药品微生物检验技术 课件 模块二 项目六 异常毒性检查

《药品微生物检验技术》模块二药品安全性检查项目六异常毒性检查

任务一小白鼠的挑选与饲养

任务二右旋糖酐20葡萄糖注射液的异常毒性检查

目录项目六异常毒性检查

任务一小白鼠的挑选与饲养

任务引入请思考异常毒性检查需要使用实验动物，而动物的品质是影响试验结果的重要因素之一。

小白鼠的挑选与饲养有什么特殊要求呢？

相关知识-异常毒性

一、异常毒性的概念

异常毒性非药物本身所具有的毒性，是指在生产过程中引入或其他原因所致的毒性。某些生物制品可能在制备的过程中混入或在储存过程中分解产生与原料毒性不同，而且毒性大于原料的杂质（如微生物发酵过程中可能产生一些难以预测的毒素和未知杂质），而这些杂质又难以用理化的方法加以控制，这时进行异常毒性检查就显得尤为重要。二、异常毒性检查的原理

异常毒性检查系给予动物一定剂量的供试品溶液，在规定时间内观察动物出现的异常反应或死亡情况，检查供试品中是否污染外源性毒性物质以及是否存在意外的不安全因素。因此，异常毒性检查实际上是一个限度试验。任务实施一、制订工作计划序号工作内容完成时间成员负责人1试验前准备

2小白鼠的挑选

3小白鼠的饲养

根据任务要求，制定合理工作进度计划，并根据小组成员的特点进行分工。任务实施二、试验前准备设备、器材规格数量用途天平

小白鼠称重小鼠固定器、支架

固定小白鼠鼠笼、饲料

溶解、稀释溶液

小白鼠应从具备实验动物生产许可资质的单位购进，来源、饲养条件、品种均应相同。小白鼠须健康、无伤、毛色光滑、活泼，体重在18～22g,雌雄并用(雌性不得有孕)。同时还要注意鼠龄，一般正常饲养条件下，体重达到18～22g时，鼠龄约25天，避免挑选因饲养条件较差导致体重达标但鼠龄较大的小白鼠。小白鼠在称重前自然饱腹，做过本试验的小白鼠不得重复使用。三、小白鼠的挑选要求

在小白鼠较安静的时候，轻轻取走鼠笼盖，用右手将其尾部抓住并提起，放在鼠笼盖上，轻轻向后拉鼠尾，当小白鼠向前挣脱时，用左手拇指及食指抓住小白鼠头颈部皮肤，使其头部固定，然后将鼠体置于左手心中，翻转左手，右手拉住鼠尾部，将后肢拉直，再用左手无名指和小指夹紧后肢与尾巴，以掌心包住小白鼠的背部，使其头、躯干及尾部呈一条直线，即可进行注射和其他操作。进行尾部注射时，可将小白鼠装入固定器，只留尾巴在外面。四、小白鼠的抓取与固定

小白鼠的饲养环境要求温度为20~26℃,相对湿度为30%～70%,保持空气清新，空气中沉降菌最大平均浓度为3cfu/(0.5h·φ90mm平皿),氨质量浓度小于或等于14mg/m³,实验室维持昼夜明暗交替。采用适当营养成分的饲料，保持一直有饲料和洁净的水供应。垫料定期更换，一般每周2～3次。五、小白鼠的饲养任务实施六、小白鼠挑选原始记录动物品种来源数量性别体重毛色是否健康无外伤状态是否活泼饲养环境室温：℃相对湿度：%检验人员日期任务测评考核内容考核标准配分得分试验前准备能判断试验需要的设备、器材是否准备好15小鼠的挑选与饲养能按要求正确挑选小鼠15能正确饲养小鼠15小鼠的抓取与固定能正确抓取小鼠15能正确使用固定器固定小鼠15小鼠的称量能按要求对小鼠进行体重称量15清场能按要求完成清场10合计100项目六异常毒性检查

任务二右旋糖酐20葡萄糖注射液的异常毒性检查

任务引入请思考

右旋糖酐20葡萄糖注射液可以有效治疗因创伤、烧伤、失血引起的休克，还适合平时患有脑血栓、心绞痛、脑供血不足的人群使用。该药通过静脉注射直接进入血液循环，如果混有超过正常毒性的杂质，可能导致急性不良反应。如何对注射液进行异常毒性检查呢?

按照抽样标准抽取一定数量的右旋糖酐20葡萄糖注射液供试品，注入小鼠体内，在规定时间内观察小鼠死亡情况，以判定供试品是否符合规定。任务分析(1)异常毒性检查实际上是一个限度试验，在此剂量条件下，一般供试品不会导致动物中毒死亡。除试验方法存在的差异或偶然差错外，如果动物出现急性中毒甚至死亡，则表明该供试品中含有的急性毒性物质超过了正常水平。

(2)供试品的注射速度是试验成功的重要影响因素之一，注射速度过快、过慢或不均匀都有可能影响试验结果。因此，在试验时要保持匀速给药，且一次试验中每只小鼠的注射时间要尽量保持一致。

(3)按照《中国药典》2020年版的规定，确定右旋糖酐20葡萄糖注射液的检验数量、检验量，保证供试品抽样的客观性，完成供试品检查。在规定时间内观察小鼠异常反应或死亡情况，以判断供试品是否合格。相关知识-异常毒性检查法的操作流程

《中国药典》2020年版对非生物制品及生物制品的异常毒性试验有以下规定。

1.非生物制品异常毒性试验

应采用小鼠试验法。除另有规定外，取小鼠5只，体重为18～22g,每只小鼠分别静脉注射平衡至室温的供试品溶液0.5mL。应在4~5s内匀速注射完毕。规定缓慢注射的品种可延长至30s。若注射时药液有损失，应重新领取小鼠注射。注射完毕后，拔出针头，用消毒棉球按住注射部位并轻轻按压，防止药液外漏。止血后，将小鼠放回鼠笼，及时观察反应，并做好记录。相关知识-异常毒性检查法的操作流程

2.生物制品异常毒性试验

生物制品异常毒性试验应包括小鼠试验和豚鼠试验。首先将供试品温度平衡至室温，按照规定的给药途径缓慢注入动物体内。除另有规定外，试验中应设同批动物空白对照，并根据对照组动物情况对供试品检查结果进行综合评估。

(1)小鼠试验法。除另有规定外，取小鼠5只，注射前每只小鼠称体重，应为18～22g。每只小鼠腹腔注射供试品溶液0.5mL,观察7天，并记录观察期内动物的反应。相关知识-异常毒性检查法的操作流程程度反应无未见任何毒性反应轻轻度症状，但无运动减少、呼吸困难或腹部刺激中腹部刺激、呼吸困难、运动减少、眼睑下垂、腹泻重衰竭、震颤、严重腹部刺激、眼睑下垂、呼吸困难死亡注射后死亡异常毒性试验动物反应观察指标相关知识-异常毒性检查法的操作流程

小鼠腹腔注射时，先抓取小鼠并固定于左手掌心，将注射器自腹中线任一侧0.5cm处以45°刺入，不宜进针过深，4~5s内匀速注射供试品溶液0.5mL,注射结束后，稍作停留再拔出针头，防止药物外漏，最后将小鼠轻轻放回笼中。相关知识-异常毒性检查法的操作流程

(2)豚鼠试验法。除另有规定外，取豚鼠2只，注射前每只豚鼠称体重，应为250~350g。每只豚鼠腹腔注射供试品溶液5.0mL,观察7天，并记录观察期内动物的反应。相关知识-异常毒性检查结果判断

1.非生物制品异常毒性试验

除另有规定外，全部小鼠在给药后48h内不得有死亡；当有死亡时，应另取体重为19～21g的小鼠10只复试，全部小鼠在48h内不得有死亡。

2.生物制品异常毒性试验

(1)小鼠试验法。观察期内，小鼠应全部健存，且无异常反应，到期时每只小鼠体重应增加，判定供试品符合规定。如不符合上述要求，应另取体重为19～21g的小鼠10只复试1次，判定标准同前。

(2)豚鼠试验法。观察期内，豚鼠应全部健存，且无异常反应，到期时每只豚鼠体重应增加，判定供试品符合规定。如不符合上述要求，应另取4只豚鼠复试1次，判定标准同前。任务实施一、制订工作计划序号工作内容完成时间成员负责人1供试用小鼠的挑选

2试验前准备

3供试品的检查

4结果判断根据任务要求，制定合理工作进度计划，并根据小组成员的特点进行分工。任务实施二、试验前准备设备、器材、试剂规格数量用途天平

小鼠称重消毒棉球

止血75%乙醇擦拭消毒无菌注射器注射供试品右旋糖酐20葡萄糖注射液供试品小鼠固定器、支架固定小鼠鼠笼、饲料饲养小鼠任务实施三、试验操作步骤操作内容供试品的制备按照《中国药典》2020年版规定的检验数量进行抽样，至少5份，取无菌注射器吸取供试品0.5mL小鼠的挑选取5只小鼠，用天平称量体重，标记小鼠并记录给药抓取一只小鼠，放入小鼠固定器中，固定，使尾巴暴露在外面，扭转鼠尾，使静脉向上，用75%乙醇擦拭鼠尾注射部位，待尾静脉扩张后，一手捏住鼠尾，一手持注射器，针尖与鼠尾成一定角度(小于30°),刺入静脉。如果注射部位发白且推入药液时有阻力，表明针头未插入静脉内，应重做。如果药液有损失，应另取小鼠注射。注射完毕后，拔出针头，用消毒棉球按住注射部位轻轻按压，防止药液外漏，然后将小鼠放入鼠笼中观察观察、记录提供适量饲料和洁净的水，观察小鼠状态结果判断全部小鼠在给药后48h内不得有死亡；当有死亡时，应另取体重为19~21g的小鼠10只复试，全部小鼠在48h内不得有死亡任务实施四、检查报告检品名称生产厂家检品规格生产批号检品数量包装和外观有效期检查项目异常毒性检查检查依据《中国药典》2020年版第四部通则1141检查方法实验动物来源实验动物数量实验动物性别实验动物平均体重检验结果：小鼠只，死亡只检验结论：检验人

复核人

室温

相对湿度

检验日期：

续表：任务测评考核内容考核标准配分得分小鼠的挑选能按要求正确挑选小鼠5能判断选用的小鼠是否符合要求5试验前准备能判断试验