2024年高中生物新教材同步选择性必修第三册第1章 发酵工程第2节　微生物的培养技术及应用第1课时　微生物的基本培养技术

2024年高中生物新教材同步选择性必修第三册第1章发酵工程第2节微生物的培养技术及应用第2节微生物的培养技术及应用第1课时微生物的基本培养技术课程内容标准核心素养对接1.概述培养基的配制方法和微生物纯培养的基本操作要求。2.掌握无菌技术的操作。3.掌握酵母菌纯培养的方法及步骤。1.科学思维——根据微生物的代谢类型分析培养基营养物质的组成。2.科学探究——设计制备马铃薯固体培养基的实验步骤，并尝试运用平板划线法进行纯化酵母菌。知识点1培养基的配制1.培养基的概念、用途和类型2.培养基的配方(1)主要营养物质：水、碳源、氮源、无机盐。(2)其他条件：pH、特殊营养物质和氧气。如下表：微生物乳酸杆菌霉菌细菌厌氧微生物特殊需求添加维生素pH调至酸性pH调至中性或弱碱性无氧知识点2无菌技术1.获得纯净的微生物培养物的关键：防止杂菌污染。2.消毒和灭菌3.注意事项(1)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。(2)为了避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在超净工作台上并在酒精灯火焰附近进行。知识点3微生物的纯培养1.纯培养的概念2.纯培养的过程(以酵母菌为例)包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤。(1)制备培养基(2)平板划线法接种和分离酵母菌(3)培养酵母菌将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右的恒温培养箱中培养24～48h。(1)培养基中的碳源物质有可能同时是氮源(√)(2)只要培养基中的物质含有氮元素，就可作为氮源(×)(3)微生物在液体培养基中生长可形成菌落(×)(4)灭菌相比消毒对微生物的杀灭更彻底(√)(5)只要是没有生物活性的材料均可进行高压蒸汽灭菌(×)(6)培养基分装到培养皿后再进行湿热灭菌(×)(7)为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落(×)eq\x(教材P11“资料卡”拓展)1.将无菌技术类型、常用方法和适用对象用线连起来。eq\x(教材P11图示拓展训练)2.下图为接种环灼烧灭菌的示意图，请据图回答：(1)酒精灯火焰A、B代表充分燃烧层的是A。(2)灭菌先后的正常顺序是③→①→②(用序号和箭头表示)。eq\x(教材P12“探究·实验”拓展)3.下图表示倒平板的正确操作步骤是③→④→②→①(用序号和箭头表示)。探究点一培养基的配制1.下表是某培养基的配方，分析回答：材料牛肉膏蛋白胨NaCl琼脂水用量5g10g5g20g定容至1000mL(1)根据培养基的物理性质，该培养基属于哪类培养基，理由是什么？提示固体培养基。该培养基的配方中含有凝固剂琼脂。(2)该培养基中提供碳源和氮源的物质是什么？属于有机物还是无机物？为什么培养基需要氮源？提示牛肉膏和蛋白胨提供碳源和氮源。二者均属于有机物。培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质必需的。(3)该培养基培养的微生物同化作用类型是________，理由是什么？。提示异养型微生物该微生物的碳源和氮源是有机物。2.下表是某微生物培养基的成分，请分析该培养基可用来培养哪种微生物？若除去①，此培养基可用来培养圆褐固氮菌吗？编号①②③④⑤成分(NH4)2SO4KH2PO4FeSO4CaCl2H2O含量/g0.44.00.50.5100mL提示此培养基可用来培养自养型微生物。圆褐固氮菌虽可以固氮，但其同化作用类型为异养型，培养基中必须提供含碳有机物，所以该培养基不能用来培养圆褐固氮菌。1.几种微生物的营养和能量来源2.巧记培养基的种类和作用按物理状态分类[例1]下列有关微生物营养物质的叙述中，正确的是()A.是碳源的物质不可能同时是氮源B.微生物的培养都需要提供碳源、氮源、水、无机盐，缺一不可C.牛肉膏蛋白胨培养基属于合成培养基，营养全面D.液体培养基有利于营养物质的吸收，可用于微生物的扩增培养答案D解析同一种物质可以既作碳源又作氮源，如牛肉膏，A错误；不同的微生物所需的条件不同，如培养自生固氮菌时不需要加入氮源，B错误；牛肉膏蛋白胨培养基属于天然培养基，营养全面，C错误；液体培养基有利于营养物质的吸收，可用于微生物的扩增培养，D正确。[例2]回答下列与细菌培养相关的问题。(1)在细菌培养时，培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是________(填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”)。通常，制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH，其原因是___________________________________________。硝化细菌在没有碳源的培养基上________(填“能够”或“不能”)生长，原因是________________________________________________________________________________________________________________________________________。(2)用平板培养细菌时一般需要将平板________(填“倒置”或“正置”)。(3)单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物，原因是____________________________________________________________________。(4)有些使用后的培养基在丢弃前需要经过________处理，这种处理可以杀死丢弃物中所有的微生物。答案(1)蛋白胨不同细菌生长繁殖所需的最适pH不同能够硝化细菌可以利用空气中的CO2作为碳源(2)倒置(3)在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征(4)灭菌解析(1)细菌培养时常用牛肉膏蛋白胨培养基，牛肉膏能提供碳源、氮源、磷酸盐、维生素，蛋白胨能提供碳源、氮源、维生素，而葡萄糖不能提供氮源，NaNO3不能为微生物提供碳源。不同细菌生长繁殖所需要的最适pH是不同的，应该根据培养细菌的不同来调节培养基的pH。硝化细菌是化能自养型细菌，可以利用空气中的CO2为碳源，因此在没有碳源的培养基上能够生长。(2)在平板培养基上培养细菌时，一般需将平板倒置，这样可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。(3)不同种类的细菌所形成的菌落，在大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等方面具有一定的特征，不同种细菌在一定培养条件下表现出各自稳定的菌落特征，可以作为菌种鉴定的重要依据。(4)使用后的培养基在丢弃前需进行灭菌处理，以免污染环境。1.微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。2.扩大培养获得大量菌种时常用液体培养基。3.不是所有微生物的培养基中都需要加入碳源、氮源。(1)自养型微生物能利用无机碳源(如空气中的CO2)，故培养基中不用添加碳源。(2)固氮微生物可利用N2作为氮源，故培养基中不用加入氮源。氨是硝化细菌的氮源，硝化细菌利用、氧化环境中的氨所释放的化学能，将CO2最终还原为储存能量的有机物，进行化能合成作用。对异养微生物来说，含C、H、O、N的有机化合物(尿素除外)既可能是碳源，又可能是氮源和能源。探究点二无菌技术1.通过学习无菌技术，关注生活中的现象和人类健康。(1)“无菌操作”与人们的生活休戚相关，无时无处不在。在日常生活、生产实践、自身健康防护中，分别有哪些“无菌操作”的例子？提示在日常生活、生产实践、自身健康防护中“无菌操作”的例子分别有：①被褥、鞋袜要常晒；肉制品储存时用盐腌等。②家畜阉割后，要在其伤口处涂抹一些酒精或白酒；初冬杨树树干涂刷生石灰水等。③打针时，注射部位要用酒精棉球擦拭；在皮肤伤口处涂抹一些碘酒。(2)常用酒精擦拭双手是预防新冠肺炎的日常防护措施之一，这是消毒还是灭菌？体积分数为70%和95%的酒精，哪种效果更好？为什么？提示酒精擦拭属于消毒。酒精消毒时，70%的酒精杀菌效果最好。浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜，酒精分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌能力减弱。2.对培养基、培养皿、接种环、实验者的双手、空气和牛奶常采用的灭菌或消毒方法分别是什么？提示分别为高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌、化学药物消毒、紫外线消毒、巴氏消毒法。3.消毒和灭菌的原理是什么？能否杀死所有的微生物？提示消毒和灭菌都是使微生物的蛋白质变性，借此杀死微生物。灭菌可杀死处理材料中的全部微生物(包括芽孢和孢子)。而消毒仅杀死部分微生物(一般不包括芽孢和孢子)。1.不同消毒方法的特点2.高压蒸汽湿热灭菌问题分析(1)高压蒸汽灭菌开始之前要将锅内的冷空气排尽。灭菌完毕后，要待压力降到0时才能打开排气阀。(2)在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大。(3)在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排出是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。(4)如果在压力未降到0时打开排气阀，会导致锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。[例3]在微生物培养过程中，关于灭菌和消毒的理解，错误的是()A.消毒是指杀死物体表面或内部一部分微生物B.灭菌是杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子C.实验中使用后的培养基丢弃前一定要进行消毒处理，以免污染环境D.吸管和培养皿可以采用干热灭菌法答案C解析消毒只能杀死物体表面或内部的一部分微生物，不能杀死孢子和芽孢，A正确；灭菌是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，在经过灭菌后的物体中，不再存在任何活着的生命，包括芽孢和孢子，B正确；实验中使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境，C错误；常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和湿热灭菌等，吸管和培养皿可以采用干热灭菌法，D正确。[例4]在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。回答下列问题：(1)在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具________(填“可以”或“不可以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是________________________________________________________________________________________________________________________。(3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能________________________。在照射前，适量喷洒________，可强化消毒效果。(4)水厂供应的自来水通常是经过________(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。答案(1)可以(2)在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少(3)破坏微生物DNA结构消毒液(4)氯气解析(1)在实验室中，能耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿和金属材质的实验器具等可以放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。(2)巴氏消毒法或高温瞬时消毒法与煮沸消毒法相比，其优点表现在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少。(3)紫外线照射能消毒的原因是其能够破坏微生物细胞中的DNA分子。在利用紫外线照射前，适量喷洒消毒液，可强化消毒效果。(4)自来水通常采用氯气消毒。探究点三微生物的纯培养1.结合倒平板的操作程序请探究：(1)如图一所示，为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？提示通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。(2)如图二所示，从防止杂菌污染的角度思考，为什么培养基冷却凝固后将平板倒置？提示可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。(3)培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。可用什么办法来估计培养基的温度？提示可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。2.下图是平板划线操作的示意图，据图回答下列问题：(1)用字母和箭头表示平板划线操作的正确步骤：提示d→b→f→a→e→c→h→g(2)为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？提示操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。划线结束后需要灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。(3)在第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？提示划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。(4)接种结束后，为什么要将一个未接种的培养基和一个已接种的培养基放在一起培养，未接种的培养基表面如果有菌落生长，说明了什么？提示培养未接种培养基的作用是对照，未接种的培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的。若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底，或培养基被污染了，需要重新制备。1.平板划线操作及培养结果接种环在固体培养基表面连续划线，将聚集的菌种逐步分散到培养基的表面。平板划线示意图(A)及培养后菌落分布示意图(B)如下图所示。2.平板划线操作的注意事项(1)蘸取菌液前及每次划线之前都需要灼烧接种环，划线操作结束后仍需灼烧接种环，三种灼烧的目的不同。目的项目蘸取菌液前灼烧避免接种环上可能存在的微生物污染菌种每次划线前灼烧杀死上一次划线结束后接种环上残留的菌种，使下一次划线时接种环上的菌种直接来源于上一次划线的末端划线操作结束后灼烧及时杀死接种环上残留的菌种，避免菌种污染环境和感染操作者(2)在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线，以免温度过高杀死菌种。(3)除第一次划线外，每次划线都从上一次划线的末端开始，这样能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。(4)划线时用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。[例5]下列关于制备固体培养基时倒平板的叙述，正确的是()A.倒好的培养基和培养皿要进行干热灭菌B.应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上C.为防止微生物侵入培养基，要在酒精灯火焰旁进行操作D.倒好培养基后，立即将平板倒过来放置，不需要冷凝答案C解析应该在倒平板之前将培养基进行高压蒸汽灭菌，将培养皿进行干热灭菌，A错误；倒平板时，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，B错误；为防止微生物侵入培养基，要在酒精灯火焰旁进行操作，C正确；倒好培养基后，等培养基冷凝后再将平板倒过来放置，D错误。[例6]为纯化菌种，在固体培养基上划线接种分解尿素的细菌，培养结果如图所示。下列叙述错误的是()A.为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌B.倒平板后需间歇晃动，以保证表面平整C.图中Ⅰ、Ⅱ区的细菌数量均太多，应从Ⅲ区挑取单菌落D.该实验结果因出现单菌落，能达到菌种纯化的目的答案B解析为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌，A正确；倒平板时需左三圈，右三圈的轻轻晃动，以保证表面平整，B错误；图中Ⅰ、Ⅱ区的细菌数量均太多，应从Ⅲ区挑取单菌落，C正确；该实验的Ⅲ区已经出现由单个细菌繁殖而形成的菌落，因此已经达到菌种纯化的目的，D正确。思维导图晨读必背1.培养基中一般都含有碳源、氮源、水和无机盐等营养物质。2.消毒的目的是杀死物体表面或内部一部分微生物；灭菌则是杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。3.实验室常用煮沸消毒法、巴氏消毒法和使用化学药剂或紫外线进行消毒，常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和湿热灭菌等。4.微生物的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤。随堂检测1.微生物培养过程中，要十分重视无菌操作，现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，防止杂菌污染。请分析下列操作中错误的是()A.自来水常用氯气进行消毒B.接种操作要在酒精灯火焰附近进行C.大多数培养基要进行湿热灭菌D.加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌答案D解析水源常用氯气消毒，A正确；酒精灯火焰附近存在一个无菌区，为了避免杂菌污染，接种操作要在酒精灯火焰附近进行，B正确；大多数培养基要进行湿热灭菌，C正确；加入培养基中的指示剂和染料也需要灭菌，D错误。2.下列是对四种微生物的能源、碳源、氮源、新陈代谢类型的描述，正确的一组是()选项微生物种类乳酸菌根瘤菌硝化细菌衣藻A能源糖类光能NH3光能B碳源糖类CO2CO2CO2C氮源NOeq\o\al(－,3)N2NH3NOeq\o\al(－,3)D代谢类型异养厌氧型自养好氧型自养好氧型自养好氧型答案C解析根瘤菌不能利用光能，A错误；根瘤菌能固氮，但不能自己制造有机物，它的碳源不是CO2，B错误；乳酸菌的氮源是NOeq\o\al(－,3)，根瘤菌能固氮、氮源是N2，硝化细菌的氮源是NH3，衣藻的氮源是NOeq\o\al(－,3)，C正确；根瘤菌的代谢类型是异养好氧型，D错误。3.A～D依次表示倒平板、接种的位置，以及划线法接种的路径示意图，错误的是()答案D解析倒平板时，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，防止空气中的杂菌污染，A正确；接种时，在酒精灯火焰附近，左手将培养皿打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，B正确；划线时要从上一次划线的末端开始进行，让菌种来源于上一次划线末端，C正确、D错误。4.下图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤，下列说法错误的是()A.①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行B.步骤①中待倒入的培养基冷却后盖上培养皿的皿盖C.步骤③中，每次划线前后都需对接种环进行灭菌处理D.划线结束后，将图④平板倒置后放入培养箱中培养答案B解析分析题图可知，①是倒平板，②是用接种环蘸取菌液，③是进行平板划线，④是培养。①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行，以防止杂菌污染，A正确；倒完平板后应立即盖上培养皿的皿盖，以防止杂菌污染，B错误；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单菌落，C正确；划线结束后，将平板倒置后放入培养箱中培养，可以避免培养基中的水分过快地挥发和防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染，D正确。eq\a\vs4\al\co1(课后·分层训练)(时间：30分钟)知识点1培养基的配制1.关于微生物的营养，下列说法正确的是()A.同一种物质不可能既作碳源又作氮源B.除水以外的无机物仅提供无机盐C.凡是碳源都能提供能量D.无机氮源也可能提供能量答案D解析对异养微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源，如牛肉膏，A错误；CO2和N2是无机物，也是某些微生物的碳源和氮源，B错误；有机碳源能提供能量，无机碳源不能提供能量，C错误；硝化细菌可利用体外NH3氧化获得能量，D正确。2.下列关于微生物实验室培养的叙述，正确的是()A.制备培养基时，应先灭菌后定容再倒平板B.培养霉菌时需将培养基的pH调至中性或弱碱性C.培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素D.培养破伤风芽孢杆菌时需要提供有氧的条件答案C解析制备培养基时，应先定容后灭菌再倒平板，A错误；培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，B错误；维生素是乳酸杆菌生长繁殖所必需的，但其自身不能合成，因此培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，C正确；破伤风芽孢杆菌属于厌氧菌，培养破伤风芽孢杆菌时需要提供无氧的条件，D错误。知识点2无菌技术3.防止杂菌入侵，获得纯净的培养物是研究和应用微生物的前提。下列叙述错误的是()A.实验室里可用化学药物或紫外线对物体表面或空气进行消毒B.实验室里不可吃东西，离开时一定要洗手以防被微生物感染C.接种环、接种针等用具应在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌D.使用后的培养基在丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境答案C解析实验室里可以用紫外线或化学药物进行消毒，A正确；实验室中，不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防被微生物感染，B正确；接种环、接种针等金属用具，应在酒精灯火焰的充分燃烧层(外焰)灼烧灭菌，C错误；使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境，D正确。4.金黄色葡萄球菌有很强的致病力，可能引起食物中毒，利用该菌进行实验，结束后的做法不正确的是()A.对接种环进行灼烧处理B.带菌培养基经高压蒸汽锅灭菌后倒掉C.带菌培养基经加热后才能倒掉D.接种后双手必须用肥皂洗净，再用体积分数为75%的酒精棉球擦拭答案C解析接种环属于金属用具，所以要用灼烧灭菌的方法进行灭菌处理，A正确；为了避免对环境造成污染，带菌培养基必须经过高压蒸汽灭菌后才能被倒掉，加热后不一定能将细菌杀死，B正确、C错误；实验结束后，对实验者的双手必须进行消毒，一般用洗涤剂洗涤或者酒精擦拭，D正确。5.下列有关无菌技术的说法，正确的是()A.无菌技术的关键是杀灭实验室中所有的微生物B.培养微生物的试剂和器具都要进行高压蒸汽灭菌C.经巴氏消毒法处理的食品因微生物未被彻底消灭，不能在常温下长期保存D.在无菌技术中，若处理对象为液体，则只能消毒，不能灭菌答案C解析无菌技术的关键是防止杂菌的污染，A错误；培养微生物的培养基一般用高压蒸汽灭菌，微生物的接种工具，如接种针、接种环或其他金属用具一般通过酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧来灭菌，B错误；经巴氏消毒法处理的食品因微生物未被彻底消灭，不能在常温下长期保存，C正确；在无菌技术中，若处理对象为液体，可以用高压蒸汽灭菌法灭菌，D错误。知识点3微生物的纯培养6.如图是实验室培养和纯化酵母菌过程中的部分操作步骤，下列说法错误的是()A.①步骤使用的培养基已经灭菌B.①②③步骤操作时均需要在酒精灯火焰旁进行C.④在恒温培养箱中培养时需要将平板倒置D.④操作过程中，需灼烧接种环5次答案D解析①为倒平板，该步骤使用的培养基已经灭菌，A正确；①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行，防止被杂菌污染，B正确；④在恒温培养箱中培养时需要将平板倒置，防止冷凝水滴入培养基，造成污染，C正确；每次划线前后都要灼烧接种环，因此④操作过程中，需灼烧接种环6次，D错误。7.如图是倒平板的操作，下列相关叙述错误的是()A.正确的操作顺序应该是丙→乙→甲→丁B.甲在酒精灯火焰附近进行可以避免杂菌污染C.丁操作必须要等待平板冷却凝固后才能进行D.培养基应冷却到50℃倒平板是因为该温度下不易受杂菌污染答案D解析倒平板正确的操作顺序应该是丙→乙→甲→丁，A正确；将培养基倒入培养皿(甲)，在酒精灯火焰附近进行可以避免杂菌污染，B正确；丁操作为将培养基倒置，必须要等待平板冷却凝固后才能进行，C正确；培养基冷却到50℃时既不烫手，也不发生凝固，适宜进行倒平板，而不是防止杂菌污染，D错误。8.下列有关微生物的分离与培养的叙述，错误的是()A.获得纯培养物的关键是防止杂菌污染B.倒置平板可防止培养皿盖上的冷凝水滴落造成污染C.倒平板时将培养皿的盖拿开，以便于将锥形瓶中的培养基倒入培养皿D.检验培养基是否被杂菌污染的最有效方法是将未接种的培养基放在恒温箱中培养答案C解析倒平板时用食指和拇指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，使其恰好能让锥形瓶瓶口伸入，随后倒入培养基，C错误。9.接种微生物的方法很多，平板划线法是最常用的一种。如图是平板划线示意图，划线的顺序为①②③④。操作方法中错误的是()A.划线操作时，将沾有菌种的接种环插入培养基B.平板划线后培养微生物时要倒置培养C.不能将第④区域的划线与第①区域的划线相连D.在②～④区域中划线前后都要对接种环进行灭菌答案A解析将沾有菌种的接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线，而不能插入培养基；用平板划线法培养微生物时，为防止水蒸气凝集滴入培养基造成干扰或污染，应将平板倒过来放置培养；划线时要避免最后一区的划线与第一区相连，因为最后一区的细菌最稀少，而第一区的细菌最致密，如果连在一起则有可能影响单个菌落的分离效果；在②～④区域中划线前都要对接种环进行灼烧灭菌，保证每次划线的菌种来自上一区域的末端，划线结束灼烧接种环是为了防止菌种污染环境和感染操作者。10.如图为实验室培养和纯化醋酸菌的部分操作步骤，请回答下列问题：(1)步骤①是制备培养基时________的操作，该操作需待培养基冷却至________左右时进行。(2)该实验中纯化醋酸菌的接种方法是________；完成步骤④的操作，接种环共需要________次灼烧处理，其中最后一次灼烧的目的是___________________________________________________________________。(3)划线的某个平板经培养后，第一次划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二次划线区域的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落，造成划线上无菌落可能的操作失误有_________________________________________________________________________________________________________(回答2个即可)。(4)接种结束后，将步骤④中的培养皿倒置培养，皿底标注___________________________________________________________________。答案(1)倒平板50℃(2)平板划线法6杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者(3)接种环灼烧后未冷却；划线未从第一次划线末端开始(4)菌种及接种日期等信息解析(1)步骤①是制备培养基时倒平板的操作，需要将培养基冷却到50℃左右时进行。(2)根据步骤④可知，该实验纯化醋酸菌的接种方法是平板划线法，平板划线时，每次划线后接种环都要进行灼烧，第一次划线前也要进行灼烧，因此完成步骤④的操作，接种环共需要6次灼烧处理，其中最后一次灼烧的目的是杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。(3)造成划线上无菌落可能的操作失误有接种环灼烧后未冷却或划线未从第一次划线末端开始。(4)为了防止培养皿盖上的水珠滴落到培养基上引发污染，需要将培养皿倒置培养，且同时在培养皿底标注菌种及接种日期等信息。11.下图甲、乙是微生物接种常用的两种方式，回答相关问题：(1)图甲是利用________法进行微生物接种的，图乙是利用________法进行微生物接种的，这两种方法所用的接种工具分别是________和________；对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是________和酒精消毒。(2)平板划线时，为保证微生物的数目随划线次数的增加而逐步减少，每次划线都要从________开始，平板划线结束后，最后一次划的线不能与第一次划的线________。(3)接种操作为什么一定要在酒精灯火焰附近进行？____________________________________________________________________。(4)下图是接种后培养的效果图解，其接种方法是________(填“图甲”或“图乙”)所示方法。(5)假设用图乙所示方法接种培养结束后，发现培养基上菌落连成一片，可能的原因是_________________________________________________________。答案(1)平板划线稀释涂布平板接种环涂布器灼烧灭菌(2)上一次划线的末端相连(或相接、相交、交叉等)(3)酒精灯火焰附近存在着无菌区域(4)图乙(5)稀释倍数不够，菌液的浓度太高解析(1)分析题图可知，图甲和图乙分别是利用平板划线法和稀释涂布平板法进行微生物接种的，这两种方法所用的接种工具分别是接种环和涂布器。对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是灼烧灭菌和酒精消毒。(2)平板划线时，每次划线前都要从上一次划线的末端开始，最后一次的划线不能与第一次的划线相连。(3)在酒精灯火焰附近存在着无菌区域，因此接种常在酒精灯火焰附近进行。(4)分析题图可知，培养基上的菌落分布均匀，则其接种方法为稀释涂布平板法。(5)采用稀释涂布平板法进行菌种分离时，稀释度要足够高，否则会导致微生物不能分散成单个细胞。第2课时微生物的选择培养和计数课程内容标准核心素养对接1.阐明微生物选择培养的原理。2.概述测定微生物数量的方法。3.进行土壤中分解尿素的细菌的分离与计数。1.科学思维——根据微生物的代谢特征配制选择培养基。2.科学探究——设计实验分离土壤中的尿素分解菌，并对实验结果进行分析与评价。知识点1选择培养基及微生物的选择培养1.选择培养基2.微生物的选择培养(稀释涂布平板法)(1)系列稀释操作将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。(2)涂布平板操作(3)培养分离：待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30～37℃的恒温培养箱中培养1～2d。在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落。知识点2微生物的数量测定1.稀释涂布平板法2.显微镜直接计数法(1)稀释涂布平板法既能分离细菌，也能对细菌进行计数(√)(2)取1mL稀释后的菌液，滴加到培养基表面进行涂布(×)(3)将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽后，立即进行涂布(×)(4)利用稀释涂布平板法统计菌落数目时，统计的菌落数就是活菌的实际数(×)(5)统计菌落数目时为保证结果准确，一般选择菌落数目最多的平板进行统计(×)(6)利用稀释涂布平板法和平板划线法均可实现细菌的分离和计数(×)(7)利用显微镜直接计数法统计的细菌数量就是活菌的数量(×)eq\x(教材P17图示拓展)下图是稀释涂布平板法操作的示意图，回答下列问题：(1)请用字母和箭头表示稀释涂布平板法操作的正确步骤。提示a→b→c→d(2)稀释涂布平板法的所有操作为什么都应在酒精灯火焰附近进行？提示在酒精灯火焰附近存在无菌区，在火焰旁操作可以保证无菌，防止杂菌污染。(3)如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是什么？应当怎样操作才可避免此种现象？提示最可能的原因是菌液浓度过高或划线时在划下一区域前未将接种环灼烧灭菌；采取的措施是增大稀释倍数或每次划新区域前先将接种环灼烧灭菌。探究点一选择培养基和微生物的选择培养1.筛选分解尿素的细菌的选择培养基的配方如表所示：组分含量KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g琼脂15.0gH2O定容至1000mL(1)在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？提示碳源是葡萄糖，氮源是尿素。(2)分离分解尿素的细菌的选择培养基是如何进行选择的？提示该选择培养基的配方中，尿素是培养基中的唯一氮源，因此，只有能够利用尿素的微生物才能够生长。(3)为什么只有能分解尿素的微生物才能在该培养基上生长？提示分解尿素的微生物能合成脲酶，而脲酶可催化尿素分解产生NH3，NH3可作为微生物生长的氮源。2.用平板划线法接种培养结果的图片如图。请结合图片分析，平板划线法能否达到对细菌进行计数的目的？为什么？提示不能，平板划线法最开始的划线很可能菌类会长成一片，导致无法计数，此外灼烧接种环的时候也会杀死一部分菌类。3.当菌液稀释倍数足够高时，培养基表面生长的一个单菌落来源于一个活菌。用稀释涂布平板法接种培养结果的图片如图。与平板划线法相比，为什么稀释涂布平板法可以用于细菌的计数？提示稀释涂布平板法会进行等比稀释，在合适的稀释倍数下，均匀涂布得到的菌落互不接触，可以确定菌落的密度，再通过计算可以得知原液的细菌数量。1.稀释涂布平板法(1)主要操作环节：系列稀释和涂布平板。(2)系列稀释和涂布平板后培养结果如图所示2.平板划线法和稀释涂布平板法的比较[例1]用来判断选择培养基是否起到了选择作用和培养基是否被污染需要设置的对照分别是()①未接种的该选择培养基②接种了的该选择培养基③接种了的牛肉膏蛋白胨培养基④未接种的牛肉膏蛋白胨培养基A.②① B.④②C.③① D.③②答案C解析根据单一变量原则，对照组需要与选择培养基一样接种、培养，因此用接种了的普通培养基和选择培养基进行对照，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，说明选择培养基合格，起到了选择作用，而判断培养基是否被污染需要设置的对照是相同的培养基但不接种，将两者在相同的条件下培养，观察是否有菌落产生。[例2]解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成脂肪酸和甘油并吸收利用。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲、乙两种菌分别等量接种在醇溶青琼脂平板上培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色。下列说法错误的是()A.甲菌属于解脂菌B.实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源C.可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比D.该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力答案B解析根据题意，甲、乙两种菌分别接种在醇溶青琼脂平板上，二者都能生存，甲周围呈现深蓝色，说明培养基的脂肪被分解为脂肪酸和甘油，脂肪酸使平板呈现深蓝色，脂肪的分解需要脂肪酶的催化，说明甲能够分泌脂肪酶，属于解脂菌，A正确；乙周围不变色，说明乙不能分泌脂肪酶分解脂肪，没有脂肪酸的产生，不能利用脂肪，但由于乙能在该培养基上生存，说明该培养基中除了脂肪作为碳源外，还存在别的碳源，否则乙不能在该培养基上生存，B错误；为了便于比较结果，可以将两种菌接种到同一平板的不同区域，C正确；菌落周围深蓝色的直径越大，说明解脂菌分泌脂肪酶的能力越强，D正确。探究点二微生物的数量测定1.甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。(1)甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230，该同学的统计结果是否真实可靠？为什么？提示不真实可靠。为增加实验的说服力与准确性，应设置重复实验，在同一稀释度下至少涂布3个平板，统计结果后计算平均值。(2)乙同学在该浓度下涂布了3个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学将21舍去，然后取平均值。该同学对实验结果的处理是否合理？为什么？提示不合理。微生物计数时，如果实验中出现重复实验的结果差别很大的情况，应分析实验过程中可能的影响因素，找出差异的原因，而不能简单地将结果舍弃后进行计数。(3)某同学在三种稀释度下吸取0.1mL的菌液涂布平板，统计菌落数，得到以下的数据，试计算1g样品的活菌数。提示105的稀释度下取0.1mL的菌液涂布的三个平板上的菌落数在30～300之间，计算其平均值为(212＋234＋287)/3≈244。进一步可以换算出1g样品中活菌数为(244÷0.1)×105＝2.44×108(个)。(4)为什么统计的菌落数比活菌的实际数目低？提示当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。2.下面是土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的实际流程示意图，请分析：(1)测定土壤中细菌的数量，一般选择用多大稀释倍数的稀释液进行涂布平板？测定土壤中细菌的数量和能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？为什么？提示测定土壤中细菌的数量，一般选择用1×104、1×105和1×106倍稀释的稀释液进行平板培养。不相同，因为土壤中能分解尿素的细菌的数量比细菌的总量要少。(2)第一次实验可以选择用多大稀释倍数的稀释液进行涂布平板？第一次实验时为什么要将稀释范围放宽一些？提示第一次实验时可以将1×103～1×107倍稀释的稀释液分别涂布到平板上进行培养。为了确保能从中选出菌落数在30～300之间的平板进行计数。(3)在稀释涂布平板法中，为何需至少涂布3个平板？提示作为重复实验，统计时取平均值，以减少偶然因素对实验结果的影响，增强实验结果的说服力。1.两种微生物计数方法的比较2.“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验结果分析3.土壤中分解尿素细菌的鉴定原理分解尿素的细菌合成的脲酶将尿素分解为NH3，使培养基的碱性增强，pH升高。在选择培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌，若指示剂变红，可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。[例3]用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数，原因是()A.菌落中的细菌数目是固定的B.平板上的一个菌落就是一个细菌C.通过此方法统计的菌落数与活菌的实际数目相同D.平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌答案D解析用稀释涂布平板法进行微生物计数时，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，一般来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品大约含有多少活菌。[例4]下列有关土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的实验操作，错误的是()A.取土壤用的小铁铲和装土样的信封在使用前都需要灭菌B.测定土壤中细菌的数量一般选用102、103、104倍稀释的稀释液进行平板培养C.鉴定分解尿素的细菌，利用了尿素分解成氨，从而使pH升高的原理D.用牛肉膏蛋白胨培养基作对照，来验证选择培养基是否有选择性答案B解析取土壤用的小铁铲和装土样的信封在使用前都需要灭菌，A正确；在测定土壤中细菌的数量时，一般选用104、105和106倍稀释的稀释液进行平板培养，B错误；鉴定分解尿素的细菌的原理：该细菌能产生脲酶，脲酶能将尿素分解成氨，从而使pH升高，使酚红变红色，C正确；用牛肉膏蛋白胨培养基作对照，来验证选择培养基是否有选择性，若有选择性，其上菌落数目要比对照组少的多，D正确。①计数的时机：当各平板上菌落数目稳定时进行计数。②每克样品中的菌株数＝某一稀释度下平板上生长的平均菌落数÷涂布平板时所用的稀释液的体积×稀释倍数。思维导图晨读必背1.测定微生物数量的常用方法有活菌计数法和显微镜直接计数法。稀释涂布平板法常用来统计活菌的数目，但统计结果往往比活菌的实际数目少。2.只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，因此可用以尿素作为唯一氮源的选择培养基分离能分解尿素的细菌。3.为了保证结果准确，一般选择菌落数为30～300的平板进行计数；在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。随堂检测1.下列关于微生物分离和培养的叙述，错误的是()A.可采用干热灭菌法对微生物培养基进行灭菌B.测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法C.分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度D.分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源答案A解析培养基灭菌通常使用湿热灭菌法，如高压蒸汽灭菌法，而干热灭菌法通常适用于玻璃器皿、金属用具等耐高温且不适合其他灭菌方法的物品，A错误；单个微生物在固体培养基上可以形成单菌落，所以测定土壤样品中的细菌数目，常采用菌落计数法，B正确；土壤中不同的微生物的数目不同，所以需要采用不同的稀释度，C正确；分离能分解尿素的细菌，用的选择培养基里尿素是唯一的氮源，这样才能分离出分解尿素的细菌，D正确。2.稀释涂布平板法是微生物培养的一种常用的接种方法。下列相关叙述错误的是()A.操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释B.不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个的菌落C.需将不同稀释浓度的菌液分别涂布到固体培养基表面D.操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理答案B解析稀释涂布平板法的操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释，当稀释度足够高时，可在培养基表面形成单个的菌落，若稀释度不够高，细胞聚集在一起，得不到单个的菌落，A正确，B错误；需将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面，C正确；操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理，以防杂菌污染，D正确。3.筛选淀粉分解菌需使用以淀粉为唯一碳源的培养基。接种培养后，若细菌能分解淀粉，培养平板经稀碘液处理，会出现以菌落为中心的透明圈(如图)，实验结果见下表。菌种菌落直径：C/mm透明圈直径：H/mmH/C细菌Ⅰ5.111.22.2细菌Ⅱ8.113.01.6有关本实验的叙述，错误的是()A.培养基除淀粉外还含有氮源等其他营养物质B.筛选分解淀粉的细菌时，菌液应稀释后涂布C.以上两种细菌均不能将淀粉酶分泌至细胞外D.H/C值反映了两种细菌分解淀粉能力的差异答案C解析微生物培养基一般都含有四类营养物质：水、无机盐、碳源、氮源，A正确；常用稀释涂布平板法筛选淀粉分解菌，涂布前需将菌液稀释，B正确；由题图可知，细菌Ⅰ和Ⅱ形成的菌落周围都出现了透明圈，说明两种细菌都能将淀粉酶分泌至细胞外，C错误；淀粉分解菌可分解淀粉，导致菌落周围的淀粉被分解，不能与碘液反应生成蓝色，故而出现透明圈，透明圈直径与菌落直径的比值越大，说明细菌分解淀粉能力越强，D正确。4.如图是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，下列叙述错误的是()A.能产生脲酶的细菌可以分解利用尿素B.图中逐级稀释的程度会直接影响细菌培养基上的菌落数量C.培养基中可添加KH2PO4、Na2HPO4以提供无机盐和作为缓冲剂D.培养基①应以尿素为唯一氮源，培养基②的作用是纯化培养产脲酶的细菌答案D解析只有能产生脲酶的细菌，可以通过脲酶分解利用尿素，A正确；稀释度越低，细菌培养基上菌落数越多，稀释度越高，细菌培养基上菌落数越少，所以逐级稀释的程度会直接影响细菌培养基上的菌落数量，B正确；培养基中可添加KH2PO4、Na2HPO4，为细菌生长提供无机营养、作为缓冲剂维持细胞生长过程中的pH，C正确；培养基①为选择培养基，以尿素为唯一氮源，培养基②为鉴别培养基，通过加入酚红指示剂，判断菌落周围指示剂是否变红，不是用于纯培养产脲酶的细菌，D错误。eq\a\vs4\al\co1(课后·分层训练)(时间：30分钟)知识点1选择培养基及微生物的选择培养1.最常用的接种微生物的方法是平板划线法和稀释涂布平板法，下列关于二者的比较，正确的是()平板划线法稀释涂布平板法①需在无菌条件下操作不需无菌操作②培养基中不加琼脂培养基中加有琼脂③不可计算菌液中的活菌数可计算菌液中的活菌数④需要接种环需要涂布器A.③④ B.②④C.①④ D.②③答案A解析两种方法都需要在无菌条件下操作，①错误；两种方法都需要配制固体培养基，均需要添加琼脂，②错误；平板划线法不能对菌落进行计数，稀释涂布平板法能进行活菌计数，③正确；平板划线法的接种工具是接种环，稀释涂布平板法的接种工具是涂布器，④正确，A符合题意。2.某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3供植物吸收和利用。以下说法错误的是()A.土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶B.能分解尿素的细菌也能以尿素的分解产物CO2作为碳源C.为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时应选择尿素作为唯一氮源D.筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4的作用是提供无机盐和维持pH答案B解析土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，A正确；能分解尿素的细菌是一种分解者，属于异养型微生物，不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，B错误；为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时应选择尿素作为唯一氮源，C正确；筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4的作用是提供无机盐和维持pH，D正确。3.在筛选纤维素分解菌的培养基中加入刚果红染料，研究者观察到几个有透明圈的菌落。据图分析正确的是()A.透明圈内的刚果红染料已被分解B.菌落②中的菌株降解纤维素能力最强C.图中菌落可能是细菌也可能是真菌D.图中培养基可用牛肉膏、蛋白胨配制答案C解析根据分析可知，透明圈不显红色的原因是其中的纤维素已被分解，A错误；菌落①形成的透明圈直径与菌落直径之比最大，说明菌落①降解纤维素能力最强，B错误；根据题干信息不能判断图中菌落的微生物类型，可能是细菌也可能是真菌，C正确；图中培养基应以纤维素为唯一碳源，不可用牛肉膏、蛋白胨配制，D错误。4.下列关于稀释涂布平板法相关操作的叙述，错误的是()A.将涂布器末端浸在盛有体积分数为70%酒精的烧杯中消毒B.涂布前取不超过0.1mL的菌液滴加到培养基表面C.将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，燃尽即可进行涂布D.用涂布器将菌液涂布在培养基表面时可转动培养皿使涂布均匀答案C解析进行涂布平板操作前，要对涂布器进行灭菌，一般的做法是先将涂布器浸在盛有体积分数为70%酒精的烧杯中，然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，A正确；涂布平板时，取不超过0.1mL的菌液，滴加到培养基表面，B正确；将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后冷却再进行涂布，C错误；涂布时，用涂布器将菌液涂布在培养基表面时可转动培养皿使涂布均匀，D正确。知识点2微生物的数量测定5.如图为“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验中样品稀释示意图。据图分析下列叙述正确的是()A.3号试管中的菌液稀释倍数为103倍B.4号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数可能是5号试管的10倍C.5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7×109个D.该实验方法统计得到的结果往往会比活菌的实际数目要高答案B解析3号试管中菌液稀释倍数是104倍；4号试管的稀释倍数比5号试管低10倍，如果稀释倍数适当，得到的菌落平均数可能是5号试管的10倍；5号试管进行稀释涂布平板法计数的结果表明每克土壤中的菌株数为(168＋175＋167)/3÷0.1×106÷10＝1.7×108(个)；通过稀释涂布平板法得到的菌落可能存在两个或多个细胞连在一起长成一个菌落的情况，故该实验方法统计得到的结果往往会比活菌的实际数目要低。6.如图是从土壤中分离能降解纤维素的微生物实验过程流程图。下列有关叙述正确的是()A.该实验所用的牛肉膏蛋白胨培养基中一定要添加适量的纤维素B.过程①不能提高所选微生物在培养物中的比例C.过程②纯化经过③培养后获得的单细胞菌落属于种群层次D.④的操作是挑取单菌落进行菌种鉴定并在皿盖及时做上标记答案C解析由于该实验目的是从土壤中分离能降解纤维素的微生物，故所用培养基需要以纤维素为唯一碳源，不能用牛肉膏蛋白胨培养基，A错误；过程①利用以纤维素为唯一碳源的培养基进行培养，可进一步提高能降解纤维素的微生物在培养物中的比例，B错误；过程②纯化经过③培养后获得的单细胞菌落只有一种微生物，属于种群层次，C正确；④的操作是挑取单菌落进行菌种鉴定并在皿底及时做上标记，D错误。7.某研究小组利用稀释涂布平板法来估测大肠杆菌的数量，每一个浓度涂布四个平板。下列关于操作步骤的叙述正确的是()A.因为实验前后形成对照，因此本实验不必设置空白对照组B.涂布前将沾有少量酒精的涂布器引燃，待涂布器冷却后再涂布C.为避免混淆应在培养皿的皿盖上做标记，并将培养皿倒置培养D.用此法估测的数值往往偏小，故应以菌落数最多的平板计数为准答案B解析需要一个空白的牛肉膏蛋白胨培养基做对照，可以判断培养基是否被杂菌污染，A错误；涂布器灭菌时，将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却后再用，B正确；用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底，因为如果把标签写在盖子上，培养皿倒置后标签就看不到了，C错误；当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，一般选择菌落数在30～300之间的平板进行计数，密度过大会使计数结果偏小，影响结果的准确性，D错误。8.用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106培养基中得到以下几种统计结果，正确的是()A.涂布1个平板，统计菌落数是230B.涂布2个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238C.涂布了3个平板，统计的菌落数分别是21、212、256，取平均值163D.涂布了3个平板，统计的菌落数分别为210、240、250，取平均值233答案D解析A、B项中只涂布了1个和2个平板，所以A、B错误；C项虽涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另两个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，数据重复性差，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值，C错误；D项涂布了3个平板，并且数据接近，可重复性强，D正确。9.某种物质X(一种含有C、H、O、N的有机物)难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解X。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离