ABO正反定型不符原因分析及对策

ABO正反定型不符原因分析及对策ABO血型系统是保障输血安全最重要的血型系统，同样ABO血型鉴定也是保障输血安全最关键的技术。

用试管法进行ABO血型鉴定时，如果没有血液系统疾病，一般正定型在试管反应中会出现“4+”的凝集强度，反定型试管反应中一般会出现“≥2+”凝集强度（向东.ABO亚型的检测[J].中国输血杂志，2010,23（8）:577-579.）。如果没有达到相应的凝集强度，出现缺失或多余的抗原或抗体反应，这时候就提示ABO正反定型不符，需要进一步分析和处理。

表示符号判定标准

4+一个大凝集块，背景清晰，无游离红细胞，判定为强阳性3+数个较大凝集块，背景清晰，几乎无游离红细胞，判定为强阳性2+

很多中等大凝集块，背景清晰，游离红细胞少于1/2，判定为阳性1+很多小凝集块，背景不清晰，游离红细胞占1/2以上，判定为阳性

±（W+)肉眼观察呈“粗颗粒”样，镜下可见细小凝集团，判定为弱阳性

0肉眼观察无凝集，镜下红细胞呈游离状态，判定为阴性mf镜下可见少数红细胞形成较大的凝集块，而周围有大量游离红细胞，判定为混合凝集外观

PH（部分溶血）

红细胞扣部分消失，细胞上清液为透明红色，判定为阳性H（完全溶血）红细胞扣完全消失，细胞上清液为透明红色，判定为阳性

红细胞凝集强度判断标准【《输血免疫血液学实验技术》】

ABO正反定型不符常见情况有：一、弱反应或缺失抗原。二、多余的抗原反应。三、混合视野反应。四、反定型血清中出现弱反应或反应缺失。五、多余的抗体反应。六、技术方面的错误。一、弱反应或缺失抗原常见原因分析及对策（一）A亚型、B亚型或AB亚型1.亚型导致缺少抗原反应示例：正定型反定型

Ctl抗A抗BA1B000≥2+0患者正定型结果均为阴性，但在反定型试验中，与A1细胞不反应，而与B型红细胞出现正常反应强度的凝集，不属于抗体水平减弱的现象，依据反定型结果，应该可以预见患者具有A抗原。

正定型

反定型Ctl解释抗A抗B抗AB抗HA1BO001+4+0≥2+00A亚型

（1）患者正定型结果与正常的凝集强度反应出现明显减弱，依据反定型结果，应该可以预见患者具有A抗原，正定型患者红细胞与抗AB的弱反应且与抗A缺乏凝集反应提示为A亚型。（2）附加试验：吸收放散试验及唾液血型物质试验可以证明患者红细胞上具有A抗原。

2.亚型导致减弱抗原反应示例：正定型反定型Ctl抗A抗BA1B1+mf00≥2+0患者正定型结果与抗A出现1+混合视野反应，与正常的4+反应强度明显减弱，但在反定型试验中，与A1细胞不反应，而与B型红细胞出现正常反应强度的凝集，不属于抗体水平减弱现象，可以看出患者具有减弱的A抗原。正定型反定型Ctl解释抗A抗B抗AB抗HA1BO1+mf01+mf3~4+0≥2+00A亚型（1）

患者正定型结果与正常抗A的凝集强度反应出现明显减弱。依据反定型结果，应该可以预见患者具有A抗原，正定型患者红细胞与抗A、抗AB的弱反应暗示为A亚型。（2）

附加试验：吸收放散试验或唾液血型物质试验可以证明患者红细胞上具有A抗原。3.亚型导致缺少抗原反应示例：正定型反定型Ctl抗A抗BA1B000≥2+0患者正定型结果均为阴性，但在反定型试验中，与A1细胞不反应，而与B型红细胞出现正常反应强度的凝集，不属于抗体水平减弱的现象，依据反定型结果，应该可以预见患者具有A抗原。

正定型

反定型Ctl解释抗A抗B抗AB抗HA1BO0004+0≥2+00A亚型（1）

患者正定型结果与正常的凝集强度反应出现明显减弱，依据反定型结果，应该可以预见患者具有A抗原，正定型患者红细胞与抗AB的弱反应且与抗A缺乏凝集反应暗示为A亚型。（2）

附加试验：吸收放散试验及唾液型物质试验可以证明患者红细胞上具有A抗原。

4.亚型导致减弱抗原反应示例：正定型反定型Ctl抗A抗BA1B0mf4+00

患者正定型结果与抗B出现混合视野反应，与正常的4+反应强度明显减弱，但在反定型试验中，与B细胞不反应，而与A1型红细胞出现正常反应强度的凝集，不属于抗体水平减弱的现象，可以看出患者具有减弱的B抗原。正定型反定型Ctl解释抗A抗B抗ABA1BO0mfmf4+000B亚型（1）

患者正定型结果与正常抗B的凝集强度反应出现明显减弱，依据反定型结果，应该可以预见患者具有B抗原，正定型患者红细胞与抗B、抗AB的弱反应暗示为B亚型。（2）

附加试验：吸收放散试验或唾液血型物质试验可以证明患者红细胞上具有B抗原。正定型反定型Ctl血型解释抗A抗A1抗B抗AB抗HA1BO4+4+00000AB亚型物质及吸收放散实验确认存在B抗原1+mf04+W+000A亚BA亚B，有抗A102+mf4+000B亚W+000W+4+1+0A类（孟买）01+mf4+000B亚4+02+mf4+0W+00CisAB4+04+W+000A2BA2B，有抗A14+4+1+mf0000AB3献血员01+mf4+000B3献血员000W+4+W+00B亚B亚，有抗体0W+2+4+4+W+00B亚B亚，有抗体0004+4+000B亚型物质及吸收放散确认存在B抗原00004+00A亚延长抗原抗体反应时间至15分钟再次离心，与抗A、抗AB出现W+反应，A型物质检测及抗A吸收放散为阳性。室温15分钟W+0室温15分钟W+004+000004+00A亚有弱抗A1延长抗原抗体反应时间至15分钟再次离心，与抗A、抗AB出现1+mf反应，反定与A细胞出现W+反应，A型物质检测及抗A吸收放散阳性室温15分钟1+mf0室温15分钟1+mf室温15分钟W+4+00（二）疾病导致A或B抗原减弱如白血病、霍奇金病等。抗原减弱也可以由于患者疾病导致，如A型急性白血病患者在疾病活动期抗原水平减弱，常会误定为A2、A3亚型，在疾病缓解期又恢复到正常反应，抗原减弱也可能发生于B抗原、H抗原。疾病导致减弱抗原反应示例：正定型反定型Ctl抗A抗BA1B3~4+mf00≥2+0患者正定型结果与抗A出现4+混合视野反应，与正常的4+反应强度出现减弱，但在反定型试验中，与A1细胞不反应，而与B型红细胞出现正常反应强度的凝集，不属于抗体水平减弱的现象，可以看出患者具有减弱的A抗原。正定型反定型Ctl抗A抗B抗ABA1BO3~4+mf03~4+mf0≥2+00（1）

患者正定型结果与正常抗A的凝集强度反应出现明显减弱，依据反定型结果，可以肯定患者具有A抗原。（2）

了解患者病史及输血史：患者为白血病患者且无ABO非同型输血史，则是疾病导致抗原水平减弱。注意：患者为正常A型但有输注O型洗涤红细胞输血史也会出现此反应格局。正定型反定型Ctl血型解释抗A抗A1抗B抗AB抗HA1BO0003+000B1岁至8月龄白血病，致抗原减弱（型物质检查，吸收放散实试验）4+mf4+mf04+mf4+mf03+00A白血病致抗原减弱4+mf2+mf003+00A白血病致抗原减弱4+mfW+1+mf2+0000AB或AB亚白血病致AB抗原减弱或白血病致AB亚型抗原减弱3+mf003+04+00A或A亚A亚或白血病致抗原减弱04+mf2+000BMDS致B抗原减弱W+0W+04+00A或A亚白血病导致A（A亚）甚至H抗原减弱4+mf2+mf004+00AMDS致抗原减弱4+mf2+mf4+mf2+mf0000ABMDS致抗原减弱0000000AB血液病（再障）导致抗原减弱，型物质检测确认有AB抗原

（三）由于某种疾病（如腹腔癌症、胰腺癌）导致血浆中存在大量的型物质，中和抗A或抗B抗体，引起正定型为假阴性或弱阳性。通过洗涤红细胞可解决此问题。血浆中可溶性抗原（型物质）与抗A、抗B形成抗原-抗体复合体，抑制了抗体的反应活性。（四）

骨髓移植移植导致抗原缺失：正定型反定型Ctl解释抗A抗BA1B000≥2+0A移植O00≥2+00B移植O

（五）

非同型输血

输血导致抗原出现弱反应：

正定型反定型Ctl解释抗A抗BA1B4+W+mf0≥2+0/W+A型输B型血

解决方法:1.洗涤RBC且延长孵育时间进行试验，如果使用洗涤红细胞后反应加强，则考虑是型物质的抑制；2.酶处理红细胞再次试验(检测是否疾病导致抗原水平减弱)；3.吸收放散确定是否是亚型；4.了解输血史(尤其是0型红细胞输注)来分析混合视野；5.了解病情诊断(尤其是白血病)；6.了解是否是骨髓移植受者；7.了解是否是双胞胎；8.是否使用从前未使用过的单克隆抗体血清进行了血型鉴定；9.分泌型型物质检查；10.进行玫瑰花试验来确定是否混入其它红细胞，或进行细胞分离；11.

如果是弱A或弱B亚型，则检查红细胞上H抗原的表达（添加抗H试验）。二、多余的抗原反应常见原因分析及对策（一）自身凝集红细胞、抗体致敏红细胞导致。1.自身冷抗体引起的正反定型不符正定型反定型Ctl解释抗A抗B抗ABA1BO2+4+4+4+2+2+2+可能血型:B型解决方案:在37℃定型,去除自身冷抗体(红细胞用DTT处理血浆用白身红细胞吸收)干扰后定型，或进行血型物质检测2.致敏lgG抗体的红细胞引起自身凝集正定型反定型Ctl解释抗A抗B抗ABA1BO+++4+4+++可能血型:O型有温抗体或有输血反应,引起RBC包被抗体解决方案:直接抗人球蛋白试验及抗体鉴定

（二）细胞未洗涤，血浆蛋白引起的假阳性反应。

（三）细胞未洗涤，血浆中存在针对正定型试剂中某种成分的抗体导致。非血型抗原抗体复合体引起的正反定型不符正定型反定型Ctl解释抗A抗B抗ABA1BO02+04+4+00可能血型O型，由于抗B染料丫啶黄和标清中的相应抗体形成；复合物附着在红细胞表面,造成正定型中出现和红细胞产生2+的非特异性阳性反应

（四）骨髓移植正定型反定型Ctl解释抗A抗B抗ABA1BOW+mf0W+mf3+4+0W+可能血型:O型移植A；解决方案:询问病史

（五）获得性B

正定型反定型Ctl解释抗A抗B抗ABA1BO4+2+4+04+00可能血型:A型有获得性B抗原解决方案:询问病史,用酸化的抗B（pH6.0）检查：

正定型反定型Ctl抗A酸化抗B抗ABA1BO4+04+04+00

（六）B(A)现象正定型反定型Ctl解释抗A抗B抗ABA1BO±/2+4+4+≥2+000可能血型:B(A）

（七）ABO非相合输注正定型反定型Ctl解释抗A抗BAB4+W+mf0≥2+0/W+A型输B型血

（八）多凝集正定型反定型Ctl解释抗A抗B抗ABA1BO2+1+1~2+4+4+00可能血型:O型多凝集；解决方案:询问病史,是否有感染多凝集是在正定型试验中使用人血清来源的定型血清时出现,现在定型试剂使用鼠单克隆来源的定型血清不存在此问题。

解决方法1.将红细胞洗涤再进行试验，确定是否是病人或献血员的血清中存在针对ABO定型试剂成分的抗体；2.用O型及自身红细胞于室温检查病人血清，确定血清中是否有冷自身抗体，如果有，则用2ME或DTT处理；3.用不同厂家的试剂检查洗涤的红细胞；4.了解病人的临床诊断；5.如果怀疑是获得性B，则用酸化的抗B检查；6.进行ABH分泌型型物质检查；7.如果用多克隆抗A检查结果是混合视野，则用蛋白酶处理RBC试验，考虑是否是多凝集。三、混合视野反应的常见原因分析及对策所谓“混合视野凝集”是指部分细胞凝集，部分细胞不凝集的状态，例如用O型和A型红细胞混合后加入抗-A，并在试管中离心，可以模拟出混合视野的凝集状态：如果混合视野凝集中凝集的红细胞≥50%，通常判定为A3或B3型，<10%，则通常判定为“Aend”或“Bend”。（向东.ABO亚型的检测[J].中国输血杂志，2010,23（8）:577-579.）（一）近期输血正定型

反定型

Ctl解释

抗A抗BA1BO04+mf4+000B/O嵌合体（双胞胎），B型输O洗涤红细胞

（二）移植正定型

反定型

Ctl解释抗A抗A1抗BA1BO4+mf|3+mf01+3+01+O移植A

（三）异卵双胞胎或双受精卵产生的嵌合体正定型反定型Ctl解释抗A抗BA1BO4+mf004+00A/O嵌合体（双胞胎）

（四）胎儿和母体出血（五）亚型正定型反定型Ctl血型解释抗A抗A1抗B抗ABA1BO1+mf04+W+000A3BA3B有抗A11+mf001+mf04+00A3A3001+mf1+mf4+000B3B3

（六）疾病导致正定型反定型

Ctl血型解释抗A抗A1抗B抗HA1B

O4+mf2+mf003+00A白血病致抗原减弱

4+mfW+1+mf2+0000AB或AB亚白血病致AB抗原减或白血病致AB业型抗原减弱

3+mf003+04+00A或A亚A亚或自血病致抗原减弱

4+mf4+mf001+00A白血病致抗原及抗体均减弱

W+0W+04+00A或A亚白血病导致A(A亚)甚至H抗原减弱

4+mf2+mf004+00AMDS致抗原减弱4+mf00000白血病，B移植A，抑制剂使用导致抗体减弱

解决方法1.确定是否近期怀孕或输血；2确定临床诊断(尤其是白血病)3.是否是骨體移植受者；4.是否是双胞胎；5.用细胞分离术将两群细胞分开；6.ABH型物质检查；7.正定型红细胞用酶处理后再次定型。四、反定型血清中出现弱反应或反应缺失常见原因分析及对策（一）年龄相关：新生儿以及小于4月龄的婴儿以及老年人正定型反定型Ctl血型解释抗A抗A1抗BA1BO4+4+00W+00A8月龄白血病，抗体水平低下（查型物质）04+W+000B4月龄婴儿，抗体弱04+W+000B87岁高龄致抗体减弱，放散确认无A抗原

（二）AB0亚型正定型反定型Ctl血型解释抗A抗A1抗B抗AB抗HA1BO4+4+00000ABAB亚型导致反定型抗体缺失，型物质检测，吸收放散试验00004+00A亚延长抗原抗体反应时间至15分钟再次离心，与抗A、抗AB出现W+反应，A型物质检测及抗A吸收放散为阳性室温15分钟W+0室温15分钟W+004+00A亚0004+00A亚有弱抗A1延长抗原抗体反应时间至15分钟再次离心，与抗A、抗AB出现1+mf反应，反定与A细胞出现W+反应，A型物质检测及A吸收放散为阳性室温15分钟W+0室温15分钟W+室温15分钟W+室温15分钟W+室温15分钟W+室温15分钟W+4+4+00W+~1+00A或AB亚通过检测型物质或吸收放散来确实能定是阳性抗体减弱还是AB亚1+mf04+W+000A亚BA亚B有抗A14+04+W+000A2BA2B有抗A1000W+4+W+00B亚B亚型有抗体4+4+00000AB亚用抗B吸收放散及B型物质检测

（三）低球蛋白血症(如白血病病人、使用免疫抑制剂患者、免疫缺陷患者)正定型反定型Ctl血型解释抗A抗A1抗BA1BO4+4+00W+or室温15分钟后3+00A淋巴瘤化疗致抗体水平减弱，延长抗原抗体反应时间至15分钟再次离心，反定增强4+3+001+mf00A急性白血病致抗体减弱（型物质检测或吸收放散排除B亚型抗原存在）4+4+00000AA移植A，免疫抑制剂的使用及放化疗，致抗体水平减弱4+4+001+00AMM，65岁，化疗致抗体减弱4+mf4+mf001+00A白血病致抗原及抗体均减弱4+4+00W+~1+00A或AB亚通过检测型物质或吸收放散来确定是A抗体减弱还是AB亚04+1~2+000B化疗患者4+4+00W+~1+00AA型产后大出血导致抗体流失而减弱，型物质检查无B抗原

（四）移植正定型反定型Ctl血型解释抗A抗A1抗B抗ABA1BO04+0000AB移植B，免疫抑制剂使用导致抗体水平减弱4+mf00000白血病，B移植A，抑制剂使用导致抗体减弱000W+3+00OA骨髓移植A移植O，白血病6年4+4+00000AA移植A，免疫抑制剂使用及放化疗致抗体水平减弱2+mf04+2+000AML，B移植AB，两造血系统共存

（五）双胞胎或双受精卵产生的嵌合体解决方法：1.延长反应时间；2.于室温及4℃检查血清中的抗体。用A、B、O及自身红细胞进行检查；3.于室温及4℃检查血清中抗体。用酶处理的A、B、O及自身红细胞进行检查。可能需要在试验前进行冷抗体的自身吸收；4.确认病人年龄及临床诊断（如新生儿、老年人、免疫病如白血病、低球蛋白血症、大出血、肾透析等）；5.确定输血史（非ABO同型的血浆输注）。五、多余的抗体反应常见原因分析及对策

（一）冷自身抗体：正定型可以将红细胞用DTTT处理(破坏IgM抗体)后定型，且反定型血浆用自身红细胞吸收后定型。正定型反定型Ctl血型解释抗A抗BA1BO1+4+4+2+2+2+

BB型有冷凝集，DTT处理用于正定型，反定型用自身细胞吸收血浆定型DTT处理后0DTT处理后4+自身抗体吸收后4+自身抗体吸收后0自身抗体吸收后0自身抗体吸收后0

（二）特异性冷同种抗体正定型反定型Ctl血型解释抗A抗A1抗BA1BO4+4+4+001+0AB有ABO以外冷抗体4+4+4+W+W+W+0AB有ABO以外抗体，抗Lea4+4+4+01+1+0AB有抗M抗体4+4+02+4+2+0A型，有意外抗体存在ABO以外的冷抗体，抗体鉴定为抗M

（三）血清中存在针对试剂红细胞保存液成分的抗体。(使用新鲜的无红细胞保存液添加的盐水悬浮红细胞用于反定型)正定型反定型Ctl血型解释抗A抗BA1BO04+4+W+~2+W+~2+0B反定红细胞保存液成分与患者血浆中的对应抗体产生反应，用新鲜无保存液的B细胞反定出现阴性

（四）某些疾病导致球蛋白水平增高（多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、Hodgkin's淋巴瘤）引起缗钱状凝集。正定型反定型Ctl血型解释抗A抗A1抗BA1BO04+3+W+W+W+BMDS缗钱(盐水添加)

4+4+0W+3+W+W+A多发性骨髓瘤,缗钱

4+3+0W+3+W+W+A干燥综合征引起缗钱4+4+01+4+1+1+A巨球蛋白血症导致反定出现缗钱04+4+W+W+W+B红斑狼疮致球蛋白增多,产生缗钱4+4+0W+3+W+W+A巨球蛋白血症导致缗钱04+4+W+W+W+B类风湿关节炎导致缗钱4+4+1+1+3+1+1+A红斑狼疮导致反定出现缗钱,红斑狼疮直抗抗IgG:3+，抗C3d:3+,导致正定型与抗B产生1+假阳性04+4+1+1+1+BMDS导致缗钱4+3+4+W+W+W+W+AB非霍氏淋巴瘤导致缗钱

（五）输用大分子血浆扩容剂。正定型反定型Ctl血型解释抗A抗A1抗BA1BO4+4+W+W+2+W+W+A消化道出血89岁患者,使用大分子血浆扩容剂,引起缗钱

4+4+0W+3+W+W+A肿瘤患者输注大分子营养品导致缗钱

（六）移植

正定型反定型Ctl血型解释抗A抗A1抗BA1BO2+