数字PCR无创产前筛查技术应用于胎儿染色体病筛查初步实施的专家共识

样本中21号染色体的整倍性。Fan等[10]应用微流控dPCR定量了21号染色体上淀粉为10%时也能够准确地辨别出21三体胎儿。Tong等[11]利用母胎甲基化表达差异结蛋白基因表达量作为内参，准确检测出5例21三体。ElKhattabi等[12]设计了用dPCR检测孕妇外周血cffDNA含量来鉴别胎儿是否为染色体非整倍体的方法，并检测了213例21三体。Lee等[13]利用已知的阴性与阳性样本来确定dPCR检测胎儿非整倍体的阈值，并对877例孕妇的血浆样本进行了dPCR检测。通过与介入性产前诊断的结果进行比对，证实dPCR检测的准确率高达99.66%.Tan等[14]设计了通用的锁定核酸探针鉴定胎儿非整倍体(21三体和18三体)的dPCR技术，利用60例临床样本评估了方法的准确性和临床适用性，检测结果与NIPT的一致率为100%。Lašáková等[15]采用多重dPCR和锁定核酸探针检测了21号和18号染色体非整倍体，通过分析26例整倍体妊娠孕妇和16例21三体妊娠孕妇的血浆cfDNA,以确定样本风险的切割值。对30例21三体风险为1/801~1/4的孕妇的血浆样本进行了检测，结果与侵入性诊断的结果完全一致(敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值均为100%)。Dai等[16]开发了通过单管反应同步Testing,dPCR-NIPT)技术，对样品处理、cfDNA浓度富集、cffDNA占比富集、dPCR扩增试剂和设备、结果判读原则以及技术原理进行了系统性阐述，利用283例临床样本证实了该方法的敏感性(100%)和特异性(95.12%)均优于血清学筛查，同时成本远低于NIPT.目前我国的医疗机构提供免费的血清学筛查，而昂贵的NIPT尚未完全纳入公共保障体系，其费用的差别导致多数孕妇选择血清学筛查.2015年的一份调查显示，57.8%的孕妇更倾向于选择血清学筛查而非NIPT[17]。从检测性能和经济效益的角度看，dPCRGNIPT技术的检测成本与血清学筛查相近，而阳性检出率与NIPT相似，有望作为产前筛查的新工具.联合NIPT筛查，将提供更好的胎儿染色体疾病筛查策略，值得在临床推广(图1)。6编号与采集孕妇外周血分离血浆质控提取血浆游离DNA富集血浆游离DNA质控质控质控液滴生成质控质控质控质控②为了更合理、规范地将dPCR技术应用于产前筛查，中华医学会医学遗传学会细胞与基因组学组专家共识讨论组通过查阅国内外相关指南、共识和最新研究进展，收集意见形成初稿，再经过反复讨论和修改达成了本共识。对于临床咨询意见不一致的问题，通过德尔菲(Delphi)法进行投票达成。形成的推荐意见至少获得50%的赞成比例，且持反对意见者的比例低于20%,至少获得70%的赞同比例为强推荐意见。本共识内容主要涉及开展dPCR无创产前筛查技术应用胎儿染色体病筛查的基本要求、适用范围、检测前服务流程、检测流程、报告解读和遗传咨询以及技术的局限性等。1基本要求1.1机构要求医疗机构应具备临床基因扩增检验实验室的资质以开展dPCR-NIPT检测项目，并且严格遵守《医疗机构临床实验室管理办法》《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》等相关规定。1.2人员要求从事dPCR-NIPT检测的实验室人员应经过省级及以上卫生行政部门组织的临床基因扩增检验技术培训，并获得培训合格证，咨询人员应为具有遗传学背景的临床医师。1.3设备及试剂要求(1)医疗机构应具备开展dPCR-NIPT检测的dPCR系统，建议配备NIPT检测和染色体核2适用范围2.1目标疾病2.1.1基础版和13三体，其在活产儿中的发病率分别为1/800~1/600、1/8000~1/3500和1/10000。21三2.1.2升级版纳综合征(Turnersyndrome,45,X)和22q11.2缺失综合征(22q11.2deletionsyndrome,22q11.2DS)等。45,X是唯一可以存活的染色体单体综合征，发病率大约为1/4000~1/2500,患者临床表现为身材矮小、性腺发育不良、智力障碍以及特殊5样本检测与质量控制5.1血浆分离及质量控制采用两步离心法分离血浆.在转移血浆的过程中应避免吸到底层残留细胞.若不慎吸到5.2核酸提取与质量控制实验室采用商品化或自配的核酸提取试剂盒提取4mL血浆中游离DNA,通过手工、半自动仪器、全自动仪器提取。提取后用30~40μL洗脱液洗脱，经荧光光度计测定核酸浓度，浓度范围控制在0.5~1.5ng/μL,低于0.5ng/μL的样本可以浓缩或重新采样，高于5.3液滴形成及质量控制液滴的粒径应符合dPCR仪器要求，变异系数<5%,液滴生成后经阅读检测，有效液滴率应>85.4PCR扩增及质量控制5.5结果判读和质量控制率应≥40%.若<40%,则建议对核酸样本进行浓缩或重新采血进行检测；(2)不同的染5~1.65之间时，可判定21三体、18三体、13三体、45,X和22q11.2DS为阴性；当Z值<-1.65或>1.65时，可判定21三体、18三体、13三体、45,产前诊断机构应当负责高风险病例的后续咨询及产前诊断，临床咨询率应达到100%,产性，如胎儿具有21号、18号、13号染色体部分单体、部分三体、部分四体型综合征和同NIPT方法类似，用dPCR-NIPT筛查21三体、18三体和13三体也具有下列局限性妇，所得出的21三体、18三体或13三体低风险结果表明胎儿发生这些疾病的可能性很(2)据文献[23-24]报道，基于cffDNA的筛查结果可能受到孕妇和胎儿本身因素的【推荐意见3】参考血清学筛查和NIPT,可采用dPCRGNIPT技术同步筛查21三体、18三体和13三体.此外，鉴于45,X和22q11.2DS的发病率和负担不亚于18三体和13三体，也可使用dPCR-NIPT技术对21三体、45,X和22q11.2DS组合进行同[2]AkutsuSN,FujitaK,TomiokanologyinresearchonchromosomeaneuploidydisorDOI:10.3390/cells9010239.[J].现代疾病预防控制，2023,34(9):641-645.DOI:10.13515/ki.hnjpm.1006-841LiJJ,NalisaDL,SunZL.Researchprogressonoffetuschromosomeaneuploidy[J].ModernDisControlPrev,2023,34(9):641-645.DOI:10.13515/ki.hnjpm.1006-8414.2023.09.001.前诊断杂志(电子版),2019,11(2):4-8.DOI:10.13470/ki.cTangXH,ZhuBS.ShouldNIPTbeu2019,11(2):4-8.DOI:10.13470/ki.cjpd.2019.02.002.ZhouXY,ZhouY,GuoW.DigitalPCRCongenitAnom(Kyoto),2022,62(5):188-197.DOI:10.1111/cga.12481.renataltesting[J].BriefFunctGenomics,2022,21(5):376-386.DOI:10.1093/bfgp/elac024.emoleculardiagnostictool[J].ClinChem,2015,61(1):79-88.DOI:10.1373/clincoffetalchromosomalaneuploidy[J]6-13121.DOI:10.1073/pnas.070576esrapidprenataldiagnosis00(5):541-543.DOI:10.1016/j.ajog.21byanepigenetic-geneticchromosome-dosageapproach[J].ClinChem,20(1):90-98.DOI:10.1373/clinche[12]ElKhattabifofconceptstudy[J].PLoSOne,2016,11(5):e0155009.DOI:10.1371/journal.pone.on-invasiveprenatalscreeningoftrisomy21[J].ClinChimActa,2018,476:75-80.DOI:10.1016/j.cca.2017.11.015.non-invasiveprenataltestingoffetalaneuploidies[J].Analyst,2019,144(7):2239-2247.DOI:10.1039/c8a(1):22948.DOI:10.1038/s41598-023-50330-x.[16]DaiP,YangYF,ZhaoGY,etamies21,18and13i (1):269.DOI:10.1186/s12967-[17]KouKO,PoonCF,TseWC,etal.KnowledgeandfuturepreewomeninamajorpublichospitalinHongKongafterundergoingnon-invarenataltestingforpositiveaneuploidys[18]ShankarKikkeriN,NeIsland(FL):StatPearlsPublishing,2024.https://2deletionsyndrome[J].Heart[20]/fys/s3581/201611/0e6fe5bac1664[21]DunganJS,KlugmanS,DarilekS,eomics(ACMG)[J].GenetMed,2023,25(2):100336.DOI:10.1016/j.g