DB36Z 003-2022 粮食中黄曲霉毒素 B1、玉米赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检测 量子点微球荧光免疫层析法　　

ICS67.060CCSB22DB36DeterminationofaflatoxinB1,zearalenoneanddeoxynivalenolingrain——Quantumdotmicrospherelateralflowi江西省市场监督管理局发布IDB36/Z003—2022 12规范性引用文件 13术语和定义 14原理 15试剂和材料 16仪器和设备 27试样制备 28测定步骤 29结果表述 3 3DB36/Z003—2022本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由江西省市场监督管理局提出并归口。本文件起草单位：南昌大学、江西省市场监督管理局、江西省检验检测认证总院、江西维邦生物科技有限公司。本文件主要起草人：赖卫华、李越凡、余颐、刘文娟、罗凯、张威、郭平、熊华亮、熊勇华、陈媛、李响敏、彭娟、黄小林、唐丽君、肖小月、吴梦云、唐艳艳、李雯、蒋峰华。1DB36/Z003—2022食中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检测量子点微球荧光免疫层析法本文件规定了粮食中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇的量子点微球荧光免疫层析检测方法。本文件适用于大米、玉米、小麦中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇的快速检测。本方法检测黄曲霉毒素B1的检出限为1μg/kg，定量限为2μg/kg；检测玉米赤霉烯酮的检出限为10μg/kg，定量限为20μg/kg；检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检出限为50μg/kg，定量限为150μg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB5009.22食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定GB5009.111食品安全国家标准食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定GB5009.209食品安全国家标准食品中玉米赤霉烯酮的测定GB/T5491粮食、油料检验扦样、分样法GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理本方法以量子点微球为荧光标记物，基于竞争抑制免疫层析技术原理，通过荧光免疫分析仪进行数据读取和分析，根据已设定的标准曲线计算样品中待测物质的含量，对黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇进行定量检测。5试剂和材料除另有说明外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。5.1乙腈（C2H3N）。5.2氯化钠（NaCl）。5.3氯化钾（KCl）。5.4磷酸氢二钠（Na2HPO4）。2DB36/Z003—20225.5磷酸二氢钾（KH2PO4）。5.6试样提取液（84%乙腈-水溶液）：吸取84mL乙腈（5.1），用水定容至100mL，混匀。5.7试样稀释液：分别称取氯化钠（5.2）8g、氯化钾（5.3）0.2g5.8磷酸氢二钠（5.4）1.44g、磷酸二氢钾（5.5）0.2g于1000mL烧杯中，加水充分搅拌溶解后定容至1000mL。6仪器和设备6.1分析天平：感量为0.01g。6.2微量移液器：量程为20µL～200µL、100µL～1000µL和1mL～10mL。6.3旋涡混合器：转速≥2500r/min。6.4恒温孵育器：设定温度为37℃,误差不超过±1℃。6.5荧光免疫分析仪：激发波长为360nm±5nm，发射波长为610nm±5nm。6.6离心机：转速≥4000r/min。6.7离心管：1.5mL和50mL。6.8高速粉碎机：转速≥30000r/min6.9分样筛：20目。6.10黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇量子点微球免疫层析包装盒：含量子点微球免疫层析试纸条和标准曲线内置卡（ID卡），ID卡内设对应批次标准曲线。7试样制备7.1分样和粉碎将原始样品充分混匀，按照GB/T5491方法中的四分样方法进行分样，用高速粉碎机（6.8）粉碎后过20目分样筛。7.2试样前处理7.2.1称取5g±0.05g粉碎试样于50mL离心管中，加入25mL样品提取液（5.6漩涡震荡混匀2min，4000rpm离心2min，如无离心机可静置2min。7.2.2检测黄曲霉毒素B1：取50µL离心后上清液加入950µL试样稀释液（5.7）混匀后用于检测。7.2.3检测玉米赤霉烯酮：取50µL离心后上清液加入700µL试样稀释液（5.7）混匀后用于检测。7.2.4检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇：取50µL离心后上清液加入700µL试样稀释液（5.7）混匀后用于检测。注：不同厂家量子点微球免疫层析试纸条所用的样品前处理方法可能不同，应按照产品使用说明中规定方法进8测定步骤8.1测试前打开荧光免疫分析仪（6.5），确认包装盒中的ID卡与产品批号是否匹配，插入ID卡，在仪器测试界面点击“读卡/读项目”，界面出现“读取完成”，点击“确认”即可使用。8.2将恒温孵育器（6.4）开机，待温度升至37℃即可使用。8.3从密封包装袋中取出量子点微球免疫层析试纸条，在30min内使用。3DB36/Z003—20228.4将检测卡平放，用微量移液器吸取90μL稀释后的待测液于量子点微球免疫层析试纸条的加样孔（S）中，在恒温孵育器中37℃孵育反应10min。8.5反应时间结束后立即将量子点微球免疫层析试纸条插入荧光免疫分析仪中，点击仪器界面的“测试”，仪器会自动给出定量测试结果，15min内测试，结果有效。注：不同厂家荧光免疫分析仪所用仪器界面设置可能不同，应按照仪器使用说明中规定方法进行。9结果表述样品中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量由荧光免疫分析仪自动计算并显示，单位为微克/千克(μg/kg）。10.1注意事项：使用前请仔细阅读说明书，仪器的具体操作详见仪器操作说明书；检