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文档简介

备案号：DB11/T829—2011白菜品种纯度及真实性分子检测方法北京市质量技术监督局发布 II1范围 12规范性引用文件 13术语与定义 1 25仪器设备及耗材 26试剂和溶液配制 27引物选用原则及筛选方法 38操作步骤 49检测结果 6附录A(规范性附录)所用溶液的配置方法 8 附录C(资料性附录)白菜真实性鉴定常用的ISSR引物名称及序列 附录E(规范性附录)6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳方法 附录F(规范性附录)5%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳方法 1GB/T3543.4农作物种子检验规程发芽试验25.1.3微波炉(额定功率800W)。5.1.8冰箱(最低温度-20℃)。36.1.3盐酸(HCI)。6.1.16DNA标准分子量标记(Marker)。6.1.24亲水硅烷(bind-silane)。6.1.28二甲苯青FF。6.1.34溴化乙锭(EtBr)。45表1SSR-PCR反应体系(续)总体积液，加等体积超纯水。1个循环10个循环，退火温度每1循环下降1℃扩增最终延伸4℃,无限长1个循环注：使用不同的PCR扩增仪，应对仪器进行调8.2真实性鉴定8.2.1样品DNA的提取子和标准样品中各随机数取一定数量种子(保证10株幼苗)作为试样，进行幼苗培养。8.2.2ISSR-PCR扩增6表3ISSR-PCR反应体系总体积1个循环10个循环，退火温度每1循环下降1℃扩增35个循环最终延伸1个循环4℃,无限长1个循环注：使用不同的PCR仪，应对仪器进行调整。鉴定SSR电泳谱带带型的一致性，计数供检样品种子粒数(株数)和非本品种种子粒数(株数),并按下列公式计算电泳测定值(品种纯度):89F0.125g,混匀。A.4.2染色液A.4.3显影液ISSR引物序列(5’—3)ISSR引物序列(5’—3')D.2.6每管加入70%乙醇300μL,12000r/min离心1min,清洗DNA,清洗

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