T-GXAF 0018-2024 水溶肥料中γ-氨基丁酸的测定 高效液相色谱法

ICS65.080GXAFDeterminationofGammaaminobutyricacidinwatersolublefertilizers—High-performanceliquidchromatographymethodIT/GXAF0018—2024本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由广西壮族自治区分析测试研究中心提出。本文件由广西肥料协会归口并宣贯。本文件起草单位：广西壮族自治区分析测试研究中心、南宁汉和生物科技股份有限公司、新胜利工业集团有限公司、广西壮族自治区地质矿产测试研究中心、广西壮族自治区环境保护科学研究院、广西南环检测科技有限公司、平南县公共检验检测中心、广西壮族自治区钦州生态环境监测中心、广西交科集团有限公司、广西高林肥业有限责任公司、广西东亚撒阳肥料有限公司。本文件主要起草人：陈桂鸾、刘程、邓艺萍、班雁华、黄一帆、韦英亮、潘扬昌、张思敏、吴琼婧、韦猛、梁杰、梁鑫佳、刘辉庭、邹源、谢敏蓉、黄孜祺、班书浩、韦树燕、陆云、刘洋、李创、覃柳妹、覃保林、余义发、潘能良、潘巨武、梁承、白雪、胡琼、梁丰收、李福信、韩幸、覃飞妮、农东红、谢基静、王洁、覃榕耐、高信雄、钟华庆、李辉宁、闭仁耀、陈艳。1T/GXAF0018—2024水溶肥料中γ-氨基丁酸的测定高效液相色谱法本文件描述了水溶肥料中γ-氨基丁酸测定的高效液相色谱法。本文件适用于水溶肥料中γ-氨基丁酸含量的测定。本方法检出限为0.02μg/mL，定量限为0.08μg/mL。2规范性引用下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法QB/T5633.7—2022氨基酸、氨基酸盐及其类似物第7部分：γ-氨基丁酸3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1γ-氨基丁酸γ-aminobutyricacid具有生物活性功能的四碳非蛋白质氨基酸，可以促进植物营养生长、提高植物抗逆性、促进植物对中微量元素的吸收。结构见附录A。4原理按照QB/T5633.7—2022规定执行。5试剂与材料除非另有说明,本方法所用试剂分析纯以上试剂,水应符合GB/T6682一级水的规定。5.1γ-氨基丁酸标准品：含量≥99.0％。5.2碳酸氢钠。5.32,4-二硝基氟苯。5.4乙腈：色谱纯。5.5三水合乙酸钠。6仪器和设备6.1配有紫外检测器和数据处理系统的高效液相色谱仪。6.2电子天平：感量为0.0001g。6.3恒温水浴锅。7参考色谱条件7.1色谱柱：C18柱，5μm,4.6mm×250mm(或可以选用性能相当的色谱柱)。2T/GXAF0018—20247.2流动相：乙酸钠溶液-乙腈（80∶20）。7.3检测波长：360nm。7.4流速：1.0mL/min。7.5柱温：30℃。7.6进样量：10μL。8参考色谱条件8.1衍生缓冲溶液的制备称量4.2g碳酸氢钠，将其溶解于水中，并将溶液定容至100mL容量瓶中，混合均匀。溶液需现配即用。8.2衍生试剂溶液的制备2,4-二硝基氟苯乙腈溶液（1移取2,4-二硝基氟苯1.00mL，用乙腈溶解并定容至100mL容量瓶中，混匀。8.3标准溶液的制备称取γ-氨基丁酸标准品0.025g（精确至0.0001g），用水溶解定容至100mL容量瓶中，混匀。移取1.00mL置于10mL容量瓶中，加入0.50mL衍生缓冲溶液（8.1），随后再加入1.00mL衍生试剂溶液（8.2混匀。60℃±2℃水浴恒温1h，冷却至室温后加水定容至10mL，混匀。用0.22μm滤膜过滤，滤液作为标准溶液。8.4试样的制备8.4.1固体样品经多次缩分后取100g，研磨后过0.50mm试验筛（潮湿时先过1.00mm试验筛），混合均匀后置于干燥容器中。8.4.2液体样品经充分摇匀后取200mL，置于干燥容器中。8.5试样溶液的制备称取适量试样约含γ-氨基丁酸0.025g，用水溶解定容至100mL容量瓶中，混匀。称取1.00mL置于10mL容量瓶中，加入0.50mL衍生缓冲溶液（8.1随后再加入1.00mL衍生试剂溶液（8.2混匀。60℃±2℃水浴恒温1h，冷却至室温后加水定容至10mL，混匀。用0.22μm滤膜过滤，滤液作为试样溶液。8.6流动相的制备8.6.1乙酸钠溶液的制备称取6.8g三水合乙酸钠，将其溶解于适量水中，随后稀释至1000mL，混匀，过滤。8.6.2乙酸钠溶液-乙腈（80∶20）量取乙酸钠溶液（8.6.1）800mL和过滤超声后的乙腈200mL，混匀。9测定将标准溶液（8.3）及试样溶液（8.5）分别注入高效液相色谱仪中，并记录下各自的色谱图。根据色谱峰的峰面积，以外标法计算出相应的γ-氨基丁酸的浓度。3T/GXAF0018—202410结果计算γ-氨基丁酸的校正因子f，按照公式（1）进行计算：式中：m标——标准品称样质量，单位为克（gP——标准品的纯度，%;D标——标准品的稀释倍数；A标——标准品溶液的峰面积。γ-氨基丁酸含量W以百分比质量分数的形式表示，按照公式（2）进行计算：式中：f——校正因子；m样——试样的称样质量，单位为克（gA样——试样溶液的峰面积；D样——试样的稀释倍数。计算结果保留三位有效数字。11精密度11.1重复性在重复测试条件下，两次独立测定结果的绝对差值与算术平均值之比（以百分比表示）应符合表1的规定。表1实验室内重复性要求≤0.1%10%>0.1%5%11.2再现性在再现性测试条件下，两次独立测定结果的绝对差值与算术平均值之比（以百分比表示）应符合表表2实验室间再现性要求≤0.1%12%>0.1%