2025年牛津译林版选择性必修3生物上册阶段测试试卷含答案

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A.①进入③之前，必须构建基因表达载体，⑥进入⑦之前，必须取滋养层做性别鉴定B.在⑥阶段移植的胚胎为桑葚胚或囊胚C.该过程综合利用了核移植、动物细胞培养和胚胎移植等工程技术D.血清蛋白基因只在牛的乳腺细胞中表达与特定的启动子有关评卷人得分二、多选题(共5题，共10分)10、有关质粒的叙述，下述说法不正确的为（）A.质粒是细菌细胞不可缺少的遗传物质B.质粒可用于基因的扩增和蛋白质的表达C.每个细菌细胞都都含有一个质粒D.质粒都由4种脱氧核糖核苷酸脱水缩合而成11、PCR可以特异性地快速扩增目的基因，成功的扩增应该产生与目的基因大小一致的扩增产物，不严谨的操作会导致无扩增产物或出现非目的基因扩增产物。下列说法正确的是（）A.若PCR反应缓冲溶液中未加入Mg2+，则结果可能不会出现扩增产物B.若模板DNA中含有抑制耐高温的DNA聚合酶活性的杂蛋白，则结果可能不会出现扩增产物C.若引物与非目的序列发生碱基互补配对，则结果可能会出现非目的序列扩增产物D.若引物间发生碱基互补配对，则结果可能会出现非目的序列扩增产物12、常见的辅助生殖技术有两种：一种叫做人工授精，即通过人工的方法，把精液或者精子送到雌性的生殖道，达到增加怀孕几率的目的；第二种辅助生殖技术就是试管动物，主要涉及体外受精、胚胎体外培养和胚胎移植等技术。下列叙述正确的是（）A.人工授精后形成的早期胚胎立即与母体子宫建立联系B.辅助生殖技术不一定会用到胚胎移植C.与克隆动物不同，试管动物的培育属于有性生殖D.人工授精和试管动物技术都要注意受体的生殖周期13、自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中N2的细菌，将玉米种子用自身固氮菌拌种后播种，可显著提高产量并降低化肥的使用量。科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程如图。以下叙述正确的是（）

A.步骤①土样应取自当地表层土壤；步骤③将土壤悬浮液稀释了1000倍B.自生固氮菌是自养型生物，不可用血细胞计数板来计数土壤悬浮液中的菌体数C.步骤②需充分振荡20min，主要目的是使土壤中的微生物充分释放到无菌水中D.步骤④所用的接种工具是涂布器，该选择培养基的特点是不添加氮源14、甲、乙是严重危害某二倍体观赏植物的病菌。研究者发现抗甲基因、抗乙基因可分别表达合成相应的蛋白质抑制甲、乙的细胞增殖，并获得了抗甲、乙的转基因植株，再将二者杂交后得到F1，结合单倍体育种技术，培育出同时抗甲、乙的植物新品种。以下相关叙述错误是（）A.分别导入不同受体细胞的抗甲、抗乙基因都能有效能编码相应的蛋白质B.培育该植物新品种的过程利用了基因工程、杂交育种和单倍体育种技术C.该新品种的培育利用了基因重组、基因突变、染色体变异等生物学原理D.培育出的该植物新品种植株是四倍体，和原植物存在着明显的生殖隔离评卷人得分三、填空题(共9题，共18分)15、平板冷凝后，为什么要将平板倒置？________16、虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有_____________、___________________(提供碳元素的物质)、_________________(提供氮元素的物质)和__________________。17、为了避免外源DNA等因素污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行_____________。而使用的缓冲液并在__________℃存储。18、动物细胞培养的流程：

取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用______处理分散成______→制成______→转入培养瓶中进行______培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续_____培养。19、植物体细胞杂交的意义：_____。20、注意：a生理基础：______，______

b植物细胞融合前需用______和______除去细胞壁21、某种微生物合成的一种蛋白酶与人体消化液中某种蛋白酶的结构和功能很相似，只是前者热稳定性较差，进入人体后容易失效。尝试根据本节课所学知识提出改造该种微生物蛋白酶的思路_________。22、应用分析与比较的方法，对生殖性克隆与治疗性克隆进行列表阐述｡

生殖性克隆与治疗性克隆的比较。比较项目生殖性克隆治疗性克隆含义__________用到的技术__________目的__________23、科学家采用定点诱变的方法构建T4溶菌酶的新蛋白质，发现其中一种新蛋白质的第9和第164位氨基酸残基被转换为半胱氨酸残基，并形成一个二硫键。这种新蛋白质的热稳定性会有什么变化？这项技术的要点是什么？_________评卷人得分四、判断题(共2题，共12分)24、从牛卵巢中采集的卵母细胞可直接用于体细胞核移植。（选择性必修3P53）()A.正确B.错误25、蛋白质工程是在基因工程的基础上，延伸出来的第二代基因工程。()A.正确B.错误评卷人得分五、实验题(共2题，共18分)26、最新调查显示手机每平方厘米就驻扎了12万个细菌；这个数字足以令马桶坐垫上的细菌队伍汗颜。某生物兴趣小组的同学，利用手机表面的细菌进行了相关的培养研究。

（1）为研究手机表面微生物的种类；用稀释涂布平板法进行细菌的纯化和分离。下面的四种菌落分布情况中，哪些选项是通过稀释涂布平板法得到的_____

（2）研究小组用琼脂扩散法测定玫瑰精油对手机表面细菌的抑制情况。该方法的操作步骤如下：首先制备牛肉膏蛋白胨平板，用涂布器将5种细菌分别接种到5个平板上，得到细菌平板。然后制备直径为5mm的滤纸圆片，采用_____灭菌法处理，将灭菌的滤纸片部分放入适宜浓度的玫瑰精油中，对照组放入_____中，浸泡10min，后将滤纸片放在5个细菌平板表面。最后将平板放入恒温培养箱中倒置培养48小时。通过测量_____来检测玫瑰精油对5种细菌的抑制效果。27、使用日益广泛的手机；在方便人们通讯联络的同时也成为细菌等病原体传播的途径。为了解手机上细菌的情况，某兴趣小组进行了如下实验，请回答相关问题：

(1)取附着在手机上细菌进行取样培养后，对菌液进行系列梯度稀释的目的是_______。

(2)A平板上生长的菌落有多种形态，说明附着在手机细菌有____种。若要使菌落能在A平板上生长，下列培养基组分中最合理的是_____(选填“甲、乙、丙”)，原因是_____。可采取____________来检测培养基A制备是否合格。培养基编号培养基组分甲蔗糖、NaC1、琼脂、水乙牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、水丙蛋白胨、NaCl、蔗糖、水

(3)初筛后将平板B的菌落通过“影印”方法接种到C培养基上培养，使C培养基对应位置上出现相同菌落。然后用伊红-美蓝染液对C进行染色，根据染色后D中出现的结果，可判断平板B中______(选填图中数字)是大肠杆菌的菌落。

(4)某同学采用平板划线法进一步纯化大肠杆菌，接种培养一段时间后，发现第一划线区不间断长满菌落，第二划线区上几乎无菌落，产生此情况的可能原因____________。评卷人得分六、综合题(共4题，共36分)28、我国已出台鼓励农作物秸秆还田的政策；但是秸秆腐化时间长；易发病虫害等问题限制其推广。某研究小组进行了利用玉米秸秆发酵制备微生物菌肥的系列实验。

（1）从植物根际土壤中筛选出具有高效固氮、释放不溶性无机磷和水解有机磷能力的三种菌株N3、Y1、W3；需选用的培养基分别为下表中的_______。

。类型组成甲葡萄糖、NaCl、MgSO4、CaSO4、CaCO3、KH2PO4，pH7．0乙葡萄糖、NaCl、KCl、MgSO4、(NH4)2SO4、植酸钙，pH7．0丙葡萄糖、NaCl、KCl、MgSO4、(NH4)2SO4、Ca3(PO4)2，pH7．0注：植酸钙分子式为C6H6Ca6O24P6；可溶于水，微溶于丙酮或乙醇。

（2）将粉碎后的玉米秸秆进行_______灭菌，冷却后接种一定浓度的里氏木霉菌悬液。发酵一定时间后，再接种等量的N3、Y1、W3菌悬液。继续发酵一定时间后；称取10g固态发酵物，梯度稀释后，用_______法统计有效活菌数。推测加入里氏木霉菌悬液的用途是：_______。

（3）分别在不同的_______；_______、接种量和发酵时间等条件下进行实验；最终确定最佳发酵条件后就可以进行发酵生产。

（4）用发酵得到的复合微生物菌肥进行烟草幼苗盆栽实验；测得栽培40天时叶片的净光合速率如下表所示。可得出的结论是：_______。

。盆栽基质土肥比例净光合速率（μmol·m-2·s-1）珍珠岩57g泥炭土150g0．5珍珠岩57g泥炭土145g、菌肥5g2．6珍珠岩57g泥炭土140g、菌肥10g4．0珍珠岩57g泥炭土120g、菌肥30g2．1（5）将玉米秸秆发酵制备的微生物菌肥用于农业生产，其优越性是：_______。（写出2点即可）29、胚胎干细胞。

（1）哺乳动物的胚胎干细胞简称ES或EK细胞，来源于______中分离出来。

（2）具有_____的特性，在形态上表现为______小，_____大，______明显；在功能上，具有______，可分化为成年动物体内任何一种组织细胞。另外，在体外培养的条件下，可以______而不发生______，可进行______保存，也可进行______。30、大丽轮枝菌（一种丝状真菌）是引起棉花黄萎病的主要病原菌；因此对其研究至关重要。为观察大丽轮枝菌对棉花根的侵染路径，研究人员通过基因工程培育出了表达绿色荧光蛋白的转基因菌株。以下是其主要过程，分析回答：

（1）据图分析，过程①表示利用______________技术获取和扩增两端含有酶切位点的绿色荧光蛋白基因（sGFP），为保证sGFP正确插入到质粒中，还需要在目的基因两端添加______________限制酶的识别序列。

（2）过程②表示基因工程的第二个步骤：______________。首先需要利用上述两种限制酶对sGFP片段和质粒进行剪切，图中质粒大片段的左端产生的黏性末端为______________。然后利用______________进行重组质粒的连接。

（3）此研究中利用______________法将sGPP导入大丽轮枝菌。为了获得所需的农杆菌，可用______________处理农杆菌，然后将重组质粒导入其中，接着在含有_______________的选择培养基上进行筛选，利用______________法进行接种；培养后获得菌落。

（4）选择不同的农杆菌菌落，分别提取细菌质粒DNA，并用上述限制酶完全酶切后电泳，结果如下，请判断______________泳道为重组质粒的酶切结果，判断依据是______________。

（5）在获得高表达的转基因大丽轮枝菌后，将其接种到棉花根部，通过持续观察______________以确定其对棉花根部的侵染路径，为棉花黄萎病的治疗提供依据。31、水稻穗粒数可影水稻产量。研究者筛选到一株穗粒数异常突变体；并进行了相关研究。

（1）农杆菌Ti质粒上的T-DNA序列，可以从农杆菌中转移并随机插入到被侵染植物的___________中；导致被插入的基因功能丧失。研究者用此方法构建水稻突变体库，并从中筛选到穗粒数异常突变体。

（2）研究者分别用EcoRⅠ；HindⅢ、BamHI三种限制酶处理突变体的总DNA；用HindⅢ处理野生型的总DNA，处理后进行电泳，使长短不同的DNA片段分离。电泳后的DNA与DNA分子探针（含放射性同位素标记的T-DNA片段）进行杂交，得到下图所示放射性检测结果。

（注：T-DNA上没有EcoRⅠ；HindⅢ、BamHI三种限制酶的酶切位点）

根据检测结果，可分析得到___________

A．突变体杂交带的位置不同；是由于不同限制酶切割后含T-DNA的片段长度不同。

B．结果表明野生型水稻DNA中不存在HindⅢ的酶切位点；突变体水稻细胞中有农杆菌。

C．突变体均出现杂交带；野生型无条带，表明T-DNA已成功转移到水稻DNA中。

D．突变体最可能为T-DNA单个位点插入；因为不同限制酶处理都只得到一条杂交带。

（3）研究者用某种限制酶处理突变体的DNA（如下图所示），用___________将两端的黏性末端连接成环，以此为模板，再利用图中的引物___________组合进行PCR；扩增出T-DNA插入位置两侧的未知序列。经过与野生型水稻基因组序列比对，确定T-DNA插入了2号染色体上的B基因中。

（4）研究发现，该突变体产量明显低于野生型，据此推测B基因可能___________（填“促进”或“抑制”）水稻穗粒的形成。参考答案一、选择题(共9题，共18分)1、A【分析】【分析】

发酵工程是指采用现代工程技术手段；利用微生物的某些特定功能，为人类生产有用的产品，或直接把微生物应用于工业生产过程的一种技术。发酵工程的内容包括菌种选育；培养基的配置、灭菌、种子扩大培养和接种、发酵过程和产品的分离提纯（生物分离工程）等方面。

【详解】

A；黑曲霉广泛分布于世界各地的粮食、植物性产品和土壤中；是重要的发酵工业菌种，黑曲霉可以用于酱油、柠檬酸、凝乳酶的工业生产，A正确；

B；发酵罐内发酵是发酵工程的中心环节；B错误；

C；发酵工程的优良性状的菌种可以从自然界中筛选出来；也可以通过诱变育种和基因工程育种获得，C错误；

D；单细胞蛋白是微生物菌体；可采用沉淀、过滤等方法分离，而代谢产物则采用蒸馏、萃取、离子交换等方法，D错误。

故选A。2、A【分析】转基因生物的安全性问题：食物安全（滞后效应；过敏源、营养成分改变）、生物安全（对生物多样性的影响）、环境安全（对生态系统稳定性的影响）。对待转基因技术的利弊；正确的做法应该是趋利避害，不能因噎废食。

【详解】

A；基因身份证即记录有个人某些基因资讯的“身份证”；A正确；

B；设计试管婴儿所引发的主要问题是不适合的胚胎的处理问题；B错误；

C；生物武器的生产、储运和使用都将对受害国的民众以及世界上爱好和平的人们造成极度恐慌和危害；我们应坚决禁止生物武器，C错误；

D；转基因生物的安全问题包括三个方面：生物安全、食物安全和环境安全；D错误。

故选A。3、B【分析】【分析】

1；试管动物技术是指通过人工操作使卵子和精子在体外条件下成熟和受精；并通过培养发育为早期胚胎后，再经移植后产生后代的技术。

2；转基因生物的安全性问题：食物安全（滞后效应、过敏源、营养成分改变）、生物安全（对生物多样性的影响）、环境安全（对生态系统稳定性的影响）．对待转基因技术的利弊；正确的做法应该是趋利避害，不能因噎废食。

【详解】

A；试管动物技术是指通过人工操作使卵子和精子在体外条件下成熟和受精；属于有性生殖，A错误；

B；我国禁止生殖性人克隆实验；允许治疗性克隆研究，B正确；

C；用转基因食品不会导致外源基因转入人体细胞；C错误；

D；变异的流感病毒不是新病毒；接种流感疫苗对预防变异的流感病毒感染有一定效果，D错误。

故选B。

【点睛】4、D【分析】【分析】

纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括C1酶；Cx酶和葡萄糖苷酶三种组分。前两种酶使纤维素分解成纤维二糖；第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。

【详解】

A；牛、羊等草食动物不能合成纤维素酶；它们之所以能利用纤维素是因为它们的瘤胃中有许多微生物可分泌纤维素酶，A错误；

B、纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶三种组分；B错误；C；纤维素被纤维素酶分解后的产物是葡萄糖，葡萄糖不能提供氮源，C错误；

D；能分解纤维素的微生物都能产生纤维素酶；它们通过纤维素酶来分解纤维素，D正确。

故选D。5、C【分析】【分析】

1；培养微生物时；培养基中需要加入碳源、氮源、无机盐、水，还需要满足微生物生长对PH、特殊营养物质以及氧气的要求等。

2；能够分解利用尿素的细菌；其细胞内含有脲酶，可以把尿素分解成氨，提供N源，进一步利用，只含有尿素作为N源的培养基对微生物具有选择作用。

【详解】

A、分解尿素的细菌是异养型，不能以CO2作为碳源；A错误；

B；倒平板时；不能将打开的培养皿盖放到一边，以免微生物污染，正确的做法是：用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基（约10～20mL）倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，B错误；

C、无机盐可以作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH稳定，所以培养基中KH2PO4等的作用之一是作为缓冲剂保持pH稳定；C正确；

D；在完全正确的操作情况下；空白对照组中不应出现菌落。若空白对照组出现菌落，说明操作过程中存在微生物污染，属于实验失误，所有实验数据均不应采用，D错误。

故选C。6、A【分析】【分析】

参与果酒制作的微生物是酵母菌；其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。醋酸菌是种好氧性细菌，只有当氧充足时，才能进行旺盛的生理活动。变酸的酒的表面观察到的菌膜就是醋酸菌在液面大量繁殖而形成的。

【详解】

A；水煮沸后直接用于浸曲；会使酵母菌失活，A错误；

B；在缺氧呈酸性的发酵液中；酵母菌能大量繁殖，而绝大多数其他微生物因无法适应这一环境而受到抑制，B正确；

C、晾堂的目的是使酵母菌在O2充足的条件下大量繁殖；C正确；

D；酒精发酵实际上利用酵母菌无氧呼吸产生酒精的过程；而醋酸菌是需氧菌，无氧环境下不能生存，D正确。

故选A。7、C【分析】【分析】

制作果酒利用的微生物是酵母菌；它的异化作用类型是兼性厌氧型；制作果醋利用的微生物是醋酸菌，它的异化作用类型是需氧型。

果酒制作的原理：在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。方程式:C₆H₁₂O₆2C₂H₅OH+2CO₂

醋酸菌在30-35℃有氧条件下糖源充足时；将葡萄糖分解成醋酸；糖源缺乏时，将乙醇变成乙醛再变成醋酸。

【详解】

A；若适当增加酵母菌的接种量；则可以缩短发酵的时间，A正确；

B；酵母菌无氧呼吸产生酒精；酒精具杀菌作用，发酵液中酒精积累是细菌数量降低的原因之一，B正确；

C；醋酸菌是需氧菌；且果醋发酵温度高于果酒发酵温度，因此果酒制成后需将装置转移至温度较高并且通入氧气的环境中才可制作果醋，C错误；

D；葡萄的品质、酵母菌菌种的纯度都会影响酵母菌的发酵过程；进而影响果酒品质，D正确。

故选C。8、C【分析】【分析】

植物细胞工程技术的应用：植物繁殖的新途径（微型繁殖；作物脱毒、人工种子）、作物新品种的培育（单倍体育种、突变体的利用）、细胞产物的工厂化生产。

【详解】

A；以根尖分生区为材料通过组织培养可以获得的脱毒苗；但不是新品种，A错误；

B；单倍体育种包括花药离体培养和秋水仙素加倍两个步骤；对于二倍体生物而言，经该方法得到的都是纯合子，能明显缩短育种时间，B错误；

C；在植物组织培养过程中；愈伤组织的分裂能力强，处于分裂状态，因此它们容易受到培养条件和诱变因素的影响而产生突变，C正确；

D；细胞产物的工厂化生产；可以通过培养更多的细胞从而提高次生代谢物的产量，但不可以提高单个细胞中次生代谢物的含量，D错误。

故选C。9、A【分析】【分析】

分析题图：①是目的基因（血清白蛋白基因）；②～③表示采用转基因技术；将目的基因（血清白蛋白基因）导入受体细胞的过程；④是重组细胞；⑤是早期胚胎；⑤～⑥采用了胚胎分割技术，对囊胚进行胚胎分割时，要将内细胞团均等分割；⑥～⑦表示胚胎移植过程；⑧是转基因生物（乳腺生物反应器）。

【详解】

A；在⑤的囊胚阶段DNA分析；进行性别鉴定，取样部位为滋养层细胞，A错误；

B；⑥阶段移植的胚胎为桑葚胚或囊胚；B正确；

C；以上过程涉及的现代生物学技术中；属于细胞工程的有核移植技术、动物细胞培养；属于胚胎工程的是早期胚胎培养、胚胎分割、胚胎移植，C正确；

D；启动子是RNA聚合酶结合和识别的位点；用于驱动基因的转录，血清白蛋白基因只在奶牛的乳腺细胞中表达与是否有启动子有关，故要使人血清白蛋白基因在转基因奶牛的乳腺细胞中表达，应将其与（牛）乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组，D正确。

故选A。二、多选题(共5题，共10分)10、A:C【分析】【分析】

质粒是细胞染色体外能够复制得很小的环状DNA分子。广义上说几乎所有的细胞都有质粒(比如线粒体DNA)；狭义上指存在于许多细菌酵母菌；放线菌等生物中的质粒。质粒与染色体DNA一样都是双链DNA分子，质粒亦可携带遗传信息，质粒上面一般含有几个到几百个基因，控制着细菌的抗药性、固.氮、抗生素生成等性状。然而质粒也有一些与染色体DNA不同的特性。

质粒具有以下特点；质粒可以独立复制；质粒很小细菌质粒的分子量乙般较小，约为细菌DNA的0.5%~3%；质粒的存在与否对宿主细胞生存没有决定性作用。

【详解】

A；细菌的遗传物质是DNA；质粒是某些细菌细胞质中小型的环状DNA，质粒的存在与否对宿主细胞生存没有决定性作用，因此，质粒不是细菌细胞不可缺少的遗传物质，A错误；

B；质粒可以独立复制；因此，目的基因与质粒连接后形成重组质粒之后，目的基因可随着质粒DNA的复制而复制，质粒上有基因存在，如质粒上有抗性基因的存在，因此质粒还可控制蛋白质的表达，B正确；

C；细菌细胞不都含有质粒；且每个细菌细胞不都含有一个质粒，C错误；

D；质粒是小型的环状DNA分子；因此，是由4种脱氧核糖核苷酸脱水缩合而成的，D正确。

故选AC。

【点睛】11、A:B:C【分析】【分析】

PCR技术扩增目的基因。

（1）原理：DNA双链复制。

（2）过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链；第二步：冷却到55～60℃；引物结合到互补DNA链；第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。

【详解】

A、Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大；浓度过高可降低PCR扩增的特异性，浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带，A正确；

B；若模板DNA中含有抑制耐高温的DNA聚合酶活性的杂蛋白；则可能会抑制PCR反应中的延伸步骤，导致结果不会出现扩增产物，B正确；

C；若引物与非目的序列发生碱基互补配对；则会使引物与模板结合位置错误，导致扩增片段错误出现非目的序列扩增产物，C正确；

D；若引物间发生碱基互补配对；则结果可能不出现扩增产物或产物减少，D错误。

故选ABC。12、B:C:D【分析】【分析】

胚胎工程技术包含的内容很丰富；目前在医学和生产上应用较多的是体外受精；胚胎移植和胚胎分割等，借助这些技术，可以进一步挖掘动物的繁殖潜力。哺乳动物的体外受精技术主要包括卵母细胞的采集、精子的获取和受精等步骤。采集到的卵母细胞和精子，要分别在体外进行成熟培养和获能处理，然后才能用于体外受精。

【详解】

A；人工授精后形成的早期胚胎在一定时间内并未与母体子宫建立组织上的联系；A错误；

B；如果是人工授精的方式进行辅助生殖技术；就不需要胚胎移植，B正确；

C；克隆技术属于无性繁殖；试管动物的培育涉及精卵结合，属于有性生殖，C正确；

D；受体的生殖周期将影响人工授精和试管动物技术的成功率；故人工授精和试管动物技术都要注意受体的生殖周期，D正确。

故选BCD。13、A:C:D【分析】【分析】

微生物常见的接种的方法。

（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板；接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后；均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

【详解】

A；自生固氮菌是需氧型生物；步骤①土样应取自表层的土壤，步骤③中的稀释梯度分别为10，100，1000倍，所以土壤悬浮液稀释了1000倍，A正确；

B；自生固氮菌是异养型生物；可用血细胞计数板或稀释涂布平板法来计数土壤悬浮液中的菌体数，B错误；

C；步骤②需充分振荡20min；主要目的是使土壤中的微生物充分释放到无菌水中，C正确；

D；步骤④为稀释涂布平板法接种；所用的接种工具是涂布器，该选择培养基的特点是不添加氮源，利用的是空气中的氮气，D正确。

故选ACD。14、A:C:D【分析】【分析】

1；单倍体：体细胞中具有本物种配子染色体数的个体；个体发育的起点是配子。获取方法是花药离体培养。单倍体育种的方法：花药离体培养和用秋水仙素处理幼苗。

2；基因工程的步骤：获取目的基因、构建基因表达载体、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。

【详解】

A；目的基因导入受体细胞不一定能表达；A错误；

B；该品种的培育利用了基因工程、杂交育种、单倍体育种技术；B正确；

C；该品种的培育涉及基因工程、杂交育种、单倍体育种等操作；培育过程利用了基因重组、染色体变异等原理，没有利用基因突变，C错误；

D；该新品种依然是二倍体；没有证据表明其是一个新物种，D错误。

故选ACD。

【点睛】三、填空题(共9题，共18分)15、略

【解析】平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠。将平板倒置，既可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染，又可避免培养基中的水分过快挥发16、略

【解析】①.水②.碳源③.氮源④.无机盐17、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】高压灭菌—2018、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】胰蛋白酶单个细胞细胞悬液原代传代19、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】克服了远缘杂交不亲和的障碍。20、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】细胞膜流动性植物细胞全能性纤维素酶果胶酶21、略

【分析】【详解】

要提高酶的热稳定性，可采用蛋白质工程技术替换少数氨基酸，改善其功能，需要从改造控制该酶合成的基因着手，具体做法为从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列→获得所需的蛋白质。【解析】采用蛋白质工程技术替换少数氨基酸，提高该酶的热稳定性，从改造控制该酶合成的基因着手，具体做法为从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列→获得所需的蛋白质。22、略

【分析】【详解】

生殖性克隆指利用克隆技术获得胚胎；并将胚胎孕育成为人类个体的克隆性技术，其目的是用于生育，获得人的复制品；治疗性克隆是指利用克隆技术产生特定细胞或组织等，用于治疗性移植的克隆性技术，其目的是用于医学研究和疾病的治疗。

据概念可知，实现生殖性克隆和治疗性克隆都会用到的技术有体细胞核移植技术、动物细胞培养技术、早期胚胎培养技术、胚胎移植技术等；治疗性克隆在获取胚胎干细胞后，根据治疗目的诱导干细胞分化形成各种组织和器官，供患者移植用，故治疗性克隆还会应用到的技术为干细胞培养技术。【解析】生殖性克隆指利用克隆技术获得胚胎，并将胚胎孕育成为人类个体的克隆性技术治疗性克隆是指利用克隆技术产生特定细胞或组织等，用于治疗性移植的克隆性技术体细胞核移植技术、动物细胞培养技术、早期胚胎培养技术、胚胎移植技术等体细胞核移植技术，早期胚胎培养技术、动物细胞培养技术、胚胎移植技术、干细胞培养技术等用于生育，获得人的复制品用于医学研究和疾病的治疗23、略

【分析】【详解】

蛋白质形成二硫键，使蛋白质的结构更加稳定，因此T4溶菌酶的热稳定性会提高。这项技术属于蛋白质工程技术，其步骤为从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列（基因）或合成新的基因→获得所需的蛋白质。【解析】会提高T4溶菌酶的耐热性。这项技术属于蛋白质工程技术，该技术的要点是从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列（基因）或合成新的基因→获得所需的蛋白质。四、判断题(共2题，共12分)24、B【分析】【详解】

从牛卵巢中采集到卵母细胞后；接着对其进行的操作是先在体外培养到减数第二次分裂中期，再通过显微操作去除卵母细胞中的细胞核，获得去核的卵母细胞，再经核移植获得重组的受体细胞。

故该表述错误。25、A【分析】【详解】

蛋白质工程是在分子水平上通过基因修饰或基因合成来完成的，是在基因工程的基础上延伸出来的第二代基因工程。故该说法正确。五、实验题(共2题，共18分)26、略

【分析】【分析】

1；微生物常见的接种的方法①平板划线法：将已经溶化的培养基倒入培养皿制成平板、划线接种、在恒温箱里培养。在线的开始部分；微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过适量稀释后，均匀涂布在固体培养基表面，经培养后可形成单个菌落。

2；常用的灭菌方法：干热灭菌法、灼烧灭菌法、高压蒸汽灭菌法。

【详解】

（1）培养微生物的培养基一般含有水；碳源、氮源和无机盐；在除上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。

（2）制备固体培养基的基本步骤有：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。等平板冷却凝固后；应将平板倒置，这样做的目的是，防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面对培养基造成污染，又可以避免培养基中的水分过快的挥发。

（3）由图和分析可知；A；B、C为通过稀释涂布平板法得到的菌落（菌落分布较均匀），D为通过平板划线法得到的菌落（菌落分布在线条上）。

故选ABC。

（4）为保持滤纸的干燥；灭菌时应用干热灭菌法，不宜采用高压蒸汽灭菌法。将灭菌的滤纸片分别放入适宜浓度的玫瑰精油和无菌水中（对照）浸泡10min，再将滤纸片放在5个细菌平板表面，最后将平板放入恒温箱中倒置培养48h。通过测量透明圈直径(抑菌圈直径)可判断玫瑰精油对5种供试细菌的抑制效果，抑菌圈越大，说明抑制作用越强。

【点睛】

本题考查微生物的培养、筛选、琼脂扩散法测定玫瑰精油的抑菌情况等知识，要求识记培养基的成分、筛选方法，熟练掌握实验步骤。【解析】ABC干热无菌水透明圈的直径（大小）27、略

【分析】【分析】

1、微生物常见的接种的方法：

（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后；均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

2、实验室常用的灭菌方法

①灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰燃烧来灭菌；

②干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以采用这种方法灭菌；

③高压蒸汽灭菌：将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内；为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30min。

(1)

取附着在手机上细菌进行取样培养后；对菌液进行系列梯度稀释的目的是将微生物分散成单个细胞，进而获得单个的菌落。

(2)

A平板上生长的菌落有多种形态；说明附着在手机细菌种类较多。牛肉膏；蛋白胨提供的主要营养是氮源、维生素和生长因子。培养基乙含有碳源、氮源、水、无机盐这几类营养物质，且加入了琼脂作为凝固剂，可以达到实验效果；培养基甲不含蛋白胨（氮源），菌落无法在该培养基上生长；培养基丙不含凝固剂（琼脂），无法形成固体培养基，无法在培养基表面形成菌落。检测培养基A制备是否合格，可将培养基置于适宜条件下培养一段时间，检测其是否杂菌生成。

(3)

伊红为酸性染料；美蓝为碱性染料。当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。由图可知3号菌落为大肠杆菌菌落。

(4)

采用平板划线法接种培养一段时间后；发现第一划线区域上都不间断长满菌落，第二划线区域几乎无菌落，原因可能是接种环灼烧后未冷却就划线或未从第一区域末端开始划线。

【点睛】

本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记微生物接种的方法、菌落计数、以及菌种保存等知识，意在考查考生对基础知识的掌握和灵活运用基础知识的能力。【解析】(1)将微生物分散成单个细胞；进而获得单个的菌落。

(2)多乙培养基乙含有碳源；氮源、水、无机盐这几类营养物质；且加入了琼脂作为凝固剂，可以达到实验效果将培养基置于适宜条件下培养一段时间，检测其是否杂菌生成。

(3)3

(4)第一次划线后接种环灼烧后没有冷却；未从第一次划线区开始划线六、综合题(共4题，共36分)28、略

【分析】【分析】

在微生物培养中；各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水；碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）和无机盐。另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。

【详解】

（1）固氮菌可以利用空气中的氮气，因此菌株N3的培养基中不需要氮源，N3对应培养基甲；水解有机磷的菌株W3，在培养基中应含有有机磷（植酸钙），故W3对应培养基乙；丙培养基中有Ca3(PO4)2，对应释放不溶性无机磷的Y1。

（2）粉碎后的玉米秸秆灭菌采用高压蒸汽灭菌法；要统计有效活菌数；用稀释涂布平板法；推测在粉碎的秸秆溶液中加入里氏木霉菌悬液的用途是，初步分解玉米秸秆中的物质，使其容易被目的菌吸收利用。

（3）分别在不同的温度和pH；接种量和发酵时间等条件下进行实验；最终确定最佳发酵条件后就可以进行发酵生产。

（4）从表格数据可以看出；加了菌肥后，净光合速率都比对照组要高，故可以得出结论：复合微生物菌肥能促进烟草的光合作用，且在土肥比为14∶1时促进作用最强。

（5）将玉米秸秆发酵制备的微生物菌肥用于农业生产；其优越性是：降低或替代化学肥料的使用；可有效利用秸秆废弃物；减少秸秆直接还田导致的病虫害。

【点睛】

本题主要考查微生物的培养和筛选的相关知识，意在考查考生识记培养基的成分等，能挖掘题干信息，分析题干情境准确作答。【解析】甲、丙、乙高压蒸汽涂布平板初步分解玉米秸秆中的物质，使其容易被目的菌吸收利用温度pH复合微生物菌肥能促进烟草的光合作用，且在土肥比为14∶1时促进作用最强降低或替代化学肥料的使用；可有效利用秸秆废弃物；减少秸秆直接还田导致的病虫害29、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】（1）早期胚胎或从原始性腺。

（2）胚胎细胞体积细胞核核仁发育的全能性增殖分化冷冻遗传改造30、略

【分析】【分析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取；利用PCR技术扩增和人工合成；

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤；基因表达载体包括目的基因；启动子、终止子和标记基因等；

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同；导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法；基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定；抗病鉴定、活性鉴定等。

【详解】

（1）结合图示可知；过程①表示利用PCR技术获取和扩增两端含有酶切位点的绿色荧光蛋白基因的过程，为保证sGFP正确插入到质粒中并且准确连接，由于目的基因需要连接在启动子和终止子之间，还需要在目的基因两端添加限制酶HindⅢ和BamHⅠ的识别序列，因为使用不同种限制酶切割目的基因和质粒，可以产生不同的黏性末端，防止目的基因和载体反向连接，自身环化。

（2）过程②为目的基因表达载体的构建；是基因工程的核心步骤。该构成中首先需要利用上述两种限制酶对sGFP片段和质粒进行剪切，图中质粒大片段的左端的限制酶是HindⅢ，根据HindⅢ识别的碱基序列可知，图中质粒大片段的左端的黏性末端碱