2025年苏科版选择性必修3生物上册阶段测试试卷含答案

…………○…………内…………○…………装…………○…………内…………○…………装…………○…………订…………○…………线…………○…………※※请※※不※※要※※在※※装※※订※※线※※内※※答※※题※※…………○…………外…………○…………装…………○…………订…………○…………线…………○…………第=page22页，总=sectionpages22页第=page11页，总=sectionpages11页2025年苏科版选择性必修3生物上册阶段测试试卷含答案考试试卷考试范围：全部知识点；考试时间：120分钟学校：______姓名：______班级：______考号：______总分栏题号一二三四五六总分得分评卷人得分一、选择题(共7题，共14分)1、下图为单克隆抗体的制备流程示意图。下列叙述正确的是（）

A.甲是从已免疫的小鼠脾脏细胞中获得的致敏T淋巴细胞B.①表示将骨髓瘤细胞去核后进行细胞融合C.乙为融合细胞，同时具有细胞甲和骨髓瘤细胞的特性D.②表示筛选能产生特异性抗体的细胞2、研究人员利用农杆菌侵染水稻叶片；经组培；筛选最终获得了一株水稻突变体。利用不同的限制酶处理突变体的总DNA、电泳；并与野生型的处理结果对比，得到图所示放射性检测结果。（注：T-DNA上没有所用限制酶的酶切位点）对该实验的分析错误的是（）

A.检测结果时使用了放射性标记的T-DNA片段做探针B.该突变体产生的根本原因是由于T-DNA插入到水稻核DNA中C.不同酶切显示的杂交带位置不同，说明T-DNA有不同的插入位置D.若野生型也出现杂交带，则实验样本可能被污染，检测结果不准确3、在筛选纤维素分解菌的培养基中加入刚果红染料；研究者观察到几个有透明圈的菌落。据图分析正确的是（）

A.透明圈内的刚果红染料已被分解B.能产生淀粉酶的微生物菌落周围可形成模糊的透明圈C.菌落②中的菌株降解纤维素能力最强D.图中培养基可用牛肉膏、蛋白胨配制4、下面有关微生物培养、分离等的叙述，错误的是（）A.检验自来水中大肠杆菌数是否超标，可用滤膜法来分离并计数B.检测同种水样中细菌的数量时，设置空白培养基检验培养基制备是否合格C.配制培养基时要注意各种营养成分，必须含有碳源、氮源、无机盐、水及生长因子D.对于经常使用的菌种可采用试管固体斜面临时保存，但该方法保存的菌种易变异5、关于泡菜制作及亚硝酸盐含量的测定，下列说法正确的是（）A.开发泡菜新品种可调节通气发酵和密封发酵的时间比例B.泡菜制作时应将蒜瓣、生姜等辅料放在坛的中间C.测定亚硝酸盐含量的关键在于泡菜的选择和样品处理D.测定亚硝酸盐含量的方法是纸层析法6、分离纤维素分解菌的实验操作有误的是（）A.经选择培养后将样品即可涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上B.选择培养这一步可省略，但得到的纤维素分解菌会较少C.可通过定时测定葡萄糖产量的变化来衡量纤维素分解菌培养液中的纤维素酶的产量D.对照组可用等量的纤维素分解菌培养液涂布到完全培养基上7、下图为酿造糯米甘蔗酒的生产流程，其中使用的酒曲中含有糖化菌和酿酒菌。下列叙述正确的是（）

A.甘蔗汁和糯米能为酒曲中的菌提供碳源和氮源等B.糖化菌分泌的淀粉酶水解淀粉的过程消耗ATPC.恒温发酵过程中应不断搅拌以增加溶解氧D.若拌曲时被醋酸杆菌污染，会将发酵产物中的乙醇转化为乙酸和CO2评卷人得分二、多选题(共9题，共18分)8、用XhoI和SalI两种限制性内切核酸酶分别单独酶切同一种DNA片段；酶切位点及酶切产物的琼脂糖凝胶电泳结果如图。以下叙述错误的是（）

A.XhoI和SalI两种酶识别的核糖核苷酸序列不同B.泳道①中是用SalI处理得到的酶切产物C.泳道②中的酶切产物可用DNA连接酶拼接成一个重组DNA分子D.图中被酶切的DNA片段是单链DNA9、下列关于“DNA粗提取与鉴定”实验的叙述，正确的是（）A.DNA既溶于2mol/LNaCl溶液也溶于蒸馏水B.洗涤剂能瓦解植物细胞壁并增加DNA在NaCl溶液中的溶解度C.调节NaCl溶液浓度或加入冷酒精后过滤，都可以去除部分杂质D.在酸性条件下，DNA与二苯胺会发生反应，最终产生蓝色物质10、常乳是母牛泌乳期一周后直到泌乳停止前一周这个时间段内分泌的乳汁。奶牛自身乳房和乳头中可能含有的细菌，加上挤乳过程中产生的少量污染，常乳中会有一定量的细菌存在。研究小组要检测一份常乳样品中细菌的总量（不考虑菌种），检测流程如下图，每个平板上接种菌液量为0.1mL。下列说法正确的是（）

A.倒平板时将培养皿打开一条细缝，不要完全打开，防止杂菌污染B.上述方法是稀释涂布平板法，培养基要营养全面，适合各种细菌生长C.也可以通过连续划线的方法接种，通过菌落数计算样品中的细菌总数D.若三个平板上的菌落平均数为59，则所每毫升样品中细菌总数为5.9×10711、基因敲除技术针对某个序列已知但功能未知的序列，通过改变生物的遗传基因，令特定的基因功能丧失作用，从而使部分功能被屏蔽，并可进一步对生物体造成影响，进而推测出该基因的生物学功能。研究人员将某实验动物的第5号染色体上的一段DNA敲除，结果发现培育出的实验动物血液甘油三酯极高，具有动脉硬化的倾向，并可以遗传给后代。下列有关叙述错误的是（）A.敲除的DNA片段具有遗传效应B.动脉硬化的产生与遗传物质发生基因重组有关C.控制甘油三酯合成的基因就位于第5号染色体上D.利用DNA片段的敲除技术可以研究相关基因功能12、下图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”的示意图。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因。下列说法正确的是（）

A.若能在细菌B中检测到人的生长激素基因，则说明该基因工程项目获得成功B.将完成导入过程后的细菌涂布在含有氨苄青霉素的培养基上，能生长的就是导入了重组质粒的细菌C.将人的生长激素基因与质粒A结合的过程共形成了4个磷酸二酯键D.将重组质粒导入细菌B之前，可以用Ca2+处理细菌B13、以纯化鉴定后的重组大肠杆菌RecQ解旋酶免疫小鼠（2n=40），融合免疫小鼠的脾细胞及骨髓瘤细胞（2n=62-68），筛选杂交瘤细胞，制备抗RecQ解旋酶单克隆抗体（mAb），相关检测结果如图A、B所示。有关说法正确的是（）

图A杂交瘤细胞染色体数目图B不同浓度mAb对RecQ蛋白结合DNA活性的影响A.重组大肠杆菌RecQ解旋酶可刺激相应B淋巴细胞增殖分化B.单克隆抗体的制备过程中需要进行2次筛选和2次抗原检测C.杂交瘤细胞在融合的过程中可能会发生染色体数目的丢失D.该mAb能特异性与RecQ解旋酶结合，在稀释度为1/800时可显著抑制RecQ解旋酶与DNA的结合14、相较于其他模型动物（如小鼠和大鼠），兔的免疫系统可对更广泛的抗原产生应答且其较大的脾脏可产生更多抗体。除此之外，兔的单克隆抗体具有天然多样性、高亲和力和特异性、全新的表位识别、易于人源化（已成为将外源抗体转化为有效安全的治疗药物的重要方式）等优势。下列相关叙述错误的是（）A.利用人源化兔单克隆抗体进行治疗时，机体将会发生细胞免疫B.给兔子注射抗原后，兔子体内的抗体只有很少一部分是单克隆抗体C.利用选择培养基筛选的杂交瘤细胞具有能迅速大量增殖的能力D.体外培养特异性杂交瘤细胞时，需要给予95％的氧气和5％的CO215、桑葚与草莓营养价值极高，口味调和。草莓中含量较高的维生素C有助于延缓桑葚天然色素的氧化；桑葚独有的花青素、白藜芦醇等物质能显著增强复合果酒的功效。下图为桑葚草莓复合果酒的工厂化制备流程，下列说法正确的是（）

桑葚和草莓原料的挑选和清洗→混合搅拌→添加偏重亚硫酸钾→榨汁→调糖和调酸→灭菌→接种发酵A.在生产复合果酒的过程中，要防止桑葚天然色素被氧化B.果酒发酵初期通入氧气能促进酵母菌繁殖，有利于加快果酒发酵C.复合果酒的制备过程中对发酵设备要进行灭菌处理D.变酸的果酒表面会形成一层菌膜，这层菌膜是由乳酸菌形成的16、蛋白质工程就是通过对蛋白质化学、蛋白质晶体学和蛋白质动力学的研究，获得有关蛋白质理化特性和分子特性的信息，在此基础上对编码蛋白质的基因进行有目的的设计和改造，通过基因工程技术获得可以表达蛋白质的转基因生物，中华鲟是一种濒危野生动物。研究者试图通过蛋白质工程改造中华鲟体内的某些蛋白质，使其更加适应现在的水域环境。下列有关说法错误的是（）A.蛋白质工程可定向改变蛋白质分子的结构B.改造蛋白质可通过改变基因结构实现C.改造后的中华鲟和现有中华鲟不再是同一物种D.改造后的中华鲟的后代不具有改造的蛋白质评卷人得分三、填空题(共7题，共14分)17、20世纪70年代以后；以基因工程为代表的一大批生物技术成果，进入人类的生产和生活，特别是在医药和农业生产上发挥了极大的作用，但是与其他高新技术一样，生物技术也同样具有双刃剑效应。如同其他高新技术一样，转基因成果和转基因技术也需要你的理性看待。在转基因生物安全方面；

（1）你认为转基因生物有哪些优点，①____________②___________③__________。

（2）你认为转基因生物有哪些缺点，①____________②___________③__________。

（3）你对于转基因生物的态度是__________。18、本课题对能分解尿素的细菌进行了初步的筛选。但是，这只是分离纯化菌种的第一步。对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助生物化学的方法。在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的___________将尿素分解成了_____________。氨会使培养基的________________，pH______________。因此，我们可以通过检测培养基______________来判断该化学反应是否发生。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入_____________，培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将变________________。19、统计的菌落数往往比活菌的实际数目_____________。这是因为______________________。因此，统计结果一般用而不是用活菌数来表示。除了上述的活菌计数法外，______________也是测定微生物数量的常用方法。20、假设PCR反应中，只有一个DNA片段作为模板，请计算在30次循环后，反应物中大约有个这样的_______个DNA片段，一共需要加入______________个引物。21、基因工程取得了突飞猛进的发展。_____、_____等技术的应用不仅使生命科学的研究发生了前所未有的变化，而且在实际应用领域，如____、_____、_____、______等方面也展示出美好的应用前景。抗虫棉中的抗虫基因来自_____，抗虫基因作物的使用，不仅减少了_____，降低了____，而且还减少了_____。22、_______mol/L浓度下，DNA溶解度最大。23、在我国市场上究竟有多少种转基因产品呢？一位同学带着这样的问题，进行了调查并将结果归纳成下图｡

对该同学的调查和归纳结果，有人表示认同，有人提出质疑｡质疑者认为：目前我国市场上根本没有大豆､玉米或甜菜的转基因产品｡我们的观点是什么_____？评卷人得分四、判断题(共1题，共8分)24、我国政府一再重申四不原则：不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人实验。（选择性必修3P108）()A.正确B.错误评卷人得分五、实验题(共4题，共40分)25、如图是从土壤中筛选纤维素分解菌的流程图；回答下列问题：

（1）土壤取样时，一般选择__________________丰富的环境。选择培养的目的是________________________。

（2）若测得稀释一定倍数的0.1mL稀释液中纤维素分解菌的菌落数平均值为51，通过计算得知每毫升样品中有5.1×107个纤维素分解菌，则该稀释液的稀释倍数为_________。

（3）鉴别纤维素分解菌的培养基中应加入CR染料，它可以与纤维素形成_________色复合物。若在鉴别培养基上得到部分有透明圈的菌落（如图），则降解纤维素能力最强的是菌落__________。

26、玉米是重要的粮食作物；其叶片细胞中的P蛋白是一种水通道蛋白，由P基因编码，在植物生长发育过程中对水分的吸收具有重要的调节功能。科研人员成功培育出超量表达P蛋白转基因玉米，所用DNA片段和Ti质粒的酶切位点如图所示，请回答下列问题：

(1)强启动子是一段有特殊结构的DNA片段，能被_______识别并结合，驱动基因的持续转录，如将强启动子插入到玉米叶绿体某基因内部，可获得该基因_______突变株。为使P基因在玉米植株中超量表达，应优先选用_______酶组合，将Ti质粒切开后构建重组表达载体。T-DNA在该实验中的作用是_______。

(2)将农杆菌浸泡过的玉米愈伤组织去菌后进行组织培养，培养基中需加入_______进行筛选，此物质属于氨基糖苷类抗生素，它能抑制蛋白质在叶绿体和线粒体中合成，使植物的光合作用和_______受到干扰；从而引起植物细胞死亡。

(3)愈伤组织是一种相对没有分化的_______团，经液体悬浮培养叮以分散成胚性细胞，在适宜的培养基中，这种单细胞可以发育成_______；再继续发育成转基因玉米株系。

(4)影响玉米愈伤组织能否成功再生出植株的因素有植物激素的配比、愈伤组织继代次数以及_______等。目前，组织培养过程中培养瓶常用透气封口膜封口，目的是_______。27、科学家的发现给人类的生活带来了无限的想象；他们采集了某深海海域的沉积物样品，分离；鉴定得到其中的深海放线菌，以期获得具有前景的抗生素替代品。据此回答下列问题：

(1)研究人员欲筛选出深海放线菌进行研究，取1g沉积物样品接种在液体培养基中摇瓶培养，稀释后取菌液通过_______________法接种到高氏一号（加数滴质量分数为10%的酚）培养基表面以获得单菌落。

(2)通过PCR技术扩增分离得到的放线菌的16SrRNA基因可进行菌株的种属鉴定。PCR技术中起关键作用的酶是_____________。该技术能在放线菌总的DNA中专一性扩增出16SrRNA基因的原因是______________。PCR产物一般可通过_________________鉴定。

(3)科学家还将Oct3/4、Sox2、c-Mc和KIf4基因通过逆转录病毒转入小鼠成纤维细胞中。2~3周后，这些细胞显示出ES细胞的形态、具有活跃的分裂能力，它们就是iPS细胞。在这个实验过程中，逆转录病毒的作用是_______________如何证明iPS细胞的产生不是由于培养基的作用？请写出实验设计思路______________28、四尾栅藻是一种淡水藻类；繁殖快；适应性强，可作为制备生物柴油的重要原料之一。为提高四尾栅藻油脂含量，研究人员将从含油量高的紫苏中获得的二酰甘油酰基转移酶基因（DGAT1）与pBI121质粒构建表达载体，经转化成功获得高产油脂四尾栅藻，主要研究过程如下图，其中DGAT1-F（5'-GCATCTAGAATGGCGATCTTGGACTC-3'）和DGAT1-R（5'-CGGATCCCTACCTTGCACTAGCTTTTC-3'）是以DGAT1基因为依据设计的一对引物，1acZ基因编码产物在X-ga1和IPTG存在下，可以产生蓝色沉淀，使菌落呈现蓝色，否则菌落呈现白色。请回答下列问题。

(1)过程①中需要的酶有____________，过程②应选用的限制酶是____________和____________。

(2)研究中，在保存DGAT1基因时，将克隆载体导入大肠杆菌的优点有____________。

①稳定保存②准确复制③快速表达④方便取用。

(3)过程③经转化的大肠杆菌通过____________（方法）接种到培养基上继续培养。为筛选获得目标菌株，培养基应加入的成分有____________。

(4)为检测表达载体转化四尾栅藻的情况及确定目的基因是否表达，研究人员进行了如下实验，请完成下表。实验步骤简要操作过程初筛培养经转化后的四尾栅藻接种于含①____________的BG11固体培养基并放置于人工气候箱培养，一段时间后观察其生长情况②____________在BG11固体培养基上分别挑取数个单藻落接种至BG11液体培养基中光照摇床培养，编号备用PCR验证收集四尾栅藻藻体，提取基因组DNA，以DGAT1-F和DGAT1-R为引物，进行PCR验证，未转化的四尾栅藻作对照油脂含量测定利用索氏抽提法分别测定③____________的油脂含量结果处理统计并比较PCR验证结果及藻体中油脂的含量评卷人得分六、综合题(共4题，共36分)29、下图表示利用胚胎干细胞（ES细胞）所做的一系列研究；过程Ⅰ是将带有遗传标记的ES细胞注入早期胚胎的囊胚腔，通过组织化学染色，用于研究动物体器官形成的时间；发育过程以及影响的因素。过程Ⅱ是将Gfp基因（绿色荧光蛋白基因）导入胚胎干细胞制备绿色荧光小鼠的过程。回答下列相关问题：

（1）过程Ⅰ的研究利用了胚胎干细胞具有_____________________的特点。ES细胞在体外培养时培养液中添加___________能维持不分化的状态。

（2）Gfp基因和质粒中都存在SalⅠ；HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶切割位点。过程①中应选用_____________________两种限制酶对质粒和含Gfp基因的DNA进行切割；以保证重组DNA序列的唯一性。

（3）②过程常用的方法是______________________；③过程为___________。

（4）可以使用_____________________方法在蛋白质水平上鉴定小鼠是否存在绿色荧光蛋白。30、杜泊羊以其生长速度快；肉质好等优点；被称为“钻石级”肉用绵羊。科研工作者通过胚胎工程快速繁殖杜泊羊的流程如图所示，请据图回答问题：

(1)获取得到的卵（母）细胞，需要体外培养至____________时期。采集的精子需要经过________，才具备受精能力。判断卵细胞是否受精的重要标志是____________。

(2)在胚胎移植前要对提供胚胎的杜泊羊进行______________处理，接受胚胎的当地普通绵羊进行________处理。代孕母羊对置入子宫的早期胚胎基本上不发生______________；这就为早期胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。

(3)卵裂期进行的分裂方式为___________，胚胎总体积的变化情况为___________。采用胚胎分割技术能得到“同卵多胞胎”，对囊胚期的胚胎进行分割时，要特别注意将____________均等分割；否则会影响分割后的胚胎恢复和进一步发育。

(4)在繁育过程中，出现了一只体型特别大的良种奶牛，若要快速地大量繁殖出同样大体型的个体，可采用的技术是___________。31、科学家将CRISPR/Cas9基因编辑系统导入农杆菌Ti质粒并进行改造；通过同源重组实现目的基因的精确插入，利用该方法已培育出了耐寒的玉米新品种(转入CXE-20耐寒基因)。下图1表示构建转基因耐寒玉米重组质粒的过程，其中Cas9-gRNA是CRISPR/Cas9基因编辑系统基因，HRA是抗除草剂基因，HR1和HR2是同源重组序列，图2表示重组质粒与受体细胞核DNA重组的过程。请回答问题：

(1)过程①的原料是_______，需要_______催化。

(2)限制酶BamHⅠ、SacⅠ、HindⅢ、EcoRⅠ的识别序列分别是GGATCC、GAGC.AAGCTT、GAATTC，过程①所用引物如下，则过程②使用的限制酶是_______和_______。

5′-CGCGAGCTCATGAGAAAGGGCCCGTGG-3′

5′-CGGAATTCCTATCCCCAGAGAGGTAGCGA-3′

(3)如图表示Cas9-gRNA复合体切割DNA的示意图，其靶序列是5′-CGAAAGCGTATCAGTATGCGTACGT-3′，根据图中靶序列设计的gRNA中相应序列是5′-_______-3′，Cas9-gRNA复合体切割DNA的_______键使其断裂。

(4)用重组质粒转化玉米幼胚后，在培养基中加入_______筛选出导入目的基因幼胚。提取培养后的植株DNA，设计引物进行PCR、电泳，基因长度及结果如下图。设计引物的依据是_______，其中_______号玉米中成功插入了外源基因，研究人员认为这些植株自交后会发生性状分离，其判断依据是_______。

32、2021年，中国科学家在预印本网站bioRxiv发表了一篇研究报告。研究人员选择了Lewis大鼠作为研究对象以降低两只小鼠组合在一起后的免疫排斥反应；通过子宫移植和异种共生手术将一只被阉割的雄性大鼠和一只雌性大鼠连接在一起，使雄性小鼠能够通过血液交换获得一个雌性微环境，成功让得到子宫移植的雄性小鼠孕育胚胎并诞下幼崽。请回答下列问题：

（1）科研人员将选择______时期的胚胎移植到两只共生小鼠的子宫中。

（2）早期胚胎获取可从供体的______中冲取，完成此操作的生理学基础是______。

（3）该项研究中将雄性大鼠和雌性大鼠共生的目的是______。

（4）若通过基因编辑技术切除所得受精卵中的BMALI基因（生物节律核心基因）；可培育出BMALI基因敲除的小鼠。基因编辑工具是经改造的CRISPR/Cas9系统。该系统由向导RNA（sgRNA）和Cas9蛋白组成，由sgRNA引导Cas9蛋白在特定的基因位点进行切割来完成基因的编辑过程，其工作原理如下图所示。请回答：

①图中Cas9-sgRNA复合体通常用______方法注入受体细胞；基因编辑工具中对基因进行剪切的是______。

②sgRNA能与靶DNA分子特异性识别、结合的原理是______。

③若BMALI基因敲除成功，从个体水平鉴定，小鼠表现为______。参考答案一、选择题(共7题，共14分)1、D【分析】【分析】

1；单克隆抗体的制备过程是：对小动物注射抗原；从该动物的脾脏中获取效应B细胞，将效应B细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞，克隆化培养杂交瘤细胞（体内培养和体外培养），最后获取单克隆抗体。

2；题中①表示细胞融合；②表示筛选过程。

【详解】

A；甲是从已免疫的小鼠脾脏中获得的效应B细胞；A错误；

B；①是完整骨髓瘤细胞与免疫的B淋巴细胞融合的过程；B错误；

C；融合细胞不一定同时具有细胞甲和骨髓瘤细胞的特性；也可能是瘤瘤细胞或B细胞，C错误；

D；②是经筛选获得的能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞；D正确。

故选D。2、C【分析】【分析】

将目的基因插入到农杆菌的Ti质粒的T-DNA上；通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入植物细胞，并将其插入到植物细胞中染色体的DNA上，使目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。它是将目的基因导入植物细胞采用最多的方法。

放射性标记的T-DNA片段做探针的目的是检测受体细胞的DNA中有无目的基因。均显示一条杂交带；说明在这一突变体中，T-DNA插入位置是唯一的。

【详解】

A；图示结果突变体中出现放射性；说明使用了放射性标记的T-DNA片段做探针对目的基因进行检测，A正确；

B；该突变体产生的根本原因是T-DNA携带目的基因插入到水稻的DNA中；B正确；

C；不同酶切杂交带位置不同；说明不同酶切后带有T-DNA的片段长度不同（即：不同的酶切位点距离T-DNA的远近不同），C错误；

D；由图所示放射性检测结果可知；野生型无放射性杂交条带，若野生型也出现杂交带，则实验样本可能被污染，检测结果不准确，D正确。

故选C。

【点睛】

本题通过放射性同位素标记方法检测目的基因的方法，考查对基础知识的运用，以及对实验结果的分析和判断能力。3、B【分析】【分析】

分解纤维素的微生物的分离的实验原理：①土壤中存在着大量纤维素分解酶；包括真菌；细菌和放线菌等，它们可以产生纤维素酶．纤维素酶是一种复合酶，可以把纤维素分解为纤维二糖，进一步分解为葡萄糖使微生物加以利用，故在用纤维素作为唯一碳源的培养基中，纤维素分解菌能够很好地生长，其他微生物则不能生长。②在培养基中加入刚果红，可与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，红色复合物不能形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，从而可筛选纤维素分解菌。

【详解】

A；透明圈内的纤维素已被分解；而不是刚果红染料被分解，A错误；

B；能产生淀粉酶的微生物菌落周围可形成模糊的透明圈；B正确；

C；菌落①中的菌株降解纤维素能力最强；C错误；

D；图中培养基应该以纤维素为唯一碳源；因此不可用牛肉膏、蛋白胨配制，D错误。

故选B。4、C【分析】【分析】

培养基的概念及营养构成。

（1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求；配制出的供其生长繁殖的营养基质。

（2）营养构成：各种培养基一般都含有水；碳源、氮源、无机盐；此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求．例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。

【详解】

A；细菌的数目可以用滤膜法来测定；将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养，在该培养基上大肠杆菌的菌落呈黑色，可以根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数目，以此来检验自来水中大肠杆菌数是否超标，A正确；

B；检测同种水样中细菌的数量时；设置空白培养基的目的是检验培养基制备是否合格，B正确；

C；培养基不一定都含有碳源；氮源，如培养自养型微生物的培养基中不需加入碳源，分离自生固氮菌的培养基中，不需加入氮源，C错误；

D；对于经常使用的菌种可采用试管固体斜面临时保存；该方法保存的菌种易被污染或产生变异，不适宜长期保存，D正确。

故选C。

【点睛】5、B【分析】【分析】

泡菜制作：

1；菌种：制作泡菜所用微生物是乳酸菌。

2；实验原理：（1）乳酸菌在无氧条件下；将糖分解为乳酸；（2）利用乳酸菌制作泡菜的过程中会引起亚硝酸盐的含量的变化，温度过高，食盐用量不足10%、腌制时间过短，容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加，一般在腌制10天后，亚硝酸盐的含量开始下降；（3）测定亚硝酸盐含量的原理：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料，与已知浓度的标准显色液目测比较，估算泡菜中亚硝酸盐含量。

【详解】

A；开发新产品时；应该考虑对泡菜材料进行创新拓展，参与泡菜制作的微生物是乳酸菌，属于厌氧型生物，因此泡菜制作过程中不需要通气发酵，A错误；

B；制作泡菜时；需将经过预处理的新鲜蔬菜混合均匀，装入泡菜坛内，装至半坛时，放入蒜瓣、生姜及其他香辛料，故应将蒜瓣、生姜等辅料放在坛的中间，B正确；

C；亚硝酸盐含量测定的实验步骤是：配制溶液→制备标准显色液→制备泡菜样品处理液→比色；类似于pH检测中需要使用比色卡一样，在检测需要与标准显色液对比才知道待测样液中亚硝酸盐的含量；因此，为了使测定亚硝酸盐含量的准确性提高，关键的操作是标准显色液的制备，C错误；

D；测定亚硝酸盐含量的方法是比色法；D错误。

故选B。

【点睛】6、A【分析】【分析】

分离分解纤维素的微生物的实验流程：土壤取样→选择培养（此步是否需要；应根据样品中目的菌株数量的多少来确定）→梯度稀释→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落。

【详解】

A；经选择培养后；再经适度梯度稀释，才能将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上，A错误；

B；选择培养即富集培养可省略；但培养分离的纤维素分解菌可能会少，B正确；

C；纤维素酶的测定方法一般是采用对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量的测定；C正确；

D；实验组和对照组遵循单一变量原则；对照组可用等量的纤维素分解菌培养液涂布到不含纤维素的培养基上，实验组可用等量的纤维素分解菌培养液涂布到纤维素为唯一碳源的培养基上，通过设置对照能证明经“浓缩”培养的确得到了欲分离的微生物，D正确。

故选A。7、A【分析】【分析】

果酒的制作离不开酵母菌；酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。故果酒的制作原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精。

【详解】

A；甘蔗汁和糯米中含有蛋白质（元素组成是C、H、O、N等）和糖（元素组成是C、H、O）等物质；能为酒曲中的菌提供碳源和氮源等，A正确；

B；酶的作用机理是降低化学反应的活化能；糖化菌分泌的淀粉酶水解淀粉的过程不需要消耗ATP，B错误；

C；发酵过程中有酿酒菌；主要是酵母菌，酵母菌需要在无氧条件下进行发酵，故不能搅拌增加溶解氧，C错误；

D；若拌曲时被醋酸杆菌污染；由于缺少糖源，此时醋酸杆菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为乙酸，D错误。

故选A。二、多选题(共9题，共18分)8、A:D【分析】【分析】

1；DNA一般是双螺旋结构；限制酶可以识别特定的脱氧核苷酸序列；并在每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割。

2；图1中SaLl有3个识别位点；能将DNA片段切成4段，Xhol有2个识别位点，能将DNA片段切成3段。

【详解】

A；限制酶识别特定的脱氧核苷酸序列；不同的限制酶能识别不同的脱氧核苷酸序列，A错误；

B；Sall将DNA片段切成4段；Xhol将DNA片段切成3段，根据电泳结果可知泳道①为Sall，泳道②为XhoⅠ，B正确；

C；同种限制酶切割出的DNA片段；具有相同的粘性末端，再用DNA连接酶进行连接，可以构成重组DNA，C正确；

D；限制酶切割双链DNA；酶切后的DNA片段仍然是双链DNA，D错误。

故选AD。9、A:C:D【分析】【分析】

DNA粗提取和鉴定的原理：

1；DNA的溶解性：DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同（DNA在0.14mol/L的氯化钠中溶解度最低）；DNA不溶于酒精溶液；但细胞中的某些蛋白质溶于酒精。

2；DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性不同。

3；DNA的鉴定：在沸水浴的条件下；DNA遇二苯胺会被染成蓝色。

【详解】

A；DNA不溶于酒精溶液；但DNA既溶于2mol/L的NaCl溶液，也溶于蒸馏水，A正确；

B；洗涤剂能瓦解细胞膜；但不能增加DNA在NaCl溶液中的溶解度，B错误；

C；DNA在浓度为0.14mol/LNaCl溶液中的溶解度最低；因此用蒸馏水将NaCl溶液浓度调至0.14mol/L或加入冷酒精后过滤，都可以去除部分杂质，C正确；

D；在酸性条件下；DNA与二苯胺试剂反应，最终产生蓝色物质，因此常用二苯胺试剂鉴定DNA，D正确。

故选ACD。10、A:B:D【分析】【分析】

分析题文描述和题图：图示为采用稀释涂布平板法分离常乳样品中细菌总量的流程图。首先将常乳样品进行一系列梯度稀释，然后取1×105倍稀释的稀释液0.1mL分别涂布到3个平板上进行培养。为了防止杂菌污染；稀释涂布平板的所有操作都应控制无菌条件。

【详解】

A；为了防止杂菌污染；倒平板时应将培养皿打开一条细缝，不要完全打开，A正确；

B；为了检测一份常乳样品中细菌的总量；图示对常乳样品进行了一系列梯度稀释，由此可见，上述方法是稀释涂布平板法，培养基要营养全面，适合各种细菌生长，B正确；

C；通过连续划线的方法接种；不易分离出单个菌落，不能用于微生物的计数，C错误；

D、取1×105倍稀释的稀释液0.1mL分别涂布到3个平板上进行培养，若三个平板上的菌落平均数为59，则所每毫升样品中细菌总数为59÷0.1×105＝5.9×107；D正确。

故选ABD。11、B:C【分析】【分析】

根据题意；将某实验动物的第5号染色体上的一段DNA敲除，结果发现培育出的实验动物血液甘油三酯极高，具有动脉硬化的倾向，并可以遗传给后代，说明该变异是一种可遗传的变异。

【详解】

A；DNA敲除后结果发现培育出的实验动物血液甘油三酯极高；具有动脉硬化的倾向，并可以遗传给后代，说明敲除的DNA片段具有遗传效应，A正确；

B；动脉硬化的产生与遗传物质发生可遗传的变异有关；不能说明是基因重组，B错误；

C；上述信息只能表明敲除的DNA片段与甘油三酯代谢有关；不能表明控制甘油三酯合成的基因就位于第5号染色体上，C错误；

D；由题干信息可知；利用DNA片段的敲除技术可以研究相关基因功能，D正确。

故选BC。12、C:D【分析】【分析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取；利用PCR技术扩增和人工合成；

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤；基因表达载体包括目的基因；启动子、终止子和标记基因等；

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同；导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法；基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定；抗病鉴定、活性鉴定等。

【详解】

A；检测到细菌B合成人的生长激素才能说明获得成功；A错误；

B；根据题意；细菌B不含有质粒A及其上的基因，即没有抗氨苄青霉素基因；质粒含抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因，基因发生重组时抗四环素基因被破坏，抗氨苄青霉素基因被保留，故在含氨苄青霉素的培养基上能生长的是导入了普通质粒或者重组质粒的细菌，B错误；

C；将人的生长激素基因与质粒A结合的过程连接两个切口；该过程共形成4个磷酸二酯键，C正确；

D、将目的基因导入细菌时，需要用Ca2+处理细菌；使其处于易于吸收周围环境中DNA分子的生理状态，D正确。

故选CD。

【点睛】13、A:C:D【分析】【分析】

单克隆抗体的制备过程是：对小动物注射抗原；从该动物的脾脏中获取效应B细胞，将效应B细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞，克隆化培养杂交瘤细胞(体内培养和体外培养)，最后获取单克隆抗体。

【详解】

A；重组大肠杆菌RecQ解旋酶相当于抗原；能刺激机体产生相应的体液免疫应答，则在人体内可刺激B细胞增殖分化为浆细胞和记忆B细胞，A正确；

B；单克隆抗体的制备过程中需要进行2次筛选和1次抗原检测；第一次是用选择性培养基筛选出杂交瘤细胞；第二次是通过克隆化培养和抗体检测，进一步筛选出能产生人们所需要抗体的杂交瘤细胞，B错误；

C；据图1分析；染色体数目有为80-93的细胞，免疫小鼠中B淋巴细胞染色体数目为40，骨髓瘤细胞染色体数目为62-68，两者之和大于80-93，故杂交瘤细胞在融合的过程中可能会发生染色体数目的丢失，C正确；

D、据图2分析，单抗稀释度为1/800时RecQ解旋酶结合DNA活性最低，可知mAb能特异性与RecQ解旋酶结合可显著抑制RecQ解旋酶与DNA的结合；D正确。

故选ACD。14、A:B:D【分析】【分析】

单克隆抗体的制备（1）单克隆抗体制备的原理包括：①免疫原理：B淋巴细胞能产生特异性抗体。②细胞融合原理：利用病毒对宿主细胞的穿透性使B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合。③动物细胞培养技术：对杂交瘤细胞进行体内；体外培养。（2）单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应；之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。

【详解】

A；抗体参与的是体液免疫；A错误；

B；单克隆抗体是由特异性杂交瘤细胞产生的；B错误；

C；杂交瘤细胞具有能迅速大量增殖的能力；C正确；

D、体外培养特异性杂交瘤细胞时，需要给予95％的空气和5％的CO2，D错误。

故选ABD。15、A:B:C【分析】【分析】

在利用酵母菌发酵时最好是先通入足够的无菌空气在有氧环境下一段时间使其繁殖；再隔绝氧气进行发酵；酒精发酵的最佳温度是在18℃～30℃，pH最好是弱酸性。

【详解】

A；桑葚独有的花青素等能显著增强复合果酒的功效；所以在生产复合果酒的过程中，要防止桑葚天然色素被氧化，增强功效，A正确；

B；酵母菌在有氧条件下进行快速的增殖；所以果酒发酵初期通入氧气能促进酵母菌繁殖，有利于加快果酒发酵，B正确；

C；为了防止杂菌污染；复合果酒的制备过程中对发酵设备要进行灭菌处理，C正确；

D；变酸的果酒表面会形成一层菌膜；这层菌膜是由醋酸菌形成的，D错误。

故选ABC。16、C:D【分析】【分析】

蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础；通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。也就是说，蛋白质工程是在基因工程的基础上，延伸出来的第二代基因工程，是包含多学科的综合科技工程领域。

基本流程：从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的核糖核苷酸序列（RNA）→找到相对应的脱氧核糖核苷酸序列（DNA）。

【详解】

A；蛋白质工程可以通过改造基因来定向改变蛋白质分子的结构；A正确；

B；因为基因指导蛋白质的合成；所以改造蛋白质可通过改变基因结构实现，B正确；

C；改造后的中华鲟具有新的性状；但其和现有中华鲟之间没有生殖隔离，仍是同一物种，C错误；

D；蛋白质工程改造的是基因；可以遗传给子代，因此改造后的中华鲟的后代也具有改造的蛋白质，D错误。

故选CD。三、填空题(共7题，共14分)17、略

【分析】【分析】

基因工程是指按照人们的愿望；进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋子生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA重组技术。

基因工程的原理是基因重组；其优点是打破了生殖隔离。但由于科学发展水平的限制，目前科学家对基因的结构；基因间的相互作用以及基因的调控机制等都了解得相当有限；再加上转移的基因虽然是功能已知的基因，但不少却是异种生物的基因；同时，由于外源基因插入宿主基因组的部位往往是随机的，因此在转基因生物中，有时候会出现一些人们意想不到的后果。

【详解】

（1）转基因生物具有以下优点：

作物产量高；能解决粮食短缺问题；利用基因工程生产的抗虫作物能够减少农药使用，减少环境污染；利用基因工程培育的生长迅速；营养品丰富的生物，能增加食物营养，提高附加值；利用基因工程培育微生物，能够生产稀缺的生化药物。

（2）转基因生物受限于科学发展水平；可能会产生以下问题：

转基因生物与同种生物杂交；可能产生重组病菌；重组病毒或超级杂草；导入转基因生物的外源基因有可能与感染转基因生物的某些细菌或病毒杂交，从而重组出对人类或其他生物有害的病原体，可能使疾病的传播跨越物种障碍。

（3）转基因技术取得了巨大的成果；但科学技术是把双刃剑，面对转基因技术的利弊，正确的做法应该是趋利避害，而不能因噎废食。

【点睛】

本题考查转基因生物的安全性问题，意在考查学生对转基因生物安全性问题的识记与理解。【解析】解决粮食短缺问题减少农药使用，减少环境污染增加食物营养，提高附加值能产生有毒蛋白或新过敏原可能产生重组病菌、重组病毒或超级杂草可能使疾病的传播跨越物种障碍趋利避害不能因噎废食18、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】脲酶氨碱性增强升高pH的变化酚红指示剂红19、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】低当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落菌落数20、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】2030×22030×2－221、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】基因转移基因扩增医药卫生农牧业、食品工业环境保护苏云金杆菌农药的用量生产成本农药对环境的污染。22、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】0．1423、略

【分析】【详解】

目前我国市场上的转基因食品，从原料来源看，进口的主要有大豆、油菜籽和玉米及相关产品，国内生产的有棉籽油和番木瓜，故我国市场上有大豆等的转基因产品。【解析】目前我国市场上的转基因食品，从原料来源看，进口的主要有大豆、油菜籽和玉米及相关产品，国内生产的有棉籽油和番木瓜。四、判断题(共1题，共8分)24、A【分析】【详解】

生殖性克隆存在伦理道德等方面的问题，我国政府一再重申四不原则：不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人实验。本说法正确。五、实验题(共4题，共40分)25、略

【分析】【分析】

1；选择培养基是指通过培养混合的微生物；仅得到或筛选出所需要的微生物，其他不需要的种类在这种培养基上是不能生存的。

2；分解纤维素的微生物的分离的实验原理：

（1）土壤中存在着大量纤维素分解酶；包括真菌；细菌和放线菌等，它们可以产生纤维素酶。纤维素酶是一种复合酶，可以把纤维素分解为纤维二糖，进一步分解为葡萄糖能被微生物利用，故在用纤维素作为唯一碳源的培养基中，纤维素分解菌能够很好地生长，其他微生物则不能生长。

（2）在培养基中加入刚果红；可与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，红色复合物不能形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，从而可筛选纤维素分解菌。

3；统计菌落数目的方法：

（1）显微镜直接计数法：

①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板；在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；

②方法：用计数板计数；

③缺点：不能区分死菌与活菌。

（2）间接计数法（活菌计数法）：

①原理：当样品的稀释度足够高时；培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

②操作：

a；设置重复组；增强实验的说服力与准确性。

b；为了保证结果准确；一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。

③计算公式：每克样品中的菌株数=（c÷V）×M；其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。

【详解】

（1）土壤取样时；一般选择纤维素丰富的环境。选择培养的目的是增加纤维素分解菌的数量。

（2）若测得稀释一定倍数的0.1mL稀释液中纤维素分解菌的菌落数平均值为51，通过计算得知每毫升样品中有5.1×107个纤维素分解菌，则由每mL样品中的菌株数=（c÷V）×M可得，该稀释液的稀释倍数＝5.1×107÷51×0.1=105。

（3）鉴别纤维素分解菌的培养基中应加入CR染料；它可以与纤维素形成红色复合物。若在鉴别培养基上得到部分有透明圈的菌落，透明圈越大说明降解纤维素能力越强，所以图中降解纤维素能力最强的是菌落1。

【点睛】

本题结合流程图，考查微生物的分离和培养，解题关键是识记土壤微生物分离的原理及方法；识记培养基的种类及作用，能结合图中信息准确答题。【解析】纤维素增加纤维素分解菌的数量105红①26、略

【分析】【分析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取；利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤；基因表达载体包括目的基因；启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同；导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法；基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因——DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA——分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质——抗原—抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定；抗病鉴定、活性鉴定等。

【详解】

（1）启动子是RNA聚合酶识别并结合的位点；能驱动基因的转录；如将强启动子插入到玉米叶绿体某基因内部，则会破坏该基因，获得该基因沉默（失活）突变株。为使P基因在玉米植株中超量表达，则需要强启动子和P基因不被破坏，因此应优先选用BamHⅠ和SacⅠ酶组合，将Ti质粒切开后构建重组表达载体。农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上，因此T-DNA在该实验中的作用是将强启动子和P基因带入玉米细胞并整合到玉米细胞染色体DNA上。

（2）由图可知；G418抗性基因位于Ti质粒的T-DNA上，随T-DNA一起整合到玉米细胞染色体DNA上，因此将农杆菌浸泡过的玉米愈伤组织去菌后进行植物组织培养，培养基中需加入G418进行筛选，此物质属于氨基糖苷类抗生素，它能抑制蛋白质在叶绿体和线粒体中合成，其中叶绿体是光合作用的场所，线粒体是细胞有氧呼吸的主要场所，因此可使植物的光合作用和呼吸作用（能量代谢）受到干扰，从而引起植物细胞死亡。

（3）愈伤组织是一种相对没有分化的薄壁细胞团；经液体悬浮培养可以分散成胚性单细胞，在适宜的培养基中，这种单细胞可以发育成胚状体，再继续发育成转基因玉米株系。

（4）影响玉米愈伤组织能否成功再生出植株的因素有植物激素的配比、愈伤组织继代次数以及玉米的基因型等。目前，组织培养过程中培养瓶常用透气封口膜封口，目的是防止杂菌污染。【解析】(1)RNA聚合酶沉默##失活BamH和SacⅠ酶将强启动子和P基因带入玉米细胞并整合到玉米细胞的染色体DNA上。

(2)G418呼吸作用##能量代谢

(3)薄壁细胞胚状体。

(4)玉米的基因型防止杂菌污染27、略

【分析】【分析】

PCR原理：在解旋酶作用下；打开DNA双链，每条DNA单链作为母链，以4种游离脱氧核苷酸为原料，合成子链，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链，即DNA的合成方向是从子链的5'端自3'端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程。DNA的复制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链。

【详解】

（1）分析题意可知；研究人员取1g沉积物样品接种在液体培养基中摇瓶培养，稀释后可通过稀释涂布平板法接种到培养基表面以获得单菌落。

（2）PCR技术是一项通过体外控制温度扩增DNA的技术，该技术中由于温度较高，起关键作用的酶是耐高温DNA聚合酶；PCR扩增的前提是要有一段目的基因的核苷酸片段，分析题意，该技术能在放线菌总的DNA中专一性扩增出16SrRNA基因的原因是：引物是根据16SrRNA基因的一段已知核苷酸序列设计合成的；PCR产物一般可通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定：凝胶中的DNA分子通过染色；可以在波长为300nm的紫外灯下被检测出来。

（3）分析题意，科学家将Oct3/4、Sox2、c-Mc和KIf4基因通过逆转录病毒转入小鼠成纤维细胞中，该过程中逆转录病毒是载体，能将外源基因ct3/4、Sox2、c-Mc和KIf4送入小鼠成纤维细胞；分析题意，实验目的是iPS细胞的产生不是由于培养基的作用，故实验的自变量是外源基因的有无，因变量是IPS细胞的产生情况，实验设计应遵循对照与单一变量原则，故可设计实验如下：将转入外源基因的细胞和没有转入外源基因的细胞分别培养在相同的培养基中，在相同且适宜的条件下，如果只有转入外源基因的细胞转化成了iPS细胞，则可以证明iPS细胞的产生不是由于培养基的作用。【解析】(1)稀释涂布平板法##涂布平板法

(2)耐高温DNA聚合酶引物能与16SrRNA基因特异性结合（引物是根据16SrRNA基因的一段已知核苷酸序列设计合成的）琼脂糖凝胶电泳。

(3)逆转录病毒是载体，能将外源基因ct3/4、Sox2、c-Mc和KIf4送入小鼠成纤维细胞。将转入外源基因的细胞和没有转入外源基因的细胞分别培养在相同的培养基中，在相同且适宜的条件下，如果只有转入外源基因的细胞转化成了iPS细胞，则可以证明iPS细胞的产生不是由于培养基的作用28、略

【分析】【分析】

1；基因工程的基本工具：限制性内切核酸酶；识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。DNA连接酶，将两个DNA片段连接起来，恢复被限制酶切开的磷酸二酯键。载体，将外源基因送入受体细胞。

2；基因工程的基本过程：目的基因的筛选与获取；基因表达载体的构建，将目的基因导入受体细胞，目的基因的检测和鉴定。

【详解】

（1）过程①包括逆转录和PCR，逆转录需要反转录酶的参与，PCR过程需要耐高温的DNA聚合酶。限制酶的作用是识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开，对比几种限制酶的结合位点和DGAT1-F、DGAT1-R的碱基序列，可知过程②应选用的限制酶是BamHI和XbaI。

（2）将克隆载体导入大肠杆菌；可以与外界环境隔离，能够稳定保存，准确复制，大肠杆菌比基因方便取用，故选①②④。

（3）根据培养基上菌落的分布可知所用接种方法是稀释涂布平板法。克隆载体中含有氨苄青霉素抗性基因；1acZ基因；1acZ基因编码产物在X-ga1和IPTG存在下，可以产生蓝色沉淀，使菌落呈现蓝色，否则菌落呈现白色，所以为筛选获得目标菌株，培养基应加入的成分有氨苄青霉素、X-gal、IPTG。

（4）pBI121质粒中含有卡那霉素抗性基因，所以经转化后的四尾栅藻接种于含卡那霉素的BG11固体培养基并放置于人工气候箱培养，一段时间后观察其生长情况。在BG11固体培养基上分别挑取数个单藻落接种至BG11液体培养基中光照摇床培养，液体培养基可以用于扩大培养，增加四尾栅藻种群密度。上一步骤中用未转化的四尾栅藻作对照，所以利用索氏抽提法分别测定（等量的）转化后和未转化的四尾栅藻的油脂含量，从而检测表达载体转化四尾栅藻的情况及确定目的基因是否表达。【解析】(1)反转录酶、耐高温的DNA聚合酶BamHIXbaI

(2)①②④

(3)稀释涂布平板法氨苄青霉素；X-gal、IPTG

(4)卡那霉素扩大培养（等量的）转化后和未转化的四尾栅藻六、综合题(共4题，共36分)29、略

【分析】【分析】

过程Ⅰ中胚胎干细胞（ES细胞）是由早期胚胎或原始性腺中分离出的一类细胞；在功能上具有发育的全能性。过程Ⅱ将获得的目的基因导入胚胎干细胞之前需构建基因表达载体，目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。

【详解】

（1）过程Ⅰ是胚胎干细胞发育为胚胎；利用了胚胎干细胞的全能性；体外培养时在培养液中添加抑制因子能够使胚胎干细胞维持不分化。

（2）由图可知；BamHⅠ的识别序列在Gfp基因中，因而在构建重组质粒时，应选用HindⅢ和SalⅠ两种限制酶对含Gfp基因的DNA和质粒进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。

（3）将基因表达载体导入动物细胞常用显微注射法；③过程为将早期胚胎移植入受体的胚胎移植过程。

（4）基因工程中在蛋白质水平的鉴定方法主要是抗原——抗体杂交法。

【点睛】

答题关键在于掌握基因工程和