【化学发光法与酶联免疫法在HBV检验中的对比探析4700字（论文）】

III化学发光法与酶联免疫法在HBV检验中的对比分析TOC\o"1-3"\h\u摘要 I前言 11材料与方法 11.1基础材料 11.1.1纳入标准 11.1.2排除标准 11.2方法 11.2.1观察指标 21.2.2统计学方法 22结果 22.1两类方法乙肝五项检测结果比较 22.2两类方法检验HBV阳性的一致性分析 23讨论 3参考文献 4摘要目的：化学发光和ELISA检测HBV的临床意义。方法：选择2021年1月至2021年6月住院治疗的疑似乙肝病毒感染患者100例，进行研究，在确认所有患者病例资料完整后抽取其空腹血，用化学发光法和ELISA法测定5个病人的五个项目，比较两种方法在五个项目中的阳性检出率的比较，并以实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）对HBV感染的检测结果作为金标准，采用Kappa检验分别对化学发光法及酶联免疫法检测HBV阳性水平的灵敏度、特异度和准确率进行比较，并将两类检测方法与金标准的一致性Kappa值进行对比。结果：化学发光法HBsAg、HbeAb阳性检出率与对照组比较显示出更高水平（P＜0.05），两类方法在HBsAb、HBeAg、HBcAb及总阳性检出率上未显示明显差异（P＞0.05）。经一致性检验显示，酶联免疫法检验HBV阳性的灵敏度为93.85%、特异度为85.71%、准确率为91.00%、阳性预测值为92.42%、结果显示，Kappa值为0.801，而ELISA与CR检测结果的一致性为88.24%；化学发光检测HBV阳性率96.92%，特异性88.57%,94.00%,94.00%,94.03%，阴性93.94%，与PCR检验的一致性检验Kappa值为0.866，与酶联免疫法比较显示出明显更高水平。结论：化学发光法在对乙肝病毒五项血清检测中表现出更高的价值。关键词化学发光法；酶联免疫法；乙肝病毒；乙肝五项前言乙肝是一种慢性乙型肝炎病毒（HBV）的持续感染所致的一种慢性疾病。乙肝在发展中国家人群中较为常见，也是全世界十大死亡原因之一，其主要传播途径为血液、体液及性传播，因而也被列为性传播疾病[1]。大多数情况下，HBV病毒的潜伏期是无症状的，通常是在体检中发现的，当前临床主要可通过乙肝五项对患者HBV感染情况进行分析，而对乙肝五项的检测主要包括化学发光法和酶联免疫法，酶联免疫法是一种更广泛使用的临床检测方法，主要的医疗设备具备试验条件，价格便宜，并且适用于公共测试；但是，它在定量分析中有一些弊端，特别是当血清样品浓度太高时，假阴性的因素影响疾病的诊断[2]。化学发光免疫测定法是一种新型的免疫测定技术，可以高精度地进行定量分析[3]。本研究旨在比较化学发光与ELISA在乙肝病毒检测中的差别，以便为目前的临床试验技术提供参考。1材料与方法1.1基础材料选取2021年1月-2021年6月确诊的HBV疑似病例，其中52名男性，48名女性，44~53岁，平均年龄48.53±4.51岁；全部病人都有全部的病历，并在住院期间被抽取空腹静脉血，进行乙肝五项检查。本研究在将研究的目的和意义报告给伦理委员会并在获取批准后开展相应病例的收集工作。1.1.1纳入标准（1）有HBV感染者接触史，且伴有肝痛、乏力等肝病症状；（2）44~53岁；（3）患者对于研究相关信息已掌握，并且愿意签字配合相关研究。1.1.2排除标准（1）近期已使用相应的抗病毒治疗药物；（2）免疫疾病患者；（3）全身或局部急慢性感染患者；（4）既往乙肝或其他类型病毒感染史；（5）血液系统疾病。1.2方法血样采集：所有疑似患者，均开展化学发光法、酶联免疫法检测。在检测前，为了保持检测结果的准确性，需要患者在检验前一天，晚8时开展禁食。于第二天清晨，开展乙肝病毒血液检测，即收集清晨空腹静脉血5mL，对血清实施分离，保持分离频率达到3000r，离心处理10分钟，血清分离后，开展相应的检测。分成三份，分别采取化学发光法、酶联免疫法、荧光定量PCR（qPCR）检测、对乙肝五项进行检测，包括乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗体（HBsAb）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝e抗体（HBeAb）、乙肝核心抗体（HBcAb）等指标[4]。化学发光法：按照试剂盒（天津博奥赛斯生物科技有限公司）说明书操作，依次加入各类试剂和样品，37℃孵育30min，吸出反应液后，加入洗涤液洗5次吸干，加入发光剂，于发光仪（天津博奥赛斯生物，400T）下测定发光强度，计算获得相应浓度。酶联免疫吸附法：按照试剂盒（上海荣盛生物药业有限公司）说明书操作，分别用双抗体夹心法、双抗原夹心法、竞争抑制法，各试剂室温放置30min平衡至室温，分别设置空白对照1孔，阴、阳性对照各2孔，加入标准液和特异酶各50μL。加待测样品，每孔50μL，空白对照孔不加，充分混合均匀后盖上专用膜，37℃孵育30min。洗板5次，拍干。加入显色剂AB各0.05mL，充分混合均匀，37℃覆膜避光反应15~30min，加入终止液终止反应，于酶标仪读取OD值。荧光定量PCR：使用荧光定量测定仪（西安天隆荧光定量PCR仪）对血清样本进行测定，使用配套试剂盒按说明书进行操作。1.2.1观察指标（1）两种方法的正确性检验，化学发光法：HBsAg检测值大于0.33

IU/mL，HBsAb检测值高于12IU/mL,HBeAg的相对光强/临界相对光强度不低于1,HBeAb和HBcAb的相对光强/临界相对光强水平不超过1，则被认为是阳性；ELISA:HBeAb和HBcAb的相对光强/临界相对光强度不大于1；HBsAg、HBsAb、HBeAg均不小于1时，可被认为是阳性；通过测定的结果，将HBV血清标记的阳性检出率进行对比，并从正确率上分析两者的差异。（2）以PCR检测作为金标准，采用Kappa检验分别对化学发光法及酶联免疫法检测HBV阳性水平的灵敏度、特异度和准确率进行比较，并将两类检测方法与金标准的一致性Kappa值进行对比，PCR检测HBV定量测量值＞5.0×102cps/mL为阳性，比较两种检测方法敏感度、特异性、准确性。1.2.2统计学方法使用SPSS22.0统计学软件处理数据，用例或百分比（n，%）表述计数资料，以x2检验，一致性分析采用Kappa检验，Kappa＜0.4、0.4-0.7、＞0.7分别表示一致性差、中等、良好，当Ｐ＜0.05时，差异具有统计学意义。2结果2.1两类方法乙肝五项检测结果比较化学发光法HBsAg、HbeAb阳性检出率与对照组比较显示出更高水平（P＜0.05），两类方法在HBsAb、HBeAg、HBcAb及总阳性检出率上未显示明显差异（P＞0.05）。见表1。表1两类方法乙肝五项检测结果比较（n,%）检测方法例数HBsAgHBsAbHBeAgHbeAbHBcAb总阳性率化学发光法10065（65.00）58（58.00）34（34.00）28（28.00）44（44.00）67（67.00）酶联免疫法10051（51.00）52（52.00）36（36.00）16（16.00）39（39.00）66（66.00）x24.0230.7270.0885.0070.5150.022P0.0450.3940.7670.0250.4730.8812.2两类方法检验HBV阳性的一致性分析100例研究对象经PCR检验显示HBV阳性为65例，经一致性检验显示，酶联免疫法检验HBV阳性的灵敏度为93.85%、特异度为85.71%、准确率为91.00%、阳性预测值为92.42%、阴性预测值为88.24%，CR检测和ELISA的一致性检验Kappa值为0.801；化学发光检测HBV阳性率96.92%，特异性88.57%,94.00%,94.00%,94.03%，阴性93.94%，与PCR检验的一致性检验Kappa值为0.866，与酶联免疫法比较显示出明显更高水平。见表2、表3。表2两类方法检验HBV阳性情况比较HBV阳性n化学发光法酶联免疫法阳性阴性阳性阴性是6563（63.00）2（4.00）61（61.00）4（4.00）否354（4.00）31（31.00）5（5.00）30（30.00）合计10067（67.00）33（33.00）66（66.00）34（34.00）表3两类方法检验HBV阳性的一致性分析检查方式灵敏度（%）特异度（%）准确率（%）阳性预测值（%）阴性预测值（%）Kappa值化学发光法96.9288.5794.0094.0393.940.866酶联免疫法93.8585.7191.0092.4288.240.8013讨论在中国乙肝的发生率非常高，传染方式主要是血液感染、性传染、母婴感染等，严重阻碍了人们的生活和健康[5]。中国与其他国家相比，潜在感染的人很多，所以特别是对肝炎患者进行治疗和诊断时，有效且科学的诊断和评价很重要。乙型肝炎最早期的临床诊断始于1980年乙肝现有5种检测技术的应用，在一定范围内促进了乙肝的临床预防和诊断，但其应用仅限于单一的定性检测，难以判断疾病的状态和走向的定量动态分析，严重影响了疾病预防和诊断的精度[6]。随着医学技术的发展，乙肝五项及HBV-DNA检验技术的提高，使得该病的发生及动态定量分析准确性被大大提高，目前，主要有乙肝单一五项检查、与HBV前s抗原组合的乙肝五项检查、与HBV-DNA检测组合的乙肝五项检查等临床检测方法，使得乙肝临床检测的失误率被较大程度的降低，对于更早发现疾病或帮助医师制定临床治疗方案存在一定意义[7]。本研究结果显示，化学发光法HBsAg、HbeAb阳性检出率与对照组比较显示出更高水平，两类方法在HBsAb、HBeAg、HBcAb及总阳性检出率上未显示明显差异，提示化学发光法在可通过HBsAg、HbeAb阳性异常检出来提高对患者乙肝检测的准确性。化学发光法是根据被测物质与相应的检测试剂发生化学反应所产生的发光强度来判断被测物质的浓度。由于检测发光强度与被测物质存在线性定量关系，因此，化学发光是非常敏感的。与ELISA相比，化学发光法具有更高的灵敏度，对于被测标志物的含量检测准确率高，误诊率低，随着化学发光免疫分析技术的发展，其在乙型肝炎五项标志物检测中具有重要的应用价值。HBsAg主要属于HBV的外壳蛋白成分，其水平可在HBV感染后1~2周内出现异常，并因为病情进展而持续变化；HbeAb则主要受到HBsAg刺激而产生抗体，对于HBV复制过程的反应也有一定效果，而化学发光法对其更灵敏的检测使得该类方法对HBV阳性的检出更具价值[9]。经一致性检验显示，酶联免疫法检验HBV阳性的灵敏度为93.85%、特异度为85.71%、准确率为91.00%、阳性预测值为92.42%、阴性预测值为88.24%，和酶联免疫法与CR检验的一致性检验Kappa值为0.801；化学发光法检验HBV阳性的灵敏度为96.92%、特异度为88.57%、准确率为94.00%、阳性预测值为94.03%、阴性预测值为93.94%，与PCR检验的一致性检验Kappa值为0.866，与酶联免疫法比较显示出明显更高水平。酶联免疫吸附法根据抗原与抗体的特异性结合现象，可以利用酶与基质之间的催化作用和对待测物的定量测定，来同时测定抗原和抗体。尽管在临床应用广泛，但该方法对抗原抗体结合位点较为看重，本方法对不适宜的抗原进行标记，能维持原抗体的最大免疫，但易产生交叉反应。试验物质的浓度越高，酶标抗原或抗体越少，用仪器测定的吸光度值越低[10]。化学发光免疫分析主要由抗原抗体检测系统和化学发光系统构成，免疫反应特异性强，化学发光灵敏度高。通过与发光试剂标记的抗原和抗体组合的免疫反应产生免疫现象，加入化学基质，在聚乙烯醇的催化反应下发生电子转移，氧化成刺激的中间体。可以用化学发光检测器检测一定程度的光信号强度，从而实现对被测对象定性定量的检测。化学发光技术包括化学发光免疫、化学发光免疫、电化学发光免疫三大类，各类方法标志物有所不同。其中化学发光免疫检测技术反应机理为氧化还原反应，不会对人体产生明显损害；化学发光酶免疫技术结合的底物与前者有所区别，在与结合抗原抗体分离后可发生能量跃迁，因此，产生对应强度的光线，由此进行量化；电化学发光免疫法结合了前两种方法的高特异性和高灵敏度，电化学发光试剂主要用于抗体和抗原的标记，磁珠作为将检测对象及其相应的抗体固定在磁微球上的固体载体，免疫结合后，抗体免疫组合物在磁珠上生成，磁场施加到反应介质的外侧，复合体被磁性机架吸附凝聚，弹跳物质通过洗涤被去除，磁珠结合物的发光强度被测量，未知浓度的抗原被准确的测量[11]。综上，电化学发光法在检测患者血清乙肝五项的应用价值相较于酶联免疫法来说更高，有着更良好的灵敏度、准确率及特异度，值得临床推广和应用。参考文献[1]沈国强,王晓明,唐森龙.两种不同方法检测乙肝病毒感染的临床效果比较[J].现代诊断与治疗,2015,26(20):4709-4710.[2]万奖.探讨不同免疫检验方法检测乙肝病毒感染血清标志物的效果差异性[J].中国医药指南,2020,18(3):4