3.2.3基因工程的基本操作程序（DNA凝胶电泳基因表达载体的构建）高二下学期生物人教版选择性必修3

第三章基因工程基因工程的基本操作程序（DNA凝胶电泳+基因表达载体的构建）移液离心反应制备凝胶加样电泳①②③④基因表达载体≠载体导学核心步骤导学P80第一段P80第二段目的P84第一段P84第二段P85注意1-4打勾思1.【P84第一段】PCR利用了DNA的热变性原理2.DNA向着与其所带电荷相同的电极移动3．加样时，将PCR产物注入靠近阴极的加样孔内4.带有负电荷的核酸需要加在电泳槽的负极5.DNA片段根据长度大小在凝胶上分开，形成连续的条带6.切断电源后即可用肉眼观察到DNA条带在凝胶上的位置7.P84表格:PCR反应体系中的扩增缓冲液中含有、4种脱氧核糖核苷酸等成分8．为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头、蒸馏水和移液器等在使用前都必须进行高压灭菌处理9．在向微量离心管中添加反应组分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头都必须更换10.【P85注意2】PCR所用的缓冲液和酶从冰箱拿出之后，迅速融化11.进行DNA片段的扩增及电泳鉴定实验所需的缓冲液和酶应分装成小份，并在20℃储存12．【P85步骤7】电泳时，电泳缓冲液不能没过凝胶以免凝胶加样孔中的电泳样液流出13．在提取白色丝状物时双向搅拌比单向搅拌更有利于获得结构完整的DNA14.【P85步骤4、8、9】上(载)样缓冲液中的电泳指示剂可使核酸显色15.【P85步骤8】琼脂糖凝胶电泳中的缓冲液中含指示剂，其可以在紫外灯下被检测出来16．琼脂糖凝胶中的DNA分子和扩增的引物被核酸染料染色后，可在紫外灯下检测出来17.基因表达载体中的胰岛素可通过人肝细胞mRNA逆转录获得18．表达载体的复制和胰岛素基因的表达均启动于复制原（起）点19．一种双链DNA分子被三种不同的限制酶切割，切割产物通过电泳分离，电泳结果如图

①呈环状结构

②分子质量大小为10kb

③有一个NotI和两个EcoRI切点

④其NotI切点与EcoRI切点的最短距离为2kb议自由展1.【P84第一段】PCR利用了DNA的热变性原理

√2.DNA向着与其所带电荷相同的电极移动

×相反3．加样时，将PCR产物注入靠近阴极的加样孔内

×

DNA分子可带正电荷或负电荷，加样时不一定靠近阴极4.带有负电荷的核酸需要加在电泳槽的负极

对

加在负极，向正极迁移5.DNA片段根据长度大小在凝胶上分开，形成连续的条带×

不连续6.切断电源后即可用肉眼观察到DNA条带在凝胶上的位置

错

紫外灯下观察照相7.P84表格:PCR反应体系中的扩增缓冲液中含有4种脱氧核糖核苷酸等成分

错8.为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头、蒸馏水和移液器等在使用前都必须进行高压灭菌处理

×移液器不需灭菌处理9.在向微量离心管中添加反应组分时,每吸取一种试剂后，移液器上的枪头都必须更换

对10.【P85注意2】PCR所用的缓冲液和酶从冰箱拿出之后，迅速融化

×

缓慢11.DNA片段的扩增及电泳鉴定实验所需缓冲液和酶应分装成小份,在20℃储存

错-20℃12．电泳时，电泳缓冲液不能没过凝胶以免凝胶加样孔中的电泳样液流出

×

没过1mm13.提取白色丝状物时双向搅拌比单向搅拌更有利于获得结构完整的DNA

×单向更有利于展114.【P85步骤4、8、9】上(载)样缓冲液中的电泳指示剂可使核酸显色

×

核酸显色:核酸染料，不是电泳指示剂

15.【P85步骤8】琼脂糖凝胶电泳中的缓冲液中含指示剂,其可以在紫外灯下被检测出来

×琼脂糖里加核酸染料(显色),不加指示剂16．琼脂糖凝胶中的DNA分子和扩增的引物被核酸染料染色后,可在紫外灯下检测出来

×扩增的产物

17.基因表达载体中的胰岛素可通过人肝细胞mRNA逆转录获得

错

基因选择性表达

不在人肝细胞中表达18．表达载体的复制和胰岛素基因的表达均启动于复制原(起)点×

表达启动于启动子展219．一种双链DNA分子被三种不同的限制酶切割，切割产物通过电泳分离，电泳结果如左图

①呈环状结构

√

②分子质量大小为10kb

√

③有一个NotI和两个EcoRI切点√

④其NotI切点与EcoRI切点最短距离为2kb

×1Kb20.图甲表示某环型DNA分子经限制性核酸内切酶（EcoRⅠ）完全酶切后的片段电泳结果,若改变条件使其酶切不充分就有可能获得如图乙所示的电泳结果（Kb即千个碱基对）①该DNA分子全长至少为7Kb，该DNA分子中至少含有4个EcoRⅠ酶切位点

√②反应时间越长，得到图甲结果的可能性越大

√③限制性核酸内切酶主要来自原核生物，化学本质都是蛋白质

√只有核酶本质是RNA④适当增加EcoRⅠ浓度，更可能得到图乙的结果

×

更可能得到图甲√展37.(1)DNA分子量越大，迁移速度越？慢

右图电泳起始端是上端(3)条带的宽度与①初始状态模板DNA含量

有关？

亮度与①初始状态模板DNA含量有关。迁移速率与②扩增产物大小有关？(2)图中M是标准对照，1-3依次循环16、18、21次后的结果图。阴性对照用①蒸馏水还是②已知长度的待测基因片段设置？阳性对照用①还是②设置？

M是否是阳性对照？(4)图中最适宜的循环次数是多少次？18

依据是?2号条带比1号条带宽、亮,而3号条带较弥散√√6.电泳结果出现非特异性条带的原因可能有？①②③

【二卷】①引物特异性不强（如与非目的序列有同源性）②模板DNA被污染③退火温度过低

④退火温度过高拓:从引物的角度考虑可能的原因是引物与非目的序列有同源性3.PCR控制DNA双链解聚与结合的方法是控制温度。4.PCR产物的鉴定方法是

琼脂糖凝胶电泳与DNA迁移速率有关的是:①凝胶浓度②DNA分子大小③DNA构象中评1（二）基因工程第二步(核心步骤)-基因表达载体的构建1.目的:①使目的基因在受体细胞中稳定存在；②并且可以遗传给下一代,

③同时使目的基因能够表达和发挥作用2.不能直接将目的基因导入受体细胞原因是:①目的基因无复制原点；②目的基因无表达所需启动子3.基因表达载体包括:目的基因、启动子、终止子、复制原点、

标记基因.启动子作用是：RNA聚合酶识别和结合的位点,驱动转录。RNA聚合酶结合部位:在DNA上，√√DNAmRNAmRNA转录翻译翻译启动子、终止子：本质是一段有特殊结构的DNA片段。【拓1】为使目的基因表达，应将目的基因插入启动子、终止子之间。2.甲重组质粒中目的基因不能表达，原因是甲中目的基因插入在启动子的上游，不能转录。丙重组质粒中目的基因不能表达，原因是目的基因插入在终止子的下游,不能转录。评2酶切位点能否用BamHⅠ和XbaⅠ？启动子

1.启动子具有物种特异性eg:枯草杆菌分泌一种降解纤维素的酶,由W基因编码。为在乳酸杆菌中表达W基因,在质粒上加入乳酸杆菌还是枯草杆菌的启动子？2.启动子具有组织特异性为使药用蛋白基因在牛乳腺细胞内特异性表达，将目的基因插入到乳腺中特异表达的基因启动子之后。3.插入不同外源基因时需插入不同的特异启动子。

原因是：特定基因只能在特定器官中表达

BLG基因:乳腺细胞中特异性表达评3DNA测序常用双脱氧核苷酸测序法,原理是:ddNTP3'碳原子都不含-OH,在DNA合成过程中不能形成磷酸二酯键,因此中断DNA分子合成反应。在四个单独的PCR反应体系中,分别额外掺入ddATP、ddTTP、ddGTP、ddCTP,使DNA复制随机终止,产生不同长度的DNA片段,然后凝胶电泳分离检测,从而分析获得目标DNA的碱基序列。评4目标DNA区域X的碱基序列为__5’—CTGACTT—3’检1.基因工程的核心：基因表达载体的构建，其目的是：①使目的基因在受体细胞中稳定存在,②并且可以遗传

给下一代,③同时使目的基因能够表达和发挥作用2.基因表达载体的组成包括目的基因、启动子、复制原点和终止子、标记基因.3.启动子作用是：RNA聚合酶识别和结合的位点，驱动转录。若要使目的基因正常表达，需将目的基因插入到_启动子和终止子_之间。4.基因表达载体构建用到的工具有限制酶、DNA连接酶、运载体.

基因表达载体基本单位:脱氧核苷酸5.腺病毒作为载体应具备的条件是①有一至多个限制酶切割位点②有标记基因③有复制原点6.有时为了满足应用的需要，会在载体中人工构建诱导型启动子，当诱导物存在时，可以？激活或抑制目的基因的表达7.PCR控制DN