生物课后训练：第一章第一节微生物的分离和培养第二课时

学必求其心得，业必贵于专精学必求其心得，业必贵于专精学必求其心得，业必贵于专精无菌操作和接种技术及微生物的分离、培养与数量测定练习1。下列关于土壤取样的叙述错误的是()。A．土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤B．先铲去表层土3cm左右，再取样C．取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌D．应在火焰旁称取土壤2．通过选择培养基可从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入10%的酚可以抑制细菌和霉菌。利用上述方法能从混杂的微生物群体中分别分离出(）。①大肠杆菌②霉菌③放线菌④固氮细菌A．④②③B．①②③C．①③④D．③④3．某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234,那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为1mL）(）.A．2。34×108B．2.34×1094．在测定土壤中某微生物数量的实验中,从10－6g/mL的土壤稀释液中分别吸取0。1mL涂布三个培养基，经培养后三个培养基形成的菌落分别是92、82、90，则10gA．8。8×106B．8.8×107C．8。8×1085．分离纤维素分解菌的实验过程中操作有误的是（)。A．经选择培养后将培养液直接涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上B．富集培养这一步可省略，但培养纤维素分解菌少C．经稀释培养后，用刚果红染色D．对照组可用同样量的培养液涂布到不含纤维素的培养基上6．下列需要在酒精灯火焰旁操作的有()。①土壤取样②称取土壤③稀释土壤溶液④涂布平板⑤微生物的培养A．①②③④⑤B．②③④⑤C．③④⑤D．②③④7．在土壤微生物的分离和计数实验中，分离能分解尿素的微生物所采用的方法是（).A．涂抹平板法B．混合平板法C．竞争分离法D．平板划线法8．下列操作属于灭菌的是(）.A．用酒精擦拭实验人员的双手B．用氯气处理水源C．将接种环在酒精灯火焰上灼烧至红D．杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物9．据国外媒体报道，“我们虽然是人，但叫细菌可能更恰当一些"，这句话听起来就像科幻故事里的荒诞说法，但它是事实。人体内生活着许多种细菌，比如最出名的肠道细菌—-大肠杆菌,是一种破坏性最大的细菌,不过只有当它发生特殊变异时，才会对人体有害。某同学欲分离土壤中的大肠杆菌，并进行计数和鉴定。请回答下列问题。（1)在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑____、pH和______等条件。(2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行______（消毒、灭菌）;操作者的双手可用酒精______（消毒、灭菌）.（3)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外,还应保证待测样品稀释的________。(4)通常，对获得的纯菌种还可以依据________、______________等对细菌进行初步的鉴定(或分类）。（5)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染.对于固体培养基应采用的检测方法是：_______________________________________________________________________________________________________________________________________________。（6）若用大肠杆菌进行实验,使用过的培养基及其培养物必须经过______处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。10．某同学欲通过实验从土壤中分离自生固氮菌，下列是其方案及操作：培养基成分NaNO32gK2HPO41gKCl0.5g蔗糖30gMgSO40.5g琼脂15～20gFeSO40.01g加蒸馏水定容至1000mL(1）实验目的（略）（2）实验材料和用具(略）（3）实验方法和步骤①接种a．接种前，准备好盛有上述配方的培养基，放入培养皿中并灭菌,供实验用。b．取10g土壤，放在无菌研钵中，注入5mL蒸馏水，并用无菌玻璃棒搅拌均匀,备用。c．将接种环放在酒精灯的火焰上灼烧灭菌。将培养皿盖轻轻放在桌面上，手拿培养皿。将接种环放在培养基边缘处冷却。然后,用接种环蘸取少许泥浆，轻轻地点接在培养基的表面上，共点接15～20处.d．接种后，轻轻地盖上培养皿盖，将培养皿放在实验桌上.②培养将接过种的培养皿放入恒温箱内,在28～30℃的恒温下培养3～4d.③观察3~4d后，取出培养皿，仔细观察培养基上的菌落，其中大而扁平、边缘呈现波状或锯齿状并为褐色的菌落为自生固氮菌。④镜检（略)该实验方案和观察结果中有几处明显错误，请指出错误并改正.（至少找出三处)11．（2012·浙江自选）幽门螺杆菌（Hp）感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素.在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验基本步骤如下：请回答：（1)在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂,这是因为Hp含有______①______，它能以尿素作为氮源;若有Hp，则菌落周围会出现______②______色环带。(2）下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是____③____灭菌.A．高压蒸汽B．紫外灯照射C．70％酒精浸泡D．过滤（3）步骤X表示____④____.在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液____⑤____到培养基平面上。菌液稀释的目的是为了获得__⑥__菌落。（4)在培养时，需将培养皿倒置并放在____⑦____中。若不倒置培养,将导致______⑧______.（5）临床上用14C呼气试验检测人体是否感染Hp，其基本原理是Hp能将14C标记的______⑨______分解为NH3和14CO

参考答案1.答案：C解析：取样用的小铁铲和信封在使用前必须灭菌处理，以防止其上的杂菌对实验结果造成影响。2．答案：A解析:缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长,而固氮细菌能生长。在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌,霉菌能生长；在培养基中加入10％的酚可以抑制细菌和霉菌，放线菌能生长。3．答案：A解析：平板上每克样品中菌落数为234×106＝2。34×108个。4．答案：D解析：该题中的关键数据是稀释液浓度为10－6g/mL，稀释液涂布量为0。1mL,10g土壤.每克样品的菌数＝同一稀释度的菌落平均数×稀释倍数（稀释液为1mL)＝［（92＋82＋90）/3]×106×10＝8.8×108,因此10g土壤中含8.8×1095．答案:A解析：经选择培养后，再经稀释,才能将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上；富集培养可省略；经稀释培养后,用刚果红染色；设置对照能证明经富集培养的确得到了欲分离的微生物.6．答案:D解析:除了土壤取样和微生物的培养不便于在火焰旁进行外，其他均要在火焰旁进行，以防止其他微生物污染。7．答案：A解析：平板分离法有多种，在土壤微生物的分离和计数实验中利用的是涂抹平板法。8．答案：C解析：灭菌是指采用强烈的物理或化学方法使物体内外所有的微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施。A、B、D三项只是杀死部分微生物，属于消毒，C项通过高温可杀死全部微生物，属于灭菌.9．答案：解析：(1）大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外,还要考虑温度、酸碱度和渗透压等条件。（2)灭菌是用强烈的物理或化学方法杀死物体内外所有的微生物，所以对培养基和培养皿进行灭菌，消毒是用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物,操作者的双手需要进行清洗和消毒。（3）稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养，应保证样品稀释的比例适合.（4）对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的鉴定.(5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生。（6）因为有的大肠杆菌会释放一种强烈的毒素，并可能导致肠管出现严重症状,因此使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃,以防止培养物的扩散。答案：(1)温度渗透压（2)灭菌消毒(3)比例合适（4）菌落的形状菌落的大小(5）将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生(6)灭菌10．答案：解析：要分离出自生固氮菌，可采用选择培养分离的方法.缺乏氮源的培养基可用来分离圆褐固氮菌。大多数微生物因缺乏氮源不能生长，而圆褐固氮菌可利用空气中N2满足自身对氮源的需求；整个接种过程要防止杂菌的入侵,制备土壤稀泥浆应用无菌水,接种时略微打开培养皿盖;接种后，在顶盖上写明实验内容、接种人的姓名和接种日期。仔细观察培养基上稀泥浆周围出现的培养物——黏液。黏液初为无色透明，以后为乳白色，最后变成褐色。说明分离出了自生固氮菌。答案:Ⅰ。培养基的配方中含有氮源是错误的,应将NaNO3改为不含N的钠盐。Ⅱ.实验步骤接种b中用蒸馏水是错误的，应改为无菌水。Ⅲ.实验步骤接种c中将培养皿盖放在桌面上是错误的，应改为略微打开培养皿盖。Ⅳ.实验步骤接种d中没有写明实验内容、接种人的姓名和接种日期,应在接种步骤d后面加上“并在顶盖上写明实验内容、接种人的姓名和接种日期"。Ⅴ。实验步骤观察中“仔细观察培养基上的菌落，其中大而扁平、边缘呈现波状或锯齿状并为褐色的菌落"是错误的，应改为“仔细观察培养基上稀泥浆周围出现的黏液。黏液初为无色透明，以后为乳白色，最后变为褐色”。11．答案：解析:（1）幽门螺杆菌中的脲酶能催化尿素分解产生氨，氨溶于水变成氢氧化铵，导致培养基变成碱性，使酚红指示剂呈现红色，因此在菌落周围出现红色环带。（2）对尿素溶液进行灭菌应用G6玻璃漏斗过滤的方法灭菌；如果用高压蒸汽灭菌会造成尿素的分解；紫外灯照射不适用于对溶液进行灭菌；用70%酒精浸泡不能达到灭菌的目的，会有一部分芽孢存活。（3）在培养基