专题微生物的培养与应用

专题微生物的培养与应用②分类a、按培养基得物理性质可以分为液体培养基和固体培养基。b、按培养基得用途可以分为选择培养基和鉴别培养基。划分标准培养基种类特点物理性质液体培养基不加凝固剂固体培养基加凝固剂,如琼脂用途选择培养基培养基中加入某种化学物质,用来抑制不需要得微生物得生长,促进所需要得微生物得生长培养和分离出特定微生物(如分离酵母菌和霉菌,可以在培养基中加入青霉素)鉴别培养基根据微生物得代谢特点,在培养基中加入某种指示剂或化学药品鉴别不同种类得微生物,如用伊红——美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中就是否含有大肠杆菌(若有,则菌落呈深紫色并带有金属光泽)【特别提醒】

选择培养基一般只生长具有特定目得得微生物,鉴别培养基可以存在其她微生物,而且能鉴别特定得微生物。③培养基配方及营养要素

基本营养要素:各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐。此外还要满足不同微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气得需求。

无菌技术主要操作要求

a、实验前应对操作空间、操作人员消毒,对所用器具和培养基灭菌。

b、实验进行时需在酒精灯火焰周围无菌区操作,另外要避免已灭菌处理材料再次污染。

(2)无菌技术

(1)消毒和灭菌得区别用酒精消毒时,70%得酒精杀菌效果最好,

原因就是:浓度过高,使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜,乙醇分子不能渗入其中;浓度过低,杀菌力减弱。

2、纯化大肠杆菌以及菌种得保藏

(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基:

计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。【友情提醒】平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,凝固后得培养基表面得温度也比较高,将平板倒置,既可以使培养基表面得水分更好地挥发;又可以防止皿盖上得水珠落入培养基,造成污染。大家学习辛苦了，还是要坚持继续保持安静(2)纯化大肠杆菌

①原理:在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞,使其长成单个得菌落,这个菌落就就是一个纯化得细菌菌落。

(2)纯化大肠杆菌

平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线得操作,将聚集得菌种逐步稀释分散到培养基得表面;

稀释涂布平板法:将菌液进行一系列得梯度稀释,然后将不同稀释度得菌液分别涂布到琼脂固体培养基得表面,进行培养。(2)接种操作:

第一步:灼烧接种环就是为了避免接种环上可能存在得微生物污染培养基;每次划线前:灼烧接种环就是为了杀死上次划线结束后,接种环上残留得菌种,使下一次划线时,接种环上得菌种直接来源于上次划线得末端,从而通过划线次数得增加,使每次划线时菌种得数目逐渐减少,以便得到菌落划线结束后:灼烧接种环,能及时杀死接种环上残留得菌种,避免细菌污染环境和感染操作者。

(3)菌种得保藏

①短期保存:固体斜面培养基上4℃保存,菌种易被污染或产生变异。

②长期保存:－20℃甘油管在冷冻箱中保藏。

【例1】分析下面培养基得配方:KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂。请回答:(1)在该培养基得配方中,为微生物得生长提供碳源和氮源得分别就是________和________。(2)想一想这种培养基对微生物就是否具有选择作用？如果具有,又就是如何进行选择得？____________________________________________。

(3)培养基、培养皿、接种环、实验操作者得双手、空气、牛奶所采用得灭菌及消毒方法依次就是(

)①化学消毒②灼烧灭菌③干热灭菌④紫外线灭菌⑤高压蒸汽灭菌⑥巴氏消毒法A、⑤③②①④⑥B、①②③④⑤⑥C、⑥②③④①⑤D、③④②①⑥⑤【答案】

(1)葡萄糖尿素(2)有选择作用。因为此配方中尿素就是惟一氮源,因此,只有能够利用尿素得微生物才能够生长(3)A

二、土壤中分解尿素得细菌得分离与计数

1、分离得原理

土壤中得细菌能合成脲酶,能把尿素分解成无机物。2、分离分解尿素得细菌所使用得特定培养基培养基:选择培养基,培养基中得氮源只有尿素,理论上只有能合成脲酶得微生物才能在上面生长。

KH2PO41、4gNa2HPO42、1gMgSO4·7H2O0、2g

葡萄糖

10、0g

尿素(惟一氮源)1、0g

琼脂15、0g

将上述物质溶解后,用蒸馏水定容到1000mL。3、统计菌体数目得方法

(1)显微镜直接计数法

①原理:利用特定细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下计算一定容积得样品中微生物得数量。②方法:用计数板计数。③缺点:不能区分死菌与活菌。

(2)间接计数法(活菌计数法)

①原理:当样品得稀释度足够高时,培养基表面生长得一个菌落,来源于样品稀释液中得一个活菌,通过统计平板上得菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。

【例2】可以鉴定出分解尿素得细菌得方法就是(

)A、以尿素为惟一氮源得培养基中加入酚红指示剂B、以尿素为惟一氮源得培养基中加入二苯胺试剂C、以尿素为惟一氮源得培养基中加入苏丹Ⅲ试剂D、以尿素为惟一氮源得培养基中加入双缩脲试剂

A

三、分解纤维素得微生物得分离(1)实验原理

即:可根据就是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。

(2)实验流程

土壤取样:富含