DB41∕T 2595-2024 猪急性腹泻综合征诊断技术

412024-02-01发布I 2 3 3 5 8 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利物疫病预防控制中心、修武县云台山镇综合行政执法郭育培、刘影、宋丹、刘礼杰、赵美雪、张利平、赵胜杰、冉晓龙、曹俊伟、1猪急性腹泻综合征诊断技术4缩略语SADS：猪急性腹泻综合征（SwineacuteDiarrhoeaSynSADS-CoV：猪急性腹泻综合征冠状病毒（SwineacuteDiarrhoeaSyndromeCoronaRT-PCR：反转录-聚合酶链式反应（Reversetranscription-polymerasechainreacFQ-PCR：荧光-聚合酶链式反应（FluorescenceQuantitative-polymerasechainreacEDTA：乙二胺四乙酸（EthylenediaminPBS：磷酸盐缓冲液（PhosphatebufferedsalDEPC：焦碳酸二乙酯（Diethypyrocarbona5.1流行病学率相对较低；成年猪感染后多数只出现轻度腹泻，2发病仔猪出现急性腹泻、呕吐，脱水、体重迅速下降或死亡；成年猪感染出现25.3病理变化5.4结果判定易感动物符合5.1且出现5.2临床症状、5.3病理），6.2.2个人防护用具：防护服、防护镜、6.2.3采样记录用品：采样单、记号笔、防水无菌采集疑似SADS-CoV感染腹泻猪急性期的新鲜粪便（1.0g～2.0g）或小肠中段（1.0cm~0.22µm微孔滤器过滤，分装20℃保存备用。如需长期保存，应置于-80℃冰箱。3置于2℃~8℃冰箱中可保存一周，保存时间超过一周以上应置于-20℃以下冷冻保存。7.2.6冰箱（2℃~8℃、－20℃、－80℃等不同温度）。Vero细胞系。48.2.5单道微量移液器（0.1µL～0.25µL；0.5µL～采用核酸提取试剂盒或全自动核酸提取仪提取各类样本中的病毒核酸。如在2h内检测可将提取的M-MLV5×Reactionbuffer(含Mg2+)44M-MLV（200U/µL）152ExTaqDNA聚合酶(5U/µL)分子量标准加到凝胶孔中。5V/cm恒压下电泳369.2仪器设备5’-GCATTCGCCAGCGTTTTT-3’；TaqMan探针S9.4检测程序2ExTaqDNA聚合酶(5U/µL)9.5试验结果成立条件79.6结果判定9.6.3当35＜Ct值＜38且出现特异性扩增曲线，判为疑似。对疑似样品，模任一项判为核酸阳性的，可判定为猪急性腹泻综合征确诊病8氯化钠（NaCl）85.00g氯化钠（NaCl）磷酸氢二钠（Na2HPO4•12H2O）30.0gA.3细胞培养液DMEM培养液A.4细胞维持液DMEM培养液A.51×TAE核酸电泳缓冲液Tris碱，24.2g；冰乙酸，5.71mL；0.5mol/LEDTA(pH8.0)，10mL；加蒸馏水至1009Vero细胞培养物。SADS-CoVRT-PCR产物电泳图及荧光PCR扩增曲线图B.1SADS-CoV荧光PCR