生物浙科版学案：预习导航实验DNA片段的PCR扩增

学必求其心得，业必贵于专精学必求其心得，业必贵于专精学必求其心得，业必贵于专精预习导航一、PCR技术1．PCR的全称是:____________。2．PCR技术是用于DNA片段复制、扩增的生化技术。3．PCR技术用途:除用于基因扩增外，还用于____________.4．PCR技术的具体应用：在法学、医学、食品和考古学上也是重要的实用工具，如______鉴定、______鉴定、食品质量的确定、______病诊断、肿瘤病和其他疾病的诊断以及考古中人种的确定等。答案:1。聚合酶链反应3．测定DNA序列4．亲子犯罪遗传二、DNA的体内自我复制与PCR技术DNA聚合酶在有________的存在时,利用4种____________,可从____末端向____末端合成新链。PCR技术还需要____________________作为________________，这一段叫______。答案:DNA模板脱氧核苷三磷酸5′3′与DNA模板互补的一段单链DNA聚合酶作用的起点引物三、PCR作用的过程1．1个循环的操作:步骤具体操作双链DNA____将双链DNA加热至____℃，DNA____，DNA之间的______打开，双链分离(也叫做______）续表步骤具体操作与______结合双链分离后，将温度____________℃，这一降温过程叫______。退火后,引物可与2个____________分别结合DNA新链的____________℃下，聚合酶可利用________组装模板的互补链，从引物延伸至____末端2.一般大约需要重复上述3步骤______个循环.3．结果：一个循环形成____个双链DNA,在20个循环后（大约1h)，1个DNA片段可扩增上百万个拷贝,30个循环可产生10亿个拷贝。答案：1。分开95变性氢键解链引物迅速降至40～60退火单链的DNA模板延伸724种dNTP3′2．15~303．2四、实验操作1．设备、用品(略）2．材料：凝胶、DNA标样、PCR试剂盒、TBE缓冲液、0。1%亚甲蓝3.步骤:文字说明：取3个0.5mL微量离心管,分别记做1、2、3号.用取样器按表一加入试剂，关闭上盖并在振荡器上振荡20s，使之混合均匀↓将3个微量离心管放在固定器上，保证每管中的液面在水浴中的水面以下.依表二的时间依次放入3个水浴进行PCR↓将TBE缓冲液加入到电泳槽中,使缓冲液高出凝胶面3~4mm,再将样品加入凝胶板的加样孔中。所加顺序内容依次为：凝胶板中的加样情况说明表加样孔编号（对应右图所示）1234离心管中样品标号SA1A2A3所加样品1号样品20微升DNA标准溶液PCR产物1（72℃1min后得到的）PCR产物2（72℃1min、70℃2min后得到的)对照组产物2号样品2微升蓝色缓冲液1号样品与2号样品必须充分混匀后再加入↓开始进行电泳，若用18V电池的电泳4～6h;若甲直流电泳仪电源，80V可电泳40min↓电泳后将凝胶缓冲液倒出，缓冲液可再利用。将10mL染色剂(亚甲蓝)覆盖在凝胶表面，15~20min后移去（可再利用），再加入5mL70%乙醇,不断摇动1～2min，使其分布均匀，再除去，加入冷水，几分钟后看到蓝色的区带出现，这就是扩增的DNA↓比较、判断胶片结果图表辅助：表一：试剂1号管（12个循环)2号管(14个循环)3号管(对照）PCR混合液2020—蒸馏水—-20引物202020模板DNA101010总体积505