液质AB3500操作规程

一、开关机

AA、开机

1.打开UPS电源，打开氮气发生器（气瓶），确认Curtaingas的输入

压力为0.4MPa,gasl/2为0.7MPa,exhuast为0.4MPa。

2.打开机械泵电源开关（5500系列直接打开质谱主机电源，仪器自动

启动机械泵）

3.等机械泵工作至少30min

5.打开质谱主机电源开关

6.过夜抽真空

BB、关机

L停止输液：关停针泵或液相泵，或断开输液管线（一般质谱主机

Standby后液相系

统也自动待机，输液泵自动关停，但建议操作人员再次确认，必须保

证没有任何液体

再泵入质谱）

2.使仪器待机，并灭活配置

2.关闭质谱仪主机电源开关（5500系列只需按下电源开关旁的VENT

按键排放真空）

3.机械泵继续工作至少30min

4.关闭机械泵上的电源开关

5.关闭气体发生器或气瓶

二.仪器校准与调谐

本节包括如何在Analyst软件中进行手动质量校准，一般仪器在开

关机后才需要做调谐或每个季度例行调谐。

11、打开analyst软件，双击HardwareConfigure,在硬件配置

HardwareConfigure菜单下单击massSpecOnly（只连质谱机），单

击Activeprofile激活仪器。硬件配置表中massSpecOnly出现绿勾后,

表示质谱仪主机与计算机通讯正常，关闭HardwareConfiguration

Editoro

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3、双击左边工具菜单NavigationBar中的ManualTuning,打开

一个空白质谱参数设置及运行窗口，进入手动调谐模式：

由信O:U，TuneanlCalrtxateMode-fl@•■XIB-Q$

rp%IT'S；P小丹入a

4、在project工具条中选择installation--开头的项目文件夹

5、点击Fileopen

ALAnalyst-[TuneMethodEditor]

心FileEditViewAcquireToolsExploreWindowScriptHelp

TuneandCalibrateMode▼Q0[

*SS晶qX归[T|\-p

Acquire...Start□RampParameter

Source/GasCompoundResolutionDetector

DeclusteringPotential(DP)2oT：f

EntrancePotential(EP)10.0a

CollisionEnergy(CE)

CollisionCellExitPotential(CXP)[^1|

6、选择AcquisitionMethod打开四极杆校准方法文件列表（如:

QIPosPPG.dam,QINegPPG.dam,Q3PosPPG.dam,Q3NegPPG.dam方

法文件，文件名有可能不同)。

根据要校准的目标（QI正离子、Q1负离子、Q3正离子、Q3负离子）

选择相应的方法打开。

Files:

口

API150EX

口

API2000

口

1API3000

1API3200

API4000

UlNegrru.dam

到QIPosPPG.dam

闽Q3NegPPG.dam

匐Q3PosPPG.dam

金］ReserpineMSMS.dam

API5000

LITNegPPG.dam

LITPosPPG.dam

QINegPPG.dam

QIPosPPG.dam

Filesoftype:AcquisitionMethod(x.dam)

Browse...IOK||Cancel

7、该方法会出现在质谱参数设置及运行窗口：

由昌3Tseand31txMeMode.C@APIInstrument•・Xm―旧法

1、P

8、用针泵进质量校准溶液，调离子源喷雾针位置到5mm处。对于

不同仪器、测定极性，要用不同的PPG校准溶液，针泵流速10ul/min

9、采集PPG标准品质谱数据：在质谱参数设置及运行窗口中点击

Start,数据采集时在窗口下部出现两个实时数据图：左边TIC（总离

子流图），右边质谱图。待采集完成后，点击

resolution,再点击advanced,弹出分辨率窗口，再在右边质谱图中

按鼠标右键出现一菜

单，选菜单中Openfile：

具条下点击Calibratefromspectrum按钮

f。体徨入AV

1)

11>在出现的MassCalibrationOptions窗口中,从Standard下拉菜

单选择合适的标准品

类型：PPGsPos（正离子）或PPGsNeg（负离子）；然后点击

12、仪器校准

结果图中有三栏：上栏显示此次校准与理论值的质量偏差（mass

shift）,中栏显示所有PPG校准峰的半峰宽（分辨率），下栏显示此

次校准与上次校准所有PPG校准点峰强度变化的百分比。

AA、手动调整分辨率

目标是让每个数据点都应该落在两条虚线之间，如果某些PPG峰宽

超出分辨率范围，应进行手动调整。

调整Offset值会影响分辨率，以中心实线为基准，半峰宽偏大的调

大offset值（考虑正负），半峰宽偏小的调小offset值（考虑正负），

对Offset值调整幅度为每次0.003,改变offset值以后按Apply钮。

关闭当前其他窗口回到采集窗口，重新点击start采集数据（在开始

采数据时按Yes确认要保存这些修改），重复9-12步直到所有点的分

辨率合乎分辨率范围

B、质量校正

当offset值设定合适，所有PPG离子的分辨率在俩虚线范围内后,

进行最后的质量校准。再采集一次PPG数据（重复9到11步）;在Mass

CalibrationReport按Updatemasscalibration按钮进行更新，软件

系统会提示是否用新的校准曲线替换已存在的校准曲线，当出现提示

时，回答“YES”

版K刖，g

三.化合物参数优化

本节描述如何用针泵连续进样(10ul/min),在ManualTuning窗口下优

化化合物参数。

11、找母离子：QIMS全扫描

A^选择你的project；双击NavigationBar下的Manual--Tuning；

从ScanType下拉菜单中选择：QIScan(Q1)；选择极性：Positive(正

离子)、Negative(负离子)；勾选Center/with选项；设置采集时间

Duration:5min；在表格中Center(Da)栏填入待优化化合物的分子

量,With(Da)栏填6,Time(sec)填1；左侧Source/Gas项用以下推

荐值:CUR10,5:5500(正离子)或-4500(负离子),TEMGS115,GS2

0,iheon；Compound项用以下推荐值：DP60,EP10或默认值;

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署CknecOraoucogoonyMSL

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B、运行针泵(lOul/min)，点击start采集数据，待左侧窗口TIC序号

稳定后再继续采

集lmin,点击stop,在TIC图上按住鼠标左键托选最后lmin谱图，

再双击选中的谱

图，在下方弹出窗口记录目标化合物峰的中心对应的横坐标分子量作

为该化合物的准

确分子量。

2、找子离子：ProductIonScan(MS2)

A、在当前方法文件的ScanType下选择ProductIonScan(MS2)；

去除Center/with选

项；在Productof栏填入上一步找到的母离子的准确分子量；在表格

中start(Da)栏填50,

stop(Da)栏填入质量大于母离子分子量即可，Time(sec)填1；

检查Source/Gas项是否与Q1扫描时相同(CAD默认值即可)；

Compound项设定DP60,EP10或默认值，CE5,CXP15或默认值；

B、点击start采集数据，手动调节CE值（每次增加5）,直到右侧质

谱图中母离子的信号约

只有最强碎片离子信号三分之一左右，再保持继续采集lmin,点击

stop,在左侧TIC图上按住鼠标左键托选最后lmin谱图，再双击选中

的谱图，在下方平均谱图中记录两个最强的碎片离子分子量。

3、优化离子对参数：MRM

A、在当前方法文件的ScanType下选择MRM；在表格中Q1栏填母

离子分子量，Q3(Da)栏子离子分子量，Time(msec)填50,ID栏填

化合物名称(信号强的离子对名称后空格加1,信号弱的为2),每个

离子对填一行；检查Source/Gas项是否与Q1扫描时相同(CAD默认

值即可);

B、点击EditRamp钮，出现以下窗口，在parameter下拉菜单里选

择DP,用默认值，点击

0K.

C、点击start开始优化，在右侧质谱图上记录峰轮廓最高的位置对应

的横坐标的DP值，填入Compound的DP项。

D、点击EditRamp钮，在parameterF拉菜单里选择CE,用默认值,

点击OK,点击start开始优化，采集结束后在右侧质谱图上按鼠标右

键并选择相应的离子对，记录其峰轮廓最高的位置对应的横坐标的

CE值，再在上方表格内点击鼠标右键选择CE单击，表格中则会显示

不同离子对的CE值一栏，填入刚才记录的各离子对的最优CE,最后点

击菜单Filesave即可保持该化合物参数，填入方法名称即可.

SaveAcquisitionMethod

四、建立LC--MS方法（以岛津液相为例）

1、开HPLC电源,将HPLC系统接上柱子，将出口管线与离子源连

好。调离子源喷雾

针位置到2mm处,双击HardwareConfigure,在硬件配置菜单下单击

4000+LC（液相

与质谱联用），单击Activeprofile激活仪器。

2、选择你的Project；双击Buildacquisitionmethod,弹出方法模板。

在模板左侧

点击acquisitionmethod,模板右边显示对应的参数，确认

synchronizationmode选择

LCSynco

©以。&@X电ClDU，A«)i»reMode•£5@APIInstrumert-■XGB-[B庄

3、点击方法模板左侧的MRM,在模板右侧ScanType下选择MRM；

在polarity下选择化合物极性：Positive（正离子）、Negative（负离子）;

Duration处填写与液相分离相同的时间；在

表格中Q1栏填母离子分子量，Q3（Da）栏子离子分子量，Time（msec）

填50,ID栏填化合物名称（信号强的离子对名称后空格加1,信号弱

的为2）,在表格中右键分别点击DP、EP、CE、CXP,填入之前优化

好的DP、CE；最后点击Editparameter设置离子源参数：Source/Gas

项用以下推荐值：CUR25,05500（正离子）或-4500（负离子），TEM

550,GS155,GS2

55,iheon；

4、点击模板左边的shimadzuLCsystem,在右边的pumps栏下，设置

pumpingmode为binary

flow,total流速0.2-0.5,泵系统最大压力；在timeprogram栏下设置

液相梯度。最后点击

保存按钮保存此方法并关闭方法窗口。

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五、建立采样列表

1、双击Buildacquisitionbatch,在右边窗口sample项内点击addset,

再点击add

sample,在弹出的窗口内的number（进样样品数）处填入需要进样

的样品个数，点

ok

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2、在加入的样品列表内依次设置samplename（样品名称）、rackcode

（样品架类型）、viaposition（样品瓶的位置）、acquisition下拉菜单

内选择之前建立的LC-MS方法、inj.volunme（进样体积）。

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3、在quantitation项下，在每个样品后的下拉菜单内选择样品类型,

标准曲线选standard,待测样品选unknown。

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4、在submit项下点击submit按钮以提交样品序列。

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