3.2基因工程的基本操作程序原创课件高二下学期生物人教版选择性必修3_第1页
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第三章基因工程13.2基因工程的基本操作程序第四步

目的基因的检测与鉴定2基因表达载体的构建3将目的基因导入受体细胞4目的基因的检测与鉴定1目的基因的筛选与获取基因工程培育抗虫棉的思路：苏云金杆菌提取Bt抗虫蛋白基因导入棉花细胞抗虫棉Bt基因表达23①目的基因是否进入受体细胞？②受体细胞的染色体DNA中是否插入了目的基因(DNA)？③目的基因是否转录（mRNA）？④是否有翻译产物（蛋白质）？⑤是否赋予了生物个体新性状？筛选含有重组质粒的受体细胞检测与鉴定分子水平个体水平第四步：检测和鉴定目的基因进入受体细胞后，是否稳定维持和表达其遗传特性。4①目的基因是否进入受体细胞？筛选含有重组质粒的受体细胞插入目的基因自身环化a.重组质粒b.空质粒酶连接注：仅有少数质粒能进入受体细胞，使细胞转化A.导入重组质粒C.未导入质粒B.导入空质粒青霉素X-galA含有重组质粒的大肠杆菌菌落B含有空质粒的大肠杆菌菌落C不含质粒的大肠杆菌菌落生长生长不生长白色蓝色AmpR：检测质粒是否进入大肠杆菌LacZ：区分空质粒（蓝色）和重组质粒（白色）【实例】蓝白斑筛选5②受体细胞的染色体DNA中是否插入了目的基因(DNA)？检测与鉴定PCR等技术方法：过程：1）设计引物2）模板DNA的制备提取植物基因组DNA或总DNA;检测时要有阳性和阴性对照,

阳性对照可用质粒DNA，

阴性对照可从未转基因的植株中提取。3）PCR反应4）电泳结果分析6②受体细胞的染色体DNA中是否插入了目的基因(DNA)？检测与鉴定PCR等技术方法：过程：结果示例：7【练一练】B②受体细胞的染色体DNA中是否插入了目的基因(DNA)？检测与鉴定(2019·江苏高考真题）为鉴定筛选出的菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒，拟设计引物进行PCR鉴定。图2所示为甲、乙、丙3条引物在正确重组质粒中的相应位置，PCR鉴定时应选择的一对引物是__________________________8【练一练】乙丙②受体细胞的染色体DNA中是否插入了目的基因(DNA)？检测与鉴定9③目的基因是否转录（mRNA）？检测与鉴定PCR等技术方法：过程：RT-PCR（逆转录PCR）以植物总RNA或mRNA为模板进行逆转录，然后再经PCR扩增。如果从细胞总RNA提取物中得到特异的cDNA扩增条带，则表明外源基因实现了转录。10④是否有翻译产物（蛋白质）？检测与鉴定抗原-抗体杂交技术方法：过程：②Western杂交从转基因生物中提取出蛋白质，用相应的抗体进行抗原－抗体杂交，若出现杂交带，则表明目的基因已形成蛋白质产品。①酶联免疫吸附法（ELISA）11⑤是否赋予了生物个体新性状？检测与鉴定观察是否赋予个体生物新的特性或抗性方法：转基因生物鉴定方法成功标志抗虫植物抗病毒（菌）植物抗盐植物抗除草剂植物获取目的基因产物的转基因生物饲喂害虫（抗虫

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