云南省玉溪市新平一中2025届高三二诊模拟考试生物试卷含解析

云南省玉溪市新平一中2025届高三二诊模拟考试生物试卷请考生注意：1．请用2B铅笔将选择题答案涂填在答题纸相应位置上，请用0．5毫米及以上黑色字迹的钢笔或签字笔将主观题的答案写在答题纸相应的答题区内。写在试题卷、草稿纸上均无效。2．答题前，认真阅读答题纸上的《注意事项》，按规定答题。一、选择题(本大题共7小题,每小题6分,共42分。)1．将人的红细胞移入低渗溶液后，很快吸水膨胀而溶血，而水生动物的卵母细胞在低渗溶液中不膨胀。后来科学家从人的红细胞的细胞膜上成功分离出一种具有通道作用的蛋白质——水通道蛋白，下列相关叙述正确的是（）A．水分子从低渗溶液单方向进入高渗溶液中B．人的红细胞与水生动物的卵母细胞的吸水方式相同C．人的红细胞通过水通道蛋白吸收水的速率大于自由扩散吸收水的速率D．红细胞吸水膨胀是因为组成细胞膜的磷脂和蛋白质分子都具有流动性2．老鼠毛色有黑色和黄色之分，这是一对相对性状。请根据下面三组交配组合，判断四个亲本中是纯合子的是（）交配组合子代表现型及数目①甲（黄色）×乙（黑色）12（黄）、4（黑）②甲（黄色）×丙（黑色）8（黑）、9（黄）③甲（黄色）×丁（黑色）全为黑色A．甲和乙 B．乙和丙 C．丙和丁 D．甲和丁3．研究人员找到一种抗体，可让急性髓性白血病细胞成熟为完全不同的细胞——免疫系统中呈抗原的树突细胞。树突细胞如长时间暴露于该抗体下，再加上特定的培养条件，还能进一步分化为与自然杀伤（NK）细胞（该细胞识别靶细胞是非特异性的）高度相似的细胞——诱导NK细胞。下列相关叙述中，正确的是（）A．在二次免疫中，抗体可由浆细胞与记忆B细胞合成并分泌B．免疫系统是由免疫器官与免疫细胞组成C．浆细胞识别抗原具有特异性，而NK细胞非特异性识别抗原D．白血病细胞、树突细胞以及NK细胞形态与功能不同的根本原因是mRNA不同4．某沿海区域的海藻林群落中生长着各种大型海洋褐藻，为大量的鱼类、贝类和无脊椎动物等提供食物和栖息场所。在其中生活的海獭通过捕食关系对不同种类海胆的数量起到一定的控制作用。近年来，海獭被大量捕杀，海胆数量激增，从而大量捕食海藻，海藻林衰退，导致整个群落被严重破坏。下列相关叙述不正确的是（）A．海獭的捕食作用是决定该海藻林群落结构的重要因素B．不同季节的光照等条件不同，也会导致该海藻林中动物的垂直分布发生变化C．由于人类对海獭的捕杀，使得该群落结构简单化，其发展方向与自然演替不同D．人类活动对群落的影响要远远超过其他所有自然因素的影响5．某雄性动物的基因型为AaBb。下图是其一个精原细胞减数分裂过程中的两个不同时期细胞的分裂图像。相关叙述正确的是（）A．甲细胞处于减数第二次分裂，称为次级精母细胞，细胞中含有6条染色单体B．四分体时期发生染色体结构变异，导致A和a出现在姐妹染色单体同一位置C．图示该精原细胞整个减数分裂过程中，细胞中最多时可能含有四个B基因D．该细胞经减数分裂形成的四个精子，其基因型可能分别为AB、Ab、ab、aB6．下列关于种群特征的叙述，正确的是（）A．种群性比例变大，则出生率变大B．“J”型增长曲线中也存在死亡的个体C．人为淘汰某种群生殖后期的个体，可提高种群的出生率D．年龄结构通常分为生殖前期、生殖期和生殖后期7．分解代谢是异化作用的别称，是生物体将体内的大分子转化为小分子并释放能量的过程，呼吸作用是异化作用的重要方式。下列叙述错误的是（）A．呼吸作用可以完成稳定化学能向活跃化学能的转换B．运动员比赛过程中，CO2的产生量一定多于O2的消耗量C．富含脂肪的种子萌发时，CO2的产生量可能少于O2的消耗量D．不同有机物经过一系列的氧化分解可能生成相同物质8．（10分）某自然保护区内共同生活着两种鼠科动物：社鼠和中华姬鼠，它们均主要以嫩叶及种子为食，在春季还辅以部分土壤昆虫为食。林中的普通鵟会捕食鼠类，社鼠与中华姬鼠的种群数量变化如图1所示，图2为该地区小型地栖鼠丰富度沿海拔的变化。下列相关叙述正确的是（）A．两种鼠之间为竞争关系，两者的K值在2016—2019年间均逐年降低B．在夏秋季，如果普通鵟体重增加1kg，则最多需要消耗100kg植物C．中华姬鼠的种群数量达到K值时，种内斗争最激烈，种群的增长速率也最大D．该地区小型地栖鼠丰富度随海拔的升高而逐渐增大，中度海拔种群密度一定大于低海拔二、非选择题9．（10分）正常人血浆中的LDL（一种低密度脂蛋白）可以与细胞膜上的LDL受体结合，再通过胞吞作用进入细胞。LDL在细胞内水解，释放出胆固醇。家族性高胆固醇血症是一种单基因遗传病（由A、a基因控制），患者血浆中LDL数值非常高，易忠心脑血管疾病。如图是某患者的家族系谱图，已知Ⅱ4不携带该病的致病基因。回答下列问题。（1）人体内胆固醇的作用有___等。（2）与正常人相比，患者细胞膜表面的LDL受体数量最可____（填“偏多”或“偏少”）。（3）控制家族性高胆固醇血症的基因位于____染色体上，判断依据___________。II3的基因型是___，理由是____。10．（14分）某多年生高等植物为XY型性别决定，其花的颜色受两对等位基因控制，且两对基因均不位于Y染色体上。A或a基因控制合成蓝色色素，B或b基因控制合成红色色素，不含色素表现为白花，含有两种色素表现为紫花。为研究其遗传机制，某同学选取一蓝花雌株和一红花雄株作为亲本进行杂交，F1表现为紫花雌株：蓝花雄株=1：1。回答下列问题：（1）控制蓝色色素合成的基因是_____________，蓝花雌株体内，只有花瓣细胞才呈现蓝色，根本原因是___________________________。与B基因相比，b基因碱基数较少而控制合成的蛋白质中氨基酸数目较多，原因可能是b基因中缺失部分碱基对，引起__________________。（2）为解释上述杂交结果，该同学提出了两种假设。假设一：B基因控制红色色素的合成且该对基因位于X染色体上，A、a基因位于常染色体上。假设二：_______________________________________________________________。为验证哪一种假设正确，以上述亲本或F1为实验材料，设计杂交试验方案实验方案：________________________________________________________________。若假设二正确，则预测实验结果为______________________________(不考虑交叉互换)。（3）现已确定假设一正确，欲以上述亲本或F1为实验材料，简单快速的培育出白花植株，应选择基因型为____________的植株作为亲本进行杂交，后代中白花植株所占比例为___________。11．（14分）萝卜的蛋白A具有广泛的抗植物病菌作用，而且对人体没有影响。我国科学家欲获得高效表达蛋白A的转基因大肠杆菌作为微生物农药，做了相关研究。（1）研究者用相同的_________酶处理蛋白A基因和pET质粒，得到重组质粒，再将重组质粒置于经_________处理的大肠杆菌细胞悬液中，获得转基因大肠杆菌。（2）检测发现，转入的蛋白A基因在大肠杆菌细胞中表达效率很低，研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好，因而设计了与蛋白A基因结合的两对引物（引物B和C中都替换了一个碱基），并按图2方式依次进行4次PCR扩增，以得到新的蛋白A基因。①这是一种定点的_________技术。②图2所示的4次PCR应该分别如何选择图1中所示的引物？请填写以下表格（若选用该引物划“√”，若不选用该引物则划“×”）。_____引物A引物B引物C引物DPCR1PCR2PCR3PCR4（3）研究者进一步将含有新蛋白A基因的重组质粒和_________分别导入大肠杆菌，提取培养液中的蛋白质，用_________方法检测并比较三组受体菌蛋白A的表达产物，判断新蛋白A基因表达效率是否提高。为检测表达产物的生物活性，研究者将上述各组表达产物加入到长满了植物病菌的培养基上，培养一段时间后，比较_________的大小，以确定表达产物的生物活性大小。（4）作为微生物农药，使用时常喷洒蛋白A基因的发酵产物而不是转蛋白A基因的大肠杆菌，其优点是_________。12．人们通过基因工程和胚胎工程技术，将人的乳铁蛋白基因转入山羊细胞中，并通过乳腺生物反应器，从乳汁中获取人乳铁蛋白。以下为相关流程图，请回答下列问题：（1）构建基因表达载体的目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以_______，同时，使目的基因能够_______________________。（2）将基因表达载体导入山羊某细胞常用的方法是_________，图中山羊某细胞通常为_____，该细胞作为基因表达载体的受体的原因是_______________________________________。（3）进行动物早期胚胎体外培养时，培养液中应含有无机盐、维生素、氨基酸、激素等营养成分和___________等。早期胚胎一般发育到_________时期，被移植到受体母羊体内。为提高效率，可对胚胎进行性别鉴定，以选取_______(填公或母)羊。

参考答案一、选择题(本大题共7小题,每小题6分,共42分。)1、C【解析】

据题意可知，水生动物的卵母细胞在低渗溶液不膨胀。而红细胞细胞膜上有一种水通道蛋白，在低渗溶液中，很快吸水膨胀而溶血，说明水的吸收与水通道蛋白有关。【详解】A、水分子的进出是双方向的，但总体是低渗溶液进入高渗溶液中，A错误；B、人的红细胞吸水与水生动物的卵母细胞的吸水方式不同，B错误；C、人的红细胞存在水通道蛋白介导的协助扩散，在低渗溶液中很快就吸水涨破，可知人的红细胞通过水通道蛋白吸收水的速率大于自由扩散吸收水的速率，C正确；D、红细胞吸水膨胀是因为存在水通道蛋白介导的协助扩散，D错误。故选C。2、D【解析】

1.相对性状中显隐性的判断：（1）亲代两个性状，子代一个性状，即亲2子1可确定显隐性关系；（2）亲代一个性状，子代两个性状，即亲1子2可确定显隐性关系。所以亲2子1或亲1子2可确定显隐性关系，但亲1子1或亲2子2则不能直接确定。2.后代分离比推断法：（1）若后代分离比为显性：隐性=3：1，则亲本的基因型均为杂合子；（2）若后代分离比为显性：隐性=1：1，则亲本一定是测交类型，即一方是杂合子，另一方为隐性纯合子；（3）若后代只有显性性状，则亲本至少有一方为显性纯合子。【详解】根据交配组合③：甲（黄色）×丁（黑色）→后代全为黑色，说明黑色相对于黄色为显性性状（用A、a表示），且甲的基因型为aa，丁的基因型为AA；根据交配组合①甲（黄色）×乙（黑色）→后代出现黄色个体，说明乙黑色的基因型为Aa；根据交配组合②甲（黄色）×丙（黑色）→后代出现黄色个体，说明丙的基因型为Aa，由此可见，甲和丁为纯合子。综上所述，D正确，A、B、C错误。故选D。3、D【解析】

免疫是指身体对抗病原体引起的疾病的能力。人体有三道防线，保护自身免受外来病原体的侵袭。第一道防线是体表的屏障，第二道防线是体内的非特异性保护作用，第三道防线是免疫系统的特异性免疫反应，特异性免疫反应又分为细胞免疫和体液免疫。【详解】A、记忆B细胞不能分泌抗体，A错误；B、免疫系统是由免疫器官、免疫细胞和免疫活性物质组成的，B错误；C、浆细胞不能识别抗原，C错误；D、白血病细胞、树突细胞以及NK细胞形态与功能不同的根本原因是mRNA不同（遗传信息相同），是基因的选择性表达的结果，D正确。故选D。4、D【解析】

1、群落的空间结构：（1）垂直结构：植物群落的垂直结构表现垂直方向上的分层性，其中植物的垂直结构决定了动物的垂直分层。（2）水平结构：水平方向上由于光照强度地形明暗湿度等因素的影响，不同地段上分布着不同的生物种群。2、群落演替：随着时间的推移，一个群落被另一个群落代替的过程。主要类型：初生演替和次生演替。【详解】A、根据题干信息“近年来，海獭被大量捕杀，海胆数量激增，从而大量捕食海藻，海藻林衰退，导致整个群落被严重破坏”，可见海獭的捕食作用是决定该海藻林群落结构的重要因素，A正确；B、光照条件是决定海藻林植物群落的垂直结构表现垂直方向上分层的重要因素，植物的垂直结构决定了动物的垂直分层，B正确；C、由于人类对海獭的捕杀，使得该群落结构简单化，其发展方向与自然演替不同，C正确；D、人类活动对群落的影响不一定超过其他所有自然因素的影响，如火山喷发，D错误。故选D。【点睛】本题考查群落的特征及群落的演替过程，要求学生的识记和理解群落的垂直结构及影响因素及次生演替和初生演替的区别，试题难度一般。5、D【解析】

分析题图：图示是其一个精原细胞减数分裂过程中的两个不同时期细胞分裂图象，这两个细胞都不含同源染色体，前者出于减数第二次分裂前期，后者处于减数第二次分裂末期。【详解】A、甲细胞中含4条染色体，每条染色体含有2条染色单体，因此该细胞含有8条染色单体，A错误；B、四分体时期染色体发生交叉互换，由此引起的变异属于基因重组，B错误；C、由于该细胞的基因型是AaBb，只含有1个B基因，所以在减数分裂过程中，由于复制，细胞中最多含有两个B基因，C错误；D、该细胞经由于发生了交叉互换，所以减数分裂形成的四个精子，其基因型分别为AB、aB、Ab、ab，D正确。故选D。【点睛】本题需要考生分析出图中细胞所处时期，关键点是看出细胞发生了交叉互换。6、B【解析】

种群的特征：

（1）数量特征（核心问题）：

①种群密度：种群最基本的数量特征；

②出生率和死亡率、迁入率和迁出率：决定种群数量变化的主要因素；

③年龄结构和性别比例：预测种群数量变化的主要依据（一般根据年龄结构）

（2）空间特征：指组成种群的个体，在其生活空间中的位置状态或布局。

（3）遗传特征：遗传的单位，繁殖的单位【详解】A、种群性比率变大，则出生率变小，种群密度相应变小，A错误；

B、“J”型曲线存在与理想条件下，但生物的寿命是有限的，故其增长曲线中也存在死亡的个体，B正确；

C、通过淘汰某种群生殖后期的个体，可改变种群的年龄组成，使其成为增长型，但短期内种群的出生率不一定提高，C错误；

D、年龄结构通常分为增长型、稳定型、衰退型三种类型，D错误。

故选B。【点睛】本题考查种群的特征和种群数量变化的相关知识，意在考查考生的识记能力和理解所学知识要点，把握知识间内在联系，形成知识网络结构的能力；能运用所学知识，准确判断问题的能力，属于考纲识记和理解层次的考查。7、B【解析】

有氧呼吸和无氧呼吸的比较：类型有氧呼吸无氧呼吸必需条件氧气和酶不需要氧气，但必有酶的催化场所细胞质基质（第一阶段）

线粒体（第二和第三阶段）细胞质基质物质变化①1分子C6H12O6和6分子O2和6分子H2O在酶的作用下生成6分子CO2和12分子H2O

②ADP和Pi在酶的作用下生成ATP①1分子C6H12O6（葡萄糖）在酶的作用下生成2分子C3H6O3（乳酸）和少量能量

或

1分子C6H12O6（葡萄糖）在酶的作用下生成2分子C2H5OH（酒精）和2分子CO2和少量能量。

②ADP和Pi在酶的作用下生成ATP能量释放产生大量能量产生少量能量特点有机物彻底分解，能量完全释放有机物氧化没有彻底分解，能量没有完全释放联系①第一阶段完全相同

②实质相同：分解有机物，释放能量

③无氧呼吸进化成有氧呼吸。【详解】A、通过呼吸作用将有机物中稳定化学能转换成热能和ATP中活跃的化学能，A正确；B、运动员比赛过程中，主要进行以消耗糖类的有氧呼吸和产生乳酸的无氧呼吸，有氧呼吸CO2产生量等于有氧呼吸O2的消耗量，B错误；C、富含脂肪的种子萌发时，以脂肪作为呼吸底物，由于脂肪中含氢的比例较高，可能O2的消耗量多于CO2的产生量，C正确；D、不同有机物经过一系列的氧化分解最终可能都生成二氧化碳，并且释放出能量产生ATP，D正确。故选B。8、B【解析】

分析图1，社鼠与中华姬鼠之间存在着“此消彼长”的竞争关系。分析图2：小型地栖鼠类丰富度随海拔的升高，逐渐增大，在中度海拔达到最大，海拔进一步升高，丰富度又逐渐降低。【详解】A、据图分析可知，两种鼠之间为竞争关系，在2016—2019年间社鼠的K值逐年降低，中华姬鼠的K值保持稳定，A错误；B、在夏秋季植物→鼠→普通鵟这条食物链中，如果普通鵟体重增加1Kg，最多消耗植物能量传递效率按10%计算，故最多需要消耗植物=1÷10%÷10%=100Kg，B正确；C、中华姬鼠的种群数量达到K值时，种内斗争最激烈，种群的增长速率为0，C错误；D、分析图2可知小型地栖鼠类丰富度随海拔的升高逐渐增大，在中度海拔达到最大，海拔进一步升高丰富度逐渐降低，且图中只能得知丰富度的大小，不能判断种群密度大小，D错误。故选B。二、非选择题9、构成细胞膜的重要成分参与血液中脂质的运输偏少常I1是患病父亲，但生有Ⅱ2健康女儿；Ⅱ3是患病母亲，但生有Ⅲ2健康儿子AaⅡ3和Ⅱ4生有患病儿子和健康儿女，而Ⅱ4不携带该病的致病基因，说明Ⅱ3是个杂合子【解析】

1、胆固醇：构成细胞膜的重要成分，参与血液中脂质的运输。2、根据题意和识图分析可知，I1是患病父亲，但生有Ⅱ2健康女儿，说明不是伴X显性遗传，图中母亲Ⅱ3患病且后代的儿子Ⅲ2表现正常，则该病不属于伴X隐性遗传病，又由于Ⅱ4不携带该病的致病基因，而后代中Ⅲ1儿子患病，故该病为常染色体显性遗传病。由于后代中Ⅲ2表现正常，因此图中的Ⅱ3基因型为Aa。【详解】（1）根据以上分析可知，胆固醇属于动物细胞膜的成分，能够参与血液中脂质的运输。（2）根据题意，血浆中的LDL（一种低密度脂蛋白）可以与细胞膜上的LDL受体结合，再通过胞吞作用进入细胞。LDL在细胞内水解，释放出胆固醇。家族性高胆固醇血症患者血浆中胆固醇的含量较高，说明患者血浆中的LDL进入细胞内的少，因此可能是患者细胞膜表面的LDL受体数量偏少。（3）根据以上分析可知，I1是患病父亲，但生有Ⅱ2健康女儿；Ⅱ3是患病母亲，但生有Ⅲ2健康儿子，且Ⅱ4不携带该病的致病基因，因此该病属于常染色体显性遗传病。由于后代中Ⅲ2儿子表现正常，因此母亲Ⅱ3的基因型为杂合子Aa。【点睛】本题考查胆固醇的作用和遗传病的分析的知识点，要求学生掌握遗传系谱图的分析，识记常见的人类遗传病的特点，能够结合图示和题意判断该遗传病的遗传方式，这是突破该题的关键，然后利用基因分离定律的知识点推导相关个体的基因型，识记胆固醇的作用，能够根据题意的条件判断患者血浆中胆固醇含量高的原因。10、A基因的选择性表达相应信使RNA中终止密码子延迟出现B基因控制合成红色色素且该对基因位于X染色体上，A、a基因也位于X染色体上取F1中紫花雌株与蓝花雄株杂交，观察子代表现型及比例（取F1紫花雌株与亲本红花雄株杂交，观察子代表现型及比例）子代表现为蓝花雌株：紫花雌株：蓝花雄株：红花雄株=1∶1∶1∶1（子代表现为紫花雌株：红花雌株：蓝花雄株：红花雄株=1∶1∶1∶1）AaXBXb、AaXbY1/8【解析】

位于两对同源染色体上的等位基因在遗传的过程中遵循基因的自由组合定律。根据题干蓝花雌株和一红花雄株作为亲本进行杂交，F1表现为紫花雌株：蓝花雄株=1：1，可知控制颜色的基因有一对位于X染色体上。【详解】（1）蓝花雌株和一红花雄株作为亲本进行杂交，后代雌株均为紫色，说明控制红色这个基因位于X染色体上，且为显性基因B，那么控制蓝色的基因位于常染色体上，且为显性A。蓝花雌株体内，只有花瓣细胞才呈现蓝色，根本原因是基因的选择性表达。与B基因相比，其控制合成的蛋白质中氨基酸数目较多，而b基因碱基数较少，原因可能是b基因中缺失部分碱基对，引起相应信使RNA中终止密码子延迟出现。（2）依据题干可知该植物为XY型性别决定，其花的颜色受两对等位基因控制，且两对基因均不位于Y染色体上，又根据其杂交情况可知，有一对为与X染色体上。则假设一B基因控制红色色素的合成且该对基因位于X染色体上，A、a基因位于常染色体上；假设二B基因控制合成红色色素且该对基因位于X染色体上，A、a基因也位于X染色体上。取F1中紫花雌株与蓝花雄株杂交，观察子代表现型及比例（取F1紫花雌株与亲本红花雄株杂交，观察子代表现型及比例），若子代表现为蓝花雌株：紫花雌株：蓝花雄株：红花雄株=1∶1∶1∶1（子代表现为紫花雌株：红花雌株：蓝花雄株：红花雄株=1∶1∶1∶1），则假设二正确。（3）若确定假设一正确，欲以上述亲本或F1为实验材料，简单快速的培育出白花植株，选择基因型为AaXBXb、AaXbY的植株作为亲本进行杂交，后代中白花植株所占比例为1/4X1/2=1/8。【点睛】对于题干的正确理解是解答本题的第一步。当然，在求解的过程中要充分考虑各种情况，如这里就要注意当有两对同源染色体，确定有一对位于X染色体上的时候，那么另一对，可能是X染色体上，也可能为与常染色体，若题干没有强调没有在Y染色体上，那么还要考虑在Y染色体上的可能。11、限制酶和DNA连接CaCl2基因突变引物A引物B引物C引物DPCR1√√××PCR2××√√PCR3××××PCR4√××√含有蛋白A基因的重组质粒、空质粒（pET质粒）抗原-抗体杂交抑菌圈对人、畜、农作物和自然环境安全；不会造成基因污染；有效成分纯度较高【解析】

（一）基因工程的基本工具1、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。2、“分子缝合针”——DNA连接酶（1）两种DNA连接酶（E•coliDNA连接酶和T4DNA连接酶）的比较：①相同点：都缝合磷酸二酯键。②区别：E•coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶来源于T4噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端，但连接效率较低。（2）与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键．DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。3、“分子运输车”——载体（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。（2）最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。（3）其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒。（二）基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的获取1、目的基因是指：编码蛋白质的结构基因。2、原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成．人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。3、PCR技术扩增目的基因（1）原理：DNA双链复制（2）过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链；第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链；第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。第二步：基因表达载体的构建1、目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。2、组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因（1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。（2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。（3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来．常用的标记基因是抗生素抗性基因。第三步：将目的基因导入受体细胞1、转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。2、常用的转化方法：将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是农杆菌转化法，其次还有基因枪法和花粉管通道法等。将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术．此方法的受体细胞多是受精卵。将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少，最常用的原核细胞是大肠杆菌，其转化方法是：先用Ca2+处理细胞，使其成为感受态细胞，再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。3、重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。第四步：目的基因的检测和表达1、首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子杂交技术。2、其次还要检测目的基因是否转录出了mRNA，方法是采用用标记的目的基因作探针与mRNA杂交。3、最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原——抗体杂交。4、有时还需进行个体生物学水平的鉴定，如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。【详解】（1）在基因工程中，利用相同的限制酶和DNA连接酶处理蛋白A基因和pET质粒，得到重组质粒；大肠杆菌作为受体细胞，需要用氯化钙处理，以便重组质粒的导入。（2）①根据题意和图示分析，经过4次PCR技术后获得了新的基因，这是一种定点的基因突变技术。②与研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好，因而设计了与蛋白A基因结合的两对引物（引物B和C中都替换了一个碱基），因此4次PCR应该分别选