TFJSPSH 002-2023 食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸的测定

ICS67.040CCSX04T/FJSPSH团 体 标 准T/FJSPSH002—2023食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸的测定布 施福建省食品企业商会发布T/FJSPSH002—2023T/FJSPSH002—2023前 言本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由泉州市壹合食品研究院有限公司提出。本文件由福建省食品企业商会归口。本文件主要起草单位：泉州市壹合食品研究院有限公司、晋江市食品行业协会、福建省食品质量监督检验中心、福建盼盼食品有限公司、泉州简方食品有限公司、豪利时（福建）食品科技有限公司、福建爱乡亲食品股份有限公司、唯王（福建）食品有限公司、晋江市闽南水产开发有限公司、福建省福食安检测技术有限公司、中纺检测（福建）有限公司。本文件主要起草人：蔡丽纯、陈昌熙、何晓玲、范国智、陈力、蔡钰鉴、林志民、凌大伟、施志烈、蔡志兴、李昆朋。T/FJSPSH002—2023T/FJSPSH002—2023--PAGE1-食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸的测定范围本标准规定了苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸的测定方法。本标准适用于各类食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸的测定。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法原理用氢氧化钠溶液提取试样中的苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸，经沉淀蛋白、去脂处理，用配紫外或二极管阵列检测器的液相色谱仪测定，以色谱峰的保留时间定性，外标法定量。试剂和材料除特殊注明外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。试剂甲醇（CH4O）：色谱级。氢氧化钠（NaOH）。硫酸锌（ZnSO4·7H2O）。正己烷（C6H14）。乙酸铵（C2H6O2N）。试剂配制0.50mol/L氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠,溶于水并稀释至1L。0.42mol/L硫酸锌溶液：称取120g硫酸锌,溶于水并稀释至1L。0.02mol/L乙酸铵溶液：称取1.54g乙酸铵,溶于水并稀释至1L。标准品苯甲酸(C6H5COOH,CAS号:65-85-0),纯度≥99.0%；苯甲酸钠(C6H5COONa,CAS号:532-32-1),纯度≥99.0%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。4.3.2山梨酸(C6H8O2,CAS号:110-44-1),纯度≥99.0%；山梨酸钾(C6H7KO2,CAS号:590-00-1),纯度≥99.0%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。糖精钠(C6H4CONNaSO2,CAS号:128-44-9),纯度≥80.0%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。脱氢乙酸(C8H8O4,CAS:520-45-6):纯度≥99.0%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。标准溶液的制备苯甲酸、山梨酸标准储备溶液(1000mg/L):分别准确称取适量的苯甲酸（苯甲酸钠）、山梨酸（山梨酸钾）标准品,用甲醇（苯甲酸钠、山梨酸钾用水）溶解并分别定容至50mL。于4℃贮存,保存期为3个月。糖精钠(以糖精计)和脱氢乙酸标准储备溶液(1000mg/L):分别准确称取适量的糖精钠和脱氢乙酸标准品,用水溶解并分别定容至50mL。于4℃贮存,保存期为3个月。注:糖精钠含结晶水,使用前需在120℃烘4h,干燥器中冷却至室温后备用。脱氢乙酸若存在不能完全溶解的情况，可先用氢氧化钠溶液（4.2.1）溶解，再用水定容。苯甲酸、山梨酸、糖精钠(以糖精计)和脱氢乙酸混合标准中间溶液(200mg/L):分别准确吸取苯甲酸、山梨酸、糖精钠(以糖精计)和脱氢乙酸标准储备溶液各10.0mL于50mL容量瓶中,用水定容。于4℃贮存,保存期为1个月。4.4.5苯甲酸、山梨酸、糖精钠(以糖精计)和脱氢乙酸混合标准系列工作溶液:分别准确吸取苯甲酸、山梨酸、糖精钠(以糖精计)和脱氢乙酸混合标准中间溶液0.05mL、0.25mL、0.50mL、1.00mL、2.50mL、5.00mL和10.0mL,用水定容至10mL,配制成质量浓度分别为1.00mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L、50.0mg/L、100mg/L和200mg/L的混合标准系列工作溶液。临用现配。材料水相微孔滤膜：0.22μm。刻度塑料离心管：50mL。pH试纸：范围为5.5-9.0。容量瓶：25mL。量筒：25mL。仪器和设备高效液相色谱仪：配紫外或二极管阵列检测器。5.2分析天平：感量为0.001g和0.0001g。超声波清洗器。水浴锅。离心机：转速≥8000r/min。涡旋混合机。组织匀浆机。研磨机。分析步骤试样制备固体样品用研磨机充分粉碎并搅拌均匀；均匀液态样品直接混合；胶基糖果应用剪刀将胶基糖果剪成细条状；碳酸饮料应在50°C水浴上除去二氧化碳；水果及其制品试样如有果核首先需要去掉果核；对于水果及其制品、蔬菜及其制品、食用菌等非均匀的样品用组织匀浆机按试样与水的质量比为1∶4进行匀浆。提取蔬菜及其制品、蜜饯凉果、豆制品、焙烤食品馅料、复合调味料、植物蛋白饮料、乳酸菌饮料、乳及乳制品等试样准确称取1g（精确至0.0001g）试样（匀浆试样称取5g）于50mL离心管中，加入15mL水，涡旋混匀，用氢氧化钠溶液调pH至7.5，于50℃水浴超声20分钟（超声期间振摇2-3次），冷却至室温后，加硫酸锌溶液和氢氧化钠溶液各1.0mL，混匀，转移至25mL容量瓶，加水稀释至刻度，摇匀。置于离心管中，于50℃水浴超声10分钟（超声期间振摇1-2次）后，以8000r/min心5分钟，取上清液过0.22μm水系滤膜，待液相色谱分析。糕点、面包、饼干、肉及其制品、水产及其制品、奶油、油炸食品、膨化食品、坚果与籽类、巧克力及其制品、黄油等试样准确称取1g（精确至0.0001g）试样（匀浆试样称取5g）于50mL离心管中，加入15mL水，涡旋混匀，用氢氧化钠溶液调pH至7.5，于50℃水浴超声20分钟（超声期间振摇2-3次），冷却至室温后，加硫酸锌溶液和氢氧化钠溶液各1.0mL，混匀，转移至25mL容量瓶，加水稀释至刻度，摇匀。置于离心管中，于50℃水浴超声10分钟（超声期间振摇1-2次）后，加入10mL正己烷，振摇2分钟，以4000r/min离心5分钟，弃去正己烷相。再以8000r/min离心5分钟，取上清液过0.22μm水系滤膜，待液相色谱分析。注:若正己烷提取一遍后，仍有明显油脂，应重复加入正己烷去脂，直至大部分脂肪去除。果冻、糖果、蜂蜜等试样准确称取1g（精确至0.0001g）试样（匀浆试样称取5g）于50mL离心管中，加入15mL水，涡旋混匀，用氢氧化钠溶液调pH至7.5，于70℃水浴加热溶解试样,于50℃水浴超声20分钟（声期间振摇2-3次），冷却至室温后，加硫酸锌溶液和氢氧化钠溶液各1.0mL，混匀，转移至25mL容量瓶，加水稀释至刻度，摇匀。置于离心管中，于50℃水浴超声10分钟（1-2次）后，以8000r/min离心5分钟，取上清液过0.22μm水系滤膜，待液相色谱分析。碳酸饮料、果酒、葡萄酒等试样准确称取1g（精确至0.0001g）试样（匀浆试样称取5g）于50mL离心管中，加入15mL水，涡旋混匀，用氢氧化钠溶液调pH至7.5，于50℃水浴超声20分钟（超声期间振摇2-3次），冷却至室温后转移至25mL容量瓶，加水稀释至刻度，摇匀。置于离心管中，于50℃水浴超声10分钟（超声期间振摇1-2次）后，以8000r/min离心5分钟，取上清液过0.22μm水系滤膜，待液相色谱分析。仪器参考条件色谱柱：C18柱，5μm，250mm×4.6mm(内径)或相当者。流动相：甲醇+0.02mol/L乙酸铵(10+90,体积比)。波长：苯甲酸、山梨酸、糖精钠为230nm；脱氢乙酸为293nm。流速：1.0mL/min。6.3.5柱温：30℃。6.3.6进样量：10μL。定性分析依据保留时间一致性进行定性识别，根据苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸标准品的保留时间（参见附录A.1）,确定试样中苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸的色谱峰位置。必要时应采用其他方法进一步定性确证，例如用苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸的标准品光谱图（参见附录A.2）来进行对比。标准曲线的制作将苯甲酸、山梨酸、糖精钠(以糖精计)和脱氢乙酸混合标准系列工作溶液(4.4.5)注入液相色谱仪中，测定相应的峰面积，分别以标准工作液的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。测定将测定溶液注入液相色谱仪中,测得相应峰面积,根据标准曲线分别得到测定溶液中的苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸浓度。结果计算试样中苯甲酸、山梨酸、糖精钠(以糖精计)和脱氢乙酸的含量按下式计算：XCVk式中:

M1000X——试样中待测组分的含量，单位为克每千克(g/kg)；C——由标准曲线得出的试样液中待测物的质量浓度,单位为毫克每升(mg/L)；V——试样定容体积,单位为毫升(mL)；M——试样质量,单位为克(g)；k——稀释倍数；1000——由mg/kg转换为g/kg的换算因子。计算结果保留三位有效数字。精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。其他苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸的检出限分别为0.001g/kg、0.002g/kg、0.002g/kg、0.005g/kg，定量限分别为0.003g/kg、0.006g/kg、0.006g/kg、0.015g/kg。附录A苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸的液相色谱图及光谱图