NY∕T 402-2016 脱毒甘薯种薯（苗）病毒检测技术规程_第1页
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2016-11-01发布2017-04-01实施中华人民共和国农业部发布I——NY/T402—2000。1NY/T402—2016脱毒甘薯种薯(苗)病毒检测技术规程本标准适用于脱毒甘薯种薯(苗)的甘薯羽状斑驳病毒(Sweetpotatofeatherymottlevirus,脱毒组培苗vifg-freetissuecultureplant由茎尖分生组织培养获得的末受甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)、甘薯潜隐病毒(SPLV)、甘薯G病2.23检测对象23.3甘薯G病毒(SPVG)。≤10000株100株>10000株3NY/T402—2016用NCM-ELISA或指示植物法进行检测，其中10%以上(含)样品分别利用PCR和RT-PCR方法检测。带毒率为0。用NCM-ELISA或指示植物进行检测，其中5%以上(含)的样品分别利用PCR和RT-PCR方法检用NCM-ELISA或指示植物进行检测，其中1%以上(含)的样品分别利用PCR和RT-PCR方法检测。SPFMV、SPLV、SPVG和SPCFV的带毒率≤10.0%,SPCSV和Sweepoviruses的带毒率为0,病毒病显症率≤5.0%。4在800mL无菌蒸馏水电溶解292.2gNaCl,定容至1L。4℃保存备用A.1.6封闭缓冲液O工5NY/T402—2016将干燥后的膜浸入封闭缓冲液中，室温下摇床振荡1h,50r/min。将膜置于用抗体缓冲液稀释至工作浓度的病毒特异性抗体溶液中，室温下摇床振荡10h～12h,50用洗涤缓冲液洗膜4次每次摇床振荡3mn.80r/minA.3.5与二抗反应A.3.8终止反应工67正向引物BM-V:5'-KSGGGTCGACGTCATCAATGACGTTRTA8PCR扩增体系具体如下：dNTP(2.5mmol/L)ExTaqDNA聚合酶(5U/pL)总体积PCR扩增程序为：预变性预变性复性延伸充分延伸扩增产物用于后续凝胶电泳试验。35个循环C.3.3PCR产物的电泳检测制备1.0%琼脂糖凝胶板(见C.1.3。在电泳槽中加入TAE电永缓冲液。每仁样品取10μLPCR产物与10μL10×加样缓冲液混合后，加入到凝胶孔中进行电泳恒压(120w150V)下电泳20min～30min,将凝胶放到凝胶成像系统上观察结果。C.3.4试验成立的条件PCR产物经电泳检测，阳性对照在预期大小(2800bp)的位置出现特异性条带过时，阴性对照和空白对照均没有出现预期大小的特异性条带C.3.5结果判定应用本标准的检测方法对待检样品进行检测，如果在2800bp对应位置出现特异性条带，则判定样品为Sweepoviruses病毒阳性，否则判定样品为该病毒阴性9D.1.1DEPC水和C.1.3。0.5μLD.3.3PCR扩增

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