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II米糠中阿魏酸提取工艺研究摘要:阿魏酸(FerulicAcid)最早发现于植物的叶子和种子中,是一种广泛存在于植物体内的酚酸,能与植物细胞壁内的蛋白质和多糖结合,成为细胞壁骨架,自然界中很少以游离态形式存在。阿魏酸拥有较好的生物活性与药理作用,因此在保健品、医药领域和化妆品原料等方面拥有很高的应用价值。米糠中的阿魏酸含量比较高,是一种理想的提取阿魏酸的材料。本实验探究了米糠提取阿魏酸的工艺条件,采用乙醇提取法进行单因素实验,研究温度,醇浓度,料液比和提取时间对阿魏酸提取率的影响。最终确定米糠中阿魏酸提取最佳工艺条件是乙醇浓度70%,温度60℃,提取时间1.5小时,料液比为1:8,在此条件下,阿魏酸的提取率为2.92mg/g。采用D101大孔树脂对提取液进一步进行分离。D101大孔树脂的最佳吸附条件为上样溶液质量浓度0.25mg/ml、上样量4BV和pH=6;最佳解吸附条件为60%乙醇作为洗脱溶剂,洗脱流速为5BV/h,洗脱溶剂量为5BV。本实验对米糠中阿魏酸的提取分离条件进行了初步的探索,为米糠资源的有效利用提供了科学依据。关键词:米糠;阿魏酸;乙醇提取;单因素实验;大孔树脂分离目录TOC\o"1-3"\h\u15554文献综述 1121101前言 6326472材料与方法 6151192.1实验材料、试剂与仪器 6279802.2实验方法 6247712.2.1紫外分光光度法检测阿魏酸含量的标准曲线的建立 6160402.2.2D101大孔树脂洗脱条件考察 649322.2.3阿魏酸的提取 7262032.2.4米糠中阿魏酸提取工艺的优化 7263873结果与分析 8130263.1D101大孔树脂最佳吸附、洗脱条件 8270333.2紫外检测阿魏酸的标准曲线 8210703.3乙醇的最佳提取浓度 978203.4最佳提取温度 104913.5最佳提取时间 11117653.6料液比的影响 11235754结论 1223776参考文献 13文献综述1米糠的研究概述米糠是水稻生产初加工的副产品,具有丰富的营养价值,其蛋白质与脂肪含量较高,被誉为当今最新的天然超级食品。另有研究还发现,米糠包含大量多糖、复合维生素、β-谷甾醇、植物甾醇、天然纤维及维生素B等健康营养物质。我国米糠资源位列全球第一,但米糠的深加工程度还有所欠缺。相比起一些发达国家40%~80%的加工量,我国仅占10%~20%的米糠加工量就显得比较少,且目前大部分的米糠资源被用做动物饲料。米糠中包含较多的稻谷的营养成分以及许多机体必须元素,所以有着“天然营养宝库”的称呼,是一种具有极大开发前途的二次加工资源。其中,米糠油可以抗高血脂、降低胆固醇、抗氧化、预防癌症以及维护人体健康;米糠植酸拥有较好的抗氧化性,而且它不具有毒性,非常安全,并且有抗静电的作用;米糠蛋白具有非常低的过敏性,是所有已知的杂粮中过敏性最低的蛋白。但米糠主要被当作动物饲料来使用,易酸败不易储存,营养价值和资源效益未得到充分发挥,造成极大的资源浪费。如果对米糠进行更深度的加工,则可以获得高价值的米糠油、米糠植酸、米糠蛋白等提取物,又有利于饲料的储存和动物的吸收与消化,一举多得。因此,米糠的资源利用及提取工艺肯定会成为我国粮食生产方面的一个新亮点[1]。2阿魏酸的概述阿魏酸的化学名称是4-羟基-3-甲氧基肉桂酸,主要来源于伞形科植物阿魏的根。分子式是C10H10O4,它的分子结构则如图1所示,分子量是194.18。图1阿魏酸的化学结构式阿魏酸多和低聚糖、多胺、脂类还有多糖等物质结合成结合态,存在于植物细胞壁当中,并且几乎不以游离态的形式存在。在麦麸等谷物类食品的原材料当中含量较大,在阿魏、川芎、酸枣仁、当归及升麻等中药材之中的含量也比较大。阿魏酸具有许多独特的功能,是一种十分有价值的生物活性物质,它可作为抗氧化剂,同时又是抗炎症因子,可以从食物中摄入,通过胃和大小肠吸收并通过肝脏来代谢,具有抗氧化、降血脂、抗突变、抗菌消炎及防癌等特性。阿魏酸能够清除体内过量ROS来发挥抗氧化的作用,或者直接去除自由基或者产生自由基的酶,来防止血小板聚集、血栓素样物质散发,从而达到抗血栓的效果。另外,阿魏酸还可以通过抑制肝脏胆固醇的合成,从而起到降低血脂的作用,达到防止动脉粥样硬化、防治冠心病等功效。另有研究表明,阿魏酸对一些细菌或病毒有抑制作用,具有抗菌消炎的功效,还有抗辐射、提高精子活力、免疫调节及治疗男性不孕不育等作用[2]。3阿魏酸的生理作用3.1抗辐射作用辐射能导致人体器官衰竭,其作用机制为在一定程度上引发慢性过氧化的机体损伤。辐射对人的身体造成的损害可划分为直接的与间接这两种,直接损伤是由于辐射能直接导致细胞里面一些脆弱的分子断开;间接损伤则是通过水的辐解,引起细胞中活性氧上升,进而导致亚细胞结构的变化。对于辐射损伤的治疗,通常广泛使用抗氧化剂。阿魏酸作为一种酚类的植物成分,具有很强烈的抗氧化活性,对机体的健康有较大的积极调节作用。阿魏酸通过显著提高受辐射的细胞中的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸和谷胱甘肽的含量,从而产生抗辐射保护作用。血红素甲氧酶具有很好的抗氧化作用,它能够先将亚铁血红素转变为胆绿素,最终再转变为抗氧化剂胆红素。阿魏酸对该酶的表达具有较强的调控作用,因此能在辐射防护中起到良好的效果[3]。3.2抗氧化作用所有生命体的都在进行新陈代谢,而新陈代谢过程中产生的活性氧类物质和自由基对人体各种组织器官具有不良作用效果。这两种物质都与癌症的产生有很大关系,能够改变生命体的DNA,激活机体内的原癌基因,从而导致癌症的形成。想要防治相关疾病,就要采取降低抗氧化损伤等有效举措。阿魏酸能抑制生命体中产生自由基的酶的活性,同时激活产生与消灭自由基相关的酶。另外,阿魏酸能增大醌还原酶、谷胱甘肽转硫酶的活性,减少活性酪氨酸酶的比例。Kawabatta等和Kayahara等研究证明,阿魏酸能大大增加谷胱甘肽转硫酶和醌还原酶的活性,抑制酪氨酸酶活性[4-5]。实验研究还发现,阿魏酸能保护因体内产生的一氧化氮、羟自由基造成的细胞损伤。3.3抗菌,抗病毒作用近年来,相关文献亦有关于阿魏酸抑制病毒的报道。阿魏酸对艾滋病病毒有抑制作用,其作为艾滋病防治药物研究也在不断开展中。相关文献表明,阿魏酸对病毒的抑制机理与它可以降低黄嘌呤氧化酶的活性存在关系[6-7],也与抑制部分炎症的发生有关联。阿魏酸具有对许多细菌的抑制作用[8],能抑制宋内氏志贺氏菌、大肠杆菌、柠檬酸杆菌、绿脓杆菌等致病性细菌和许多种与食品腐败相关的微生物的产生。除此之外,阿魏酸还有消炎[9]、抗血栓[10]等作用。4阿魏酸的提取方法4.1碱溶液提取法阿魏酸为弱酸性物质,故在氢氧化钠等强碱中可溶,遇酸能够析出,可转溶于有机溶剂中,因此可针对这种特性对其进行提取分离。欧仕益[11]等采取碱法提取麦麸中的阿魏酸,确定提取温度为85℃,氢氧化钠浓度为0.5%,提取时间为6h的碱解麦麸内的阿魏酸的提取条件为最优工艺条件。4.2乙醇提取法乙醇提取法的原理在于乙醇具有较好的极性范围,根据相似相容的原理,大部分的化合物在乙醇中都具有较好的溶解性。用溶剂乙醇对有效成分的提取和分离的方法在化工提纯、化学实验、化学制药和中药剂的制取等方面广泛应用。朱萍等采用正交试验法,以乙醇用量、提取时间、乙醇浓度、提取次数为验证因素,选取阿魏酸含量和出膏率为考察指标,优化得到丹倍消瘢软膏中阿魏酸的提取工艺。研究表明,该工艺稳定、重复性好,适用于大生产[12]。4.3超声提取法超声提取的原理是超声的热效性、空化效应以及机械作用。实际应用该方法时,是通过加快细胞内部物质的释放、扩散和溶解,达到提升提取效率的目的效果。空化现象的产生与作用机理为当强烈的超声波对介质产生作用时,介质将会被撕裂成为成百上千的小的空穴,他们能够瞬时闭合,同时爆发出高达几千大气压的压力,导致植物细胞壁和完整的生物体在一瞬间破裂,从而使破碎时间极大缩短。同时,超声波能够产生振动作用,加速细胞内部成分的释放、扩散以及溶解,从而极大提高提取效率。王荣繁[13]等使用超声波法提取川楝子(Meliatoosendan.etZucc.)中的阿魏酸,采用HPLC法检测阿魏酸的含量,并确定了优化超声提取条件为:体积比为95:5的甲醇-甲酸为溶剂,料液比为1:30(m:V,g/mL),提取温度55℃,提取时间为30min,提取次数为2次,最高提取率达0.0126mg/g。5阿魏酸的纯化5.1大孔吸附树脂法大孔吸附树脂纯化的原理是大孔树脂具有较强的吸附能力,通过氢键和范德华力使相应的物质吸附于大孔树脂上,在一定的洗脱液溶剂环境中,这种结合力减弱,吸附的物质被洗脱液洗脱下来,从而达到纯化的效果。大孔树脂是一种人造的具有多孔立体网状结构的吸附剂,是在其他吸附剂应用的基础上逐渐发展起来的一种新型树脂,主要通过吸附性产生分离的效果,具有吸附选择性独特、物理化学稳定性高、再生简便、免疫无机物的影响、使用周期长、解析条件温和、宜于构成闭路循环和节省费用等诸多长处,因此被广泛应用于有效成分及部位的分离与纯化方面。与常用的有机溶剂萃取法相比,树脂吸附法毒性小,操作安全且成本较低。金汝城等人[14]采用D-101、NKA-9、S-8、AB-8以及DA-201大孔吸附树脂对当归中的阿魏酸粗提液进行吸附及洗脱性能试验,以HPLC法进行分析检测。根据实验结果,筛选相对更合适的吸附树脂DA-201,并确定了吸附的最佳工艺参数:在阿魏酸最佳吸附质量浓度为293.2mg/L,pH值为4.0,吸附流速2倍柱体积/h下,可处理样品溶液16倍体积。在洗脱剂乙醇体积分数为35%,洗脱流速0.5倍体积每小时的流速下,4.5倍体积的溶液就可将阿魏酸充分洗脱,过柱得率达到89.2%,使阿魏酸的质量分数由原材料中的0.156%提高到25.1%。这种纯化方法的毒性低、成本小并且安全,相比起以往的萃取方法,具有更好的工业应用价值。5.2离子交换法离子交换基本原理是把水或含水的溶剂当作流动相,离子交换树脂作为固定相。当流动相通过交换柱后,流动相中与离子交换基团中具有异种电荷的离子或中性成分不会进行交换,而是会从柱子的下方与流动相一起流下。具有同种电荷的离子将会进行交换,并且会被柱子吸附,再选用合适的流动相完成洗脱,就能够使混合物分离开,达到纯化的目的。刘子立等人[15]选择原料为麦麸,采用酶法降解获得降解液,分别考察717交换树脂与D-201大孔树脂分离提纯阿魏酸,通过分析最终分离效果,选择D-201作为分离树脂。在此基础上,进一步探讨D-201大孔树脂上柱的洗脱和工艺条件,确定阿魏酸的最佳吸附质量浓度为2000-3000mg/L,洗脱剂配比(V/V/V)为水、无水乙醇、盐酸的体积比为36∶60∶4,上柱流速1mL/min,pH值为9.0,洗脱流率为1mL/min。最后用薄层层析法进行分析,发现该方法能较大提高阿魏酸的纯度。5.3膜分离技术膜分离技术的原理是利用不同分子量的物质的粒径大小不同,在通过不同分离膜时,分子量大的物质被截留,分子小的物质通过膜,从而达到分离的目的。该技术是一项新兴技术,核心为分离膜,采取分离、浓缩和提纯物质举措为一体,具有选择性好,适应性强,能耗低等优点。赵升强[16]等采取膜分离法从玉米皮中制备阿魏酸,并取得较好收率。

1前言近年来,随着人们技术水平的提高,对米糠的再加工工艺的研究越发深入。通过单因素方法探究乙醇提取的米糠中阿魏酸的最佳提取工艺,研究阿魏酸提取分离后的纯化工艺,能够帮助人们更好的利用米糠,变废为宝,实现农副产品资源的综合利用。2材料与方法2.1实验材料、试剂与仪器2.1.1实验材料与试剂米糠来源于湖北恒泰米业,于2020年12月12日购买;乙醇、氢氧化钠、乙酸乙酯和甲醇等试剂均为分析纯,为国药集团化学试剂有限公司生产。2.1.2仪器仪器生产厂家电子天平Valor型奥豪斯仪器有限公司TG-WS台式高速离心机上海京工时业有限公司紫外可见分光光度计UV型上海元析宜器有限公司RE-52AA型旋转蒸发仪上海亚荣升化仪器厂电热恒温水浴锅HHS型上海博讯时业有限公司2.2实验方法2.2.1紫外分光光度法检测阿魏酸含量的标准曲线的建立精密称取阿魏酸标准品0.1g,用甲醇定容至100mL得到1g/L的标准贮备液,再用蒸馏水配制成0.001g/L,0.002g/L,0.004g/L,0.006g/L,0.008g/L,0.01g/L的标准溶液。用紫外分光光度于322nm处进行测定。空白对照采用甲醇,纵坐标为吸光值,横坐标为阿魏酸的浓度绘制标准曲线。2.2.2D101大孔树脂洗脱条件考察(1)装柱:取出购买的D101大孔树脂,水洗后采用95%的乙醇溶液浸泡一夜。使用时,采用超纯水反复洗涤至无醇味,去除漂浮在上层的树脂颗粒,备用。实验时,树脂湿法转移到柱内用乙醇冲洗,反复洗涤至加入三倍体积乙醇仍无浑浊后停止,水洗至无醇味,备用。(2)大孔树脂吸附条件的考察:取备好的大孔树脂,分别等量装入不同锥形瓶,按上法进行装柱后,分别考察阿魏酸提取液的上样溶液质量浓度为0.25mg/ml时pH、上样量体积对大孔树脂吸附率的影响。其中设置考察条件为上样量均为4BV时,pH分别为5、6、7时对上样量的影响;固定pH为6,检测上样后流出液,考察上样量体积分别为3、4、5倍柱体积时,大孔吸附树脂的吸附效果。(3)大孔树脂洗脱条件考察:采取上述最优吸附条件进行大孔树脂洗脱实验。上样后,洗脱剂用一定浓度的乙醇进行解吸实验,收集洗脱液,检测其中阿魏酸的含量,从而考察洗脱溶剂、乙醇用量和洗脱流速这三个因素对阿魏酸的洗脱的影响。其中,洗脱条件考察采用洗脱溶剂为50%、60%、70%乙醇对洗脱效果的影响;洗脱溶剂用量采用4、5、6BV对洗脱效果的影响;洗脱流速为4、5、6BV/h对洗脱效果的影响。2.2.3阿魏酸的提取由于阿魏酸的结构具有羧基,在碱性条件下溶于水,因此目前普遍的提取方法是采用碱水提取。本文按照的乙醇热碱水提取方法进行试验提取。选取优质的米糠200g,按1%的NaOH溶液与乙醇按照4:1的比例混合,固液比为1:8,在80℃下采用水浴锅加热提取三小时,提取次数为两次。趁热过滤提取液留样。合并滤液,旋蒸浓缩至无醇味。取一半冷却后滴加浓盐酸使沉淀析出,调整烘箱温度为60℃,将沉淀用培养皿装好,放入烘箱内烘干,得到阿魏酸粗品。提前24小时处理好大孔树脂。用水冲洗去除树脂表面保护剂,并采用95%的乙醇浸泡,湿法转移到柱内。将另一半提取液调节pH为5左右,过D101大孔树脂,3倍柱体积水洗后,采用60%乙醇洗脱,收集洗脱液,旋干后得阿魏酸粗品。2.2.4米糠中阿魏酸提取工艺的优化由于阿魏酸提取过程中用到碱液,污染较大,故采用乙醇提取法代替乙醇碱液提取,浓缩乙醇提取液然后采用碱处理的方法,减少碱液的使用。精确称取米糠10g置于烧瓶中,设置单因素实验,分别考察乙醇浓度,温度,提取时间和料液比对米糠中阿魏酸提取率的影响,以优化提取率。①乙醇浓度,按照1:8的料液比,在60℃的提取温度下,分别采用60%,70%,80%的乙醇溶液,提取1.5小时。②提取温度,按照1:8的料液比,分别在50,60,70℃的提取温度下,采用70%的乙醇溶液,提取1.5小时。③提取时间,按照1:8的料液比,在60℃的提取温度下,采用70%的乙醇溶液,分别提取1小时,1.5小时,2小时。④料液比,分别按照1:6,1:8,1:10的料液比,在60℃的提取温度下,采用70%的乙醇溶液,提取1.5小时。将提取液采用3倍体积的乙酸乙酯超声萃取,合并萃取液,悬干后采用等量的甲醇溶解,过膜后检测。3结果与分析3.1D101大孔树脂最佳吸附、洗脱条件采用2.2.1中阿魏酸的检测方法监测上样后吸附流出液中阿魏酸的含量,上样后流出液中检测到明显的阿魏酸,即大孔树脂吸附量达到饱和,此时的上样条件为最佳上样条件。采用2.2.1中阿魏酸的检测方法监测洗脱液中阿魏酸的含量,当洗脱液中未检测到明显的阿魏酸,即吸附在大孔树脂上的阿魏酸洗脱完全,此时的洗脱条件为洗脱最佳条件。(1)最佳吸附条件的考察结果:当上样溶液质量浓度为0.25mg/ml,上样量为4BV时,在提取液pH为6时阿魏酸吸附量达到最大。而当上样溶液质量浓度为0.25mg/ml,pH为6时,在4BV时阿魏酸吸附量达到最大。故D101大孔树脂的最佳吸附条件为上样溶液质量浓度0.25mg/ml、上样量4BV和pH=6。(2)最佳洗脱条件的考察结果:固定洗脱溶剂为60%乙醇,洗脱溶剂量为5BV时,洗脱流速为5BV/h为最佳洗脱流速;固定洗脱溶剂量为5BV,洗脱流速5BV/h,最佳洗脱溶剂为60%乙醇;固定洗脱溶剂为60%乙醇,洗脱流速为5BV/h,最佳洗脱溶剂量为5BV。故D101大孔树脂的最佳解吸附条件为洗脱溶剂为60%乙醇,洗脱流速为5BV/h,洗脱溶剂量为5BV。3.2紫外检测阿魏酸的标准曲线采用纵坐标为吸光值,横坐标为阿魏酸的浓度绘制标准曲线。所得数据如表1所示,所得标准曲线如下图2所示。其中,Y=67.019X+0.1177为该标准曲线回归方程,R=0.9664,线性关系良好。表1阿魏酸标准曲线数据123456浓度g/L0.0010.0020.0040.0060.0080.010吸光度/A0.1470.3170.3770.4700.6890.784图2阿魏酸标准曲线3.3乙醇的最佳提取浓度阿魏酸为分子极性中等强度的苯丙酸类物质,易溶于乙醇、甲醇、乙醚等,不溶于冷水和石油醚。阿魏酸的常规提取溶液为碱,但由于污染较大,而甲醇具有毒性,因此采用乙醇代替。试验在不同乙醇浓度,60℃的条件下,按照1:8的料液比,提取1.5个小时。阿魏酸的得率如图3所示。随着乙醇浓度的增大,阿魏酸的得率随之增大。但到达70%之后提升幅度开始缩小,故采用70%乙醇浓度进行实验。图3乙醇浓度对阿魏酸得率的影响3.4最佳提取温度温度的升高有利于进行水解过程,但同时,由于阿魏酸在高温下不稳定,当温度过高时也会导致阿魏酸的结构的破坏。另一方面,因为提取溶液中含有乙醇,随着温度升高,传质阻力逐渐减小,杂质浸出的几率也会随之增大。因此,必须确定合适的水浴温度,既要考虑到提取效率,也要考虑阿魏酸对温度的耐受性,把不损害产品质量当作前提。试验在乙醇浓度为70%,时间为1小时,料液比为1:8,不同温度条件下进行。阿魏酸的提取量如图4:图4温度对阿魏酸提取量的影响由上图得知随着温度的升高,阿魏酸的提取量增大。而当温度达到60℃之后,阿魏酸的提取量增大不再明显,所以选取60℃为提取温度。3.5最佳提取时间提取时间对水解的影响很大,时提取间太长,提取的阿魏酸会被氧化和光影响,导致得率降低;时间过短时,水解不完全。试验考察了在乙醇浓度为70%,提取温度为60℃,料液比为1:8,水解时间为1,1.5,2小时对阿魏酸提取量的影响。结果如图5所示:图5提取时间对阿魏酸提取量的影响易知,提取时间越长阿魏酸的提取量随之增大,但1.5小时之后提取量增幅减小,从实验进度方面考虑,选用1.5小时作为提取时间。3.6料液比的影响料液比是提取过程中固体与提取溶剂的比例(w/v),在相同的条件下,增大提取溶剂能增大阿魏酸的水解量。在原料一定时,提取溶剂的量增大,水解效率也会增高,但是如果用量过大,一方面会加大溶液浓缩时的能耗,另一方面,也会使得释放出的阿魏酸在后续处理过程中更容易遭受氧化等作用而被破坏。因此,为探究最佳的料液比,试验考察了在乙醇浓度为70%,温度为60℃,不同料液比提取1.5个小时的阿魏酸提取量,结果见图6:图6料液比对阿魏酸提取量的影响米糠在水解的过程中会吸水膨胀,所以会损失较多的水,从而降低提取率,在固液比过低的时候,能够看到阿魏酸的得率非常低;随着料液比的增大,提取量也逐渐增大,这是因为增加溶剂的量,有利于米糠扩散到溶剂中,从而增大阿魏酸的提取量。而料液比增大到1:8后,提取率变化转为平缓,因为在溶剂量增大到了某种程度后,溶剂与原料表面之间的浓度差不再是影响阿魏酸提取量的最重要的因素,溶剂先前溶解的糖类、蛋白质和多酚类等水溶性物质大量析出,有碍后续试验的进行。因此,为了节约耗能,实验选择l:8为最佳料液比。4结论 本研究在前人基础上探究了阿魏酸提取的工艺条件,考虑到环境友好方面,并未采用NaOH,而是通过乙醇提取浓缩后采用NaOH进行水解,大大降低了碱的用量。另外,本建立了了阿魏酸标准曲线,最终确定米糠中阿魏酸提取最佳工艺条件是乙醇浓度70%,温度60℃,提取时间1.5小时,料液比为1:8。最后,本实验考察了阿魏酸柱分离的相应条件,确定D101大孔树脂的最佳吸附条件为上样溶液质量浓度0.25mg/ml、上样量4BV和pH=6;最佳解吸附条件为60%乙醇作为洗脱溶剂,洗脱流速为5BV/h,洗脱溶剂量为5BV,为后续工业生产打下基础。阿魏酸是一种非常有价值的化合物,无论是在提高日常生活的品质方面,还是在保护人类健康方面,它都有巨大的效用。目前对于阿魏酸的研究相比起多年前已经有很大进步了,但对它的研究有待我们去不断的深入。参考文献李长乐,方冬冬,师园园等.稻谷加工副产品米糠的综合利用现状分析[J].粮食加工,2017,42(03):27-30.张国治,杨徐宁,张雨.阿魏酸在食品和农业领域的研究进展[J].粮食加工,2019,44(04):41-43.洪倩.阿魏酸抗辐射活性及其作用机制研究[D].中国人民解放军军事医学科学院,2012.KawAK,YamAT,AraHA,etal.ModifyingeffectsofferulicacidonazoxymethaneinducedcoloncarcinogenesisinF344rats[J].CancerLett,2000,157(1):15-21.KayAT,AtohSK,KadomAY,etal.Radicalscavengingactivityandcytotoxicityofferulicacid[J].AnticancerRes,2002,22(5):2711-2717.汪清民,王开亮,王兹稳.阿魏酸及其衍生物抗植物病毒剂[P].天津:CN102090412A,2011-06-15.汪清民.反式阿魏酸微乳剂及其制备方法和防治烟草、水稻、番茄病毒病的应用[P].天津:CN104412972A,2015-03-18.\o"KueteV,M

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