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文档简介
15I本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定托克前旗农牧业技术推广中心、鄂尔多斯市农牧技术推广1马铃薯腐烂茎线虫分离、鉴定及培养技术规程GB/T29577腐烂茎线虫检疫鉴定NY/T1121.1土壤检测第1部分：土壤样品的采集、处理和贮存3.11mg/mL蛋白酶K，2×TaqPCRMasterMix、50×TAE、核酸4.2引物序列2将土壤称取50g、块茎切成1cm的小块，采用改进贝尔曼漏斗法进行分离，应符合SN/T1132的规5.3玻片制备于65℃水浴锅中处理3min，热杀死线虫后，用4%甲醛进行固定，制使用上述制备好的临时玻片，每个样品各选取20条雌雄虫进行测量，主要测量线虫体长肠前端的距离之比（b）、线虫体长与其尾长比（c）、体前端至阴门的距离×100/体长（V）6.2分子生物学鉴定），列比对分析，从NCBIGenBank数据库中根据E-score的高低排序，下载同源性较高的部分马铃薯腐烂茎3在PDA培养基平板上纯化链格孢菌（Alternariatenuis）和茄腐镰刀菌（Fusariumsolani之后接入1000条马铃薯腐烂茎线虫，25℃暗培养30d，可获得大量马铃薯腐烂茎7.2薯块培养线虫悬浮液制备：将分离得到的线虫用0.5%次氯酸钠溶液消毒1min后，3000r/min离心2min,弃上清液；加入0.5%硫酸链霉素和0.5%青霉素的混合液中消毒10min，离心后弃上清液，用无菌水冲洗3），腐烂茎线虫培养扩繁：将健康马铃薯薯块用流动水冲洗、去芽去泥，75%酒精表面消毒。用灭菌的打孔器在薯块中央打孔；每个孔内接入线虫约500条，将取下的薯块组织塞回原处，石蜡封口。接种后置于25℃培养箱中进行暗培养，40d后进行马铃薯腐烂茎线虫的分离，于4℃保存备用。保存或培养菌株后的PDA培养基及玻璃器皿应经高压蒸汽灭菌后方可清洗和处理，使其达到对环境的无4以卵、幼虫和成虫寄生马铃薯的块茎以及根部在窖中越冬，同时幼虫和成线虫在5℃~34℃条件下均能发育、繁殖，20℃~27℃为最适宜的繁殖温度，在27℃~28℃下，完成一代需要18d；20℃~24℃下则需20d~26d；6℃~10℃下需68d。通过被侵染的植物的地下器官如根的土壤进行传播，在田间还可以通过农5马铃薯腐烂茎线虫分类、形态特征及与腐生性线虫的形 （DitylenchusdestructorThorne）（Anguinidae）、茎线虫属的水平处向
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