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李属坏死环斑病毒检测规程Criterionforprunusnecroticringspot布发2015-08-01实施I本标准按照GB/T1.1—2009给出的规12取样酶标仪(配405nm滤光片),恒温培养箱(温度可调范围0℃~40℃),生物培养箱(具光照、温度可调范围0℃~50℃),电子天平(感量为0.01g、0.0001g),酸度计。微量移液器(200μL～1000μL,碳酸氢钠(NaHCO₃)2.93g无水磷酸二氢钾(KH₂PO₄)3.1.3.5样品提取缓冲液(GEB,pH7.4,贮藏于4℃)2NaN₃3同3.1.4.3。每孔加入100μL配制好的底物溶液。酶标板用保鲜膜包好放入湿盒中21℃~24℃下蔽光显色30β=|OD4o5-1-OD4o5-2|/(OD₄₀5-1+OD₄o5-2)×2×100(OD₄05-1和OD₄o5-2为同一试样重复的吸光称取0.252gNa₂SO₃溶于预先配制好的0.01mol/LPBS缓冲液(称取0.8g氯化钠，0.02g氯化每检测样品的指示植物栽植数量≥5株。于专用隔离温室，将健康种子播种于经过消毒的富含有机质土壤的花盆中，盆间距50cm×50cm,待有4真叶～6真叶后准备接种。栽植环境条件为温度为20℃~25℃,光照时数为12h。将待测样品按1:3(g/mL)的比例与接种缓冲液混合研磨，用细纱布过滤匀浆液，在1000g~10000g下离心10min～15min后取上清液。接种时，在3.2.3准备的指示植物叶面撒少量600目金指示植物接种2个~3个叶片且只接种一个样品，并设阳性对照(带毒植株)、阴性对照(健康植株)和空4中文名

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