项目九微生物的分布与控制任务消毒与灭菌讲解

项目九微生物的分布与控制

任务3消毒与灭菌一、基本概念（一）消毒

消毒是杀死物体上病原微生物，并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物的方法。用以消毒的药品称为消毒剂。（二）灭菌灭菌是杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒要求高，包括杀灭细菌芽胞在内的全部病原微生物和非病原微生物。任务3消毒与灭菌（三）抑菌抑菌是抑制体内或体外细菌生长繁殖的方法。常用的抑菌剂为各种抗生素。（四）防腐防腐是防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法。细菌一般不死亡。（五）无菌

不存在活菌，多是灭菌的结果。无菌操作是防止微生物进入人体或物体的操作技术。任务3消毒与灭菌二、控制微生物的意义控制有害微生物大量繁殖的重要性体现在以下几个方面。（1）防止疾病的发生和传播。（2）培养过程中防止微生物的污染。（3）防止微生物引起的原材料的变质和腐败。任务3消毒与灭菌三、化学消毒灭菌法化学消毒灭菌法利用化学药物渗透细菌的体内，使菌体蛋白凝固变性，干忧细菌酶的活性，抑制细菌代谢和生长，或损害细胞膜的结构，改变其渗透性，破坏其生理功能等，从而起到消毒灭菌作用。(一)杀菌机制（1）使菌体蛋白变性或凝固。（2）干扰微生物酶系统和影响其代谢。（3）损伤细胞膜，提高其通透性。任务3消毒与灭菌（二）常用消毒剂种类1.酚类酚类消毒剂作用机制、种类和用途如表5-1所示。作用机制

常用消毒剂

用途使蛋白质变性；损伤细胞膜灭活相关酶类。3%~5%石炭酸地面、器具表面消毒2%来苏尔皮肤消毒0.01%~0.05%洗必泰术前洗手任务3消毒与灭菌2.醇类醇类消毒剂作用机制、种类和用途如表5-2所示。作用机制

常用消毒剂

用途使蛋白质变性凝固；干扰细胞代谢。70%~75%乙醇皮肤消毒50%~70%异丙醇体温计消毒2%苯氧乙醇伤口及烧伤感染任务3消毒与灭菌3.重金属盐类重金属盐类消毒剂作用机制、种类和用途如表5-3所示。表5-3重金属盐类消毒剂作用机制

常用消毒剂

用途使蛋白质变性凝固；具有氧化作用；灭活相关酶类。0.05%—0.1%升汞（氯化汞）非金属器皿的消毒2%红汞（2,7-二溴-4-羟汞基荧光红双钠盐）皮肤、粘膜、小创伤消毒0.1%硫柳汞（乙汞硫水杨酸钠）皮肤消毒、手术部位消毒1%硝酸银新生儿滴眼预防淋球菌感染任务3消毒与灭菌4.氧化剂类氧化剂类消毒剂作用机制、种类和用途如表5-4所示。表5-4氧化剂类消毒剂作用机制

常用消毒剂

用途具有氧化作用；使蛋白质沉淀。0.1%高锰酸钾皮肤、尿道消毒3%过氧化氢水果消毒0.2%过氧乙酸创口、皮肤、粘膜消毒2%碘伏器材消毒、广谱杀菌碘酒皮肤消毒0.5ppm氯饮用水消毒10%—20%漂白粉地面、厕所、排泄物消毒任务3消毒与灭菌5.表面活性剂类表面活性剂类消毒剂作用机制、种类和用途如表5-5所示。作用机制

常用消毒剂

用途损伤细胞膜；灭活相关酶类；使蛋白质沉淀。0.1%新洁尔灭外科手术洗手，皮肤粘膜消毒，浸泡手术器械0.1%杜灭芬皮肤创伤冲洗，金属器械、棉织品、塑料、橡皮类消毒表5-5表面活性剂类消毒剂任务3消毒与灭菌6.烷化剂类烷化剂类消毒剂作用机制、种类和用途如表5-6所示。表5-6烷化剂类消毒剂作用机制

常用消毒剂

用途使菌体蛋白沉淀；使核酸烷基化。10%甲醛浸泡消毒，空气消毒福尔马林保存动植物标本1%-5%环氧乙烷手术器械、敷料消毒2%戊二醛精密仪器、内窥镜消毒任务3消毒与灭菌7.染料类染料类消毒剂作用机制、种类和用途如表5-7所示。表5-7染料类消毒剂作用机制

常用消毒剂

用途对核酸有亲和力影响繁殖以及干扰氧化过程。2%龙胆紫浅表创伤消毒任务3消毒与灭菌8.酸碱类酸碱类消毒剂作用机制、种类和用途如表5-8所示。表5-8染料类消毒剂作用机制

常用消毒剂

用途破化细胞膜、细胞壁；凝固蛋白。醋酸熏蒸空气消毒1:4生石灰地面、排泄物消毒任务3消毒与灭菌9.其他其他消毒剂作用机制、种类和用途如表5-9所示。表5-9其他消毒剂作用机制

常用消毒剂

用途使蛋白变性；干扰酶系统。苯酚：乳酸（1:1）熏蒸无菌室乳酸空气消毒苯扎溴铵作用于革兰氏阳性菌任务3消毒与灭菌四、影响消毒效果的因素

许多因素会影响消毒剂的作用，而且各种消毒剂对这些因素的敏感性差异很大。（一）微生物的种类

不同类型的病原微生物对消毒剂抵抗力不同，因此，进行消毒时必须区别对待。（二）细菌繁殖体细菌繁殖体易被消毒剂消灭，一般革兰阳性细菌对消毒剂较敏感，革兰阴性杆菌则常有较强的抵抗力。繁殖体对热敏感，消毒方法以热力消毒为主。任务3消毒与灭菌（三）细菌芽胞

细菌芽胞对消毒因子耐力最强，杀灭细菌芽胞最可靠的方法是热力灭菌、电离辐射和环氧乙烷熏蒸法。在化学消毒剂中，戊二醛、过氧乙酸能杀灭芽胞，但可靠性不如热力灭菌法。（四）病毒

病毒对消毒因子的耐力因种类不同而有很大差异，亲水病毒的耐力较亲脂病毒强。任务3消毒与灭菌（五）真菌

真菌对干燥、日光、紫外线以及多数化学药物耐力较强，但不耐热（60℃，1h即可杀灭）。（六）微生物的数量

污染的微生物数量越多，需要消毒的时间就越长，需要剂量就越大。任务3消毒与灭菌（七）有机物的存在（1）有机物在微生物的表面形成保护层妨碍消毒剂与微生物的接触或延迟消毒剂的作用，以至于微生物逐渐产生对药物的适应性。（2）有机物和消毒剂作用，形成溶解度比原来更低或杀菌作用比原来更弱的化合物。（3）一部分消毒剂与有机物发生了作用，则对微生物的作用浓度降低。（4）有机物可中和一部分消毒剂。重金属类、表面活化剂类消毒剂等受有机物影响较大，对戊二醛影响较小。任务3消毒与灭菌（八）温度

随着温度的升高，消毒剂的杀菌作用一般会增强，但温度的变化对各种消毒剂影响不同，如甲醛、戊二醛、环氧乙烷的温度升高1倍时，杀菌效果可增加10倍。而酚类和酒精受温度影响小。（九）pHpH从两方面影响杀菌作用：（1）对消毒剂的作用：改变其溶解度和分子结构。（2）pH过高或过低对微生物的生长均有影响。在酸性条件下，细菌表面负电荷减少，阴离子型消毒剂杀菌效果好。在碱性条件下，细菌表面负电荷增多，有利于阳离子型消毒剂发挥作用。（十）处理剂量与监测

保证消毒、灭菌处理的剂量，加强效果监测，防止再污染。任务4干热灭菌技术物理因素影响着微生物的化学合成和新陈代谢，因此可用改变环境中物理因素的方法进行灭菌、消毒和防腐。一、焚烧

焚烧与灼烧是直接利用火焰将微生物烧死的一种灭菌方法，又称火焰灭菌法。焚烧是一种彻底的灭菌方法，它的作用范围包括污染纸张、垃圾等废弃物和动物尸体。二、灼烧直接用火焰灭菌，适用于实验室的金属器械（镊、剪、接种环等）、玻璃试管口和瓶口等的灭菌。任务4干热灭菌技术三、干烤

应用烤箱高温灭菌，160℃，2h。可杀死一切微生物，并可破坏内毒素。主要用于玻璃器皿、瓷器等的灭菌。四、红外线灭菌

红外线（infrared）是波长为770nm~1000μm的电磁波，以1~10μm波长的热效应最强。红外线的热效应只能在照射到的表面产生，不能使物体均匀加热，常用于碗、筷等食具的灭菌。五、微波

波长为1~1000mm的电磁波统称为微波，可穿透玻璃、塑料薄膜与陶瓷等物质，但不能穿透金属表面，微波炉的热效应分布不均匀，灭菌效果不可靠，用于非金属器械及食具消毒。任务5湿热灭菌技术湿热灭菌法是指用饱和水蒸气、沸水或流通蒸气进行灭菌的方法，湿热法可在较低的温度下达到与干热法相同的灭菌效果，原因如下：湿热灭菌法的灭菌效果比干热灭菌法高，是药物制剂生产过程中最常用的灭菌方法。（1）蛋白质凝固所需的温度与其含水量有关，含水量愈大，发生凝固所需的温度愈低。湿热灭菌的菌体蛋白质吸收水分，比在同一温度的干热空气中易于凝固。（2）温热灭菌过程中蒸气放出大量潜热，加速提高湿度。因而湿热灭菌比干热所需温度低，如在同一温度下，则湿热灭菌所需时间比干热短。（3）湿热的穿透力比干热大，使深部也能达到灭菌温度，故湿热比干热收效好。任务5湿热灭菌技术一、流通蒸气消毒法在一个大气压下利用100℃的水蒸气进行消毒。器械是消毒器或普通蒸笼。15~30min可杀灭细菌繁殖体，但不保证杀灭芽胞。消毒物品的包装不宜过大、过紧，以利于蒸气穿透。通过流通蒸气的方法只能够杀死绝大多数病原微生物，但不能够彻底杀灭芽胞或者抵抗力较强的非致病性微生物，因此该方法准确来说只属于常规消毒的范畴，不能套上“灭菌”这个概念。任务5湿热灭菌技术二、间歇蒸气灭菌法间歇蒸气灭菌法又称分段灭菌法或丁达尔灭菌法，适用于不耐高温的培养基、药液、酶制剂、血清等。具体做法是将物品放在80~100℃下蒸煮15~60min，以杀灭其中所有微生物营养体，再搁置室温（28~37℃）下过夜，诱导其中残存的芽孢发芽，连续重复该过程3次以上。这种方法可以在较低的灭菌温度下达到灭菌的良好效果。任务5湿热灭菌技术三、高压蒸气灭菌法

高压蒸气灭菌法，可杀灭包括芽胞在内的所有微生物，是灭菌效果最好、应用最广的灭菌方法。方法是将需灭菌的物品放在高压锅内，加热时蒸气不外溢，高压锅内温度随着蒸气压的增加而升高，在101kPa（1.05kg/cm2）蒸气压下温度达到121℃，维持15~20min。适用于普通培养基、生理盐水、手术器械、玻璃容器及注射器、敷料等物品的灭菌。任务6其他灭菌技术一、巴氏消毒法

巴氏消毒法亦称低温消毒法或冷杀菌法，是一种在较低的温度下既可杀死病菌，又能保持物品中营养物质风味不变的消毒法。现在常常被广义地用于需要杀死各种病原菌的热处理方法。任务6其他灭菌技术(一)主要原理

在一定温度范围内，温度越低，细菌繁殖越慢，温度越高，繁殖越快。但温度太高，细菌就会死亡，不同的细菌有不同的最适生长温度和耐热、耐冷能力。

巴氏消毒其实就是利用病原体不是很耐热的特点，用适当的温度和保温时间处理，将其全部杀灭，但经巴氏消毒后，仍保留了小部分无害或有益，较耐热的细菌或细菌芽孢。因此巴氏消毒牛奶要在4℃左右的温度下保存，且只能保存3~10天，最多16天。任务6其他灭菌技术（二）现行方法

一种是将牛奶加热到62~65℃，保持30min。采用这一方法，可杀死牛奶中各种生长型致病菌，灭菌效率可达97.3%~99.9%，经消毒后残留的只是部分嗜热菌及耐热性菌以及芽孢等，但这些细菌多数是乳酸菌，乳酸菌对人无害反而有益健康。

第二种方法将牛奶加热到75~90℃，保温15~16s，其杀菌时间更短，工作效率更高，但杀菌的基本原则是，能将病原菌杀死即可，温度太高反而会有较多的营养损失。任务6其他灭菌技术二、低温抑菌法

低温抑菌法在食品工业中采用最多，因为在低温下（4℃左右）大多数病原菌都不能生长，在微生物学实验和微生物工业中，这种方法不能起到灭菌的作用。一般在-20℃微生物就不会生长了，因为此时没有液态的水供微生物活动之用，也有些微生物可以被冰杀死，因为冰会破坏微生物细胞膜。任务6其他灭菌技术三、煮沸法

煮沸至100℃，保持5~10min，能杀死一般细菌的繁殖体。许多芽胞需经煮沸60~120min及以上才死亡。水中加入2%碳酸钠，可提高其沸点达105℃。既可促进芽胞的杀灭，又能防止金属器皿生锈。煮沸法可用于饮水和一般器械（刀剪、注射器等）的消毒。任务6其他灭菌技术四、辐射法(一)紫外线杀菌

不同的微生物对紫外线的抵抗力不同。其中265nm波长的紫外线对微生物最具杀伤力。紫外线的穿透力很弱，易被固态物质吸收，不能穿过普通玻璃和纸张。因此，只适用于表面消毒和空气、水的消毒。紫外线灭菌广泛应用于微生物化验室、医院、公共场所的空气消毒。

当空气中湿度超过55%~60%时，紫外线的杀菌效果迅速下降，必须防止紫外线对人体的直接照射，以免损伤皮肤和眼结膜。（二）钴-60灭菌采用钴-60灭菌的物质一般仅升温5℃，又称“冷灭菌”。灭菌的主要物品有医疗器械、医用塑料制品或抗生素等。钴-60的使用需要专门的辐射源和相应的安全防护设备。任务6其他灭菌技术五、渗透压法

渗透压法是利用高