrainofSerratiamarcescens[J].ApplEnvironMicrobiol,1979,38(6):1045-51[24]Man-HyoLee.imrovedL-threonineproductionEscbericbiacoilmutantbyoptimizationofcultureconditions[J].JournalofBioscienceandBioenginerring,2006,101(2):127-130[25]JeongWookLee.Developmentofsource-utilizingEscbericbiacoilK-12strainbycloningp-fructofuranosidasesanditsapplicationfor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