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DB41DB41/T1516—2017犬瘟热病毒、犬细小病毒二重TaqManMGB实时荧光PCR检测方法2017-12-06发布2018-03-06实施河南省质量技术监督局发布I疫病预防控制中心，鹤壁市畜产品质量监测检验中心，信阳市动物疫病预防控制中心,平顶山市动物疫1犬瘟热病毒、犬细小病毒二重TaqManMGB实时荧光PCR检测方法本标准规定了犬瘟热病毒（CDV）、犬细小病毒（CPV）二重TaqManMGB实时荧光PCR（FQ），），），），）（），2.1.4消化液Ⅰ,TE缓冲液（见附录A以上试剂常温保存；消化液Ⅱ（见附录A阳性对照、），），实时荧光定量PCR仪，高速冷冻离心机（12000×g以上生物安全柜，恒温水浴锅，2℃~8℃），2采集的样品密封后，采用保温壶或保温桶加冰密封，尽快运送到实验室。样品在2℃~8℃条件下）；）；4.1.44℃条件下12000r/min3上清液，将无菌离心管倒置于吸水纸上，吸干液体，不同无菌离心管应在吸4.3.1反转录反应混合液组成：M-MLV5×Reactionbuffer(含Mg2+)，4µL；），），4在质量控制标准成立的前提下，样品Ct值≤29.0，且出现两条特定的扩增曲线，判定为CDV、CPV5试剂的配制在0.01mol/LPBS液中添加青霉素(2000IU/mL)，链霉素(2mA.60.01mol/L（pH7.2）的磷酸盐缓冲液（PB）：A.6.2B液（0.2mol/L磷酸氢二钠水溶液）：Na2HPO4•12H2O71.6g，用适量蒸馏A.6.30.01mol/LPBS的配制：A液14mL，B液36mL，加NaCl8.5g，用蒸馏水定容至1000mL；1267犬温热病毒、犬细小病毒二重TaqManMGB实时荧光PCR检测5'-CCGACTCCAGACAAT5'-ATGCCATTTACTCCA5'-FAM-CTCTGAGCAACA5'-VIC-AGATC

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