蔬菜中甲基对硫磷测定方法酶联免疫法

1蔬菜中甲基对硫磷测定方法酶联免疫法本标准规定了蔬菜中甲基对硫磷农药的酶联免疫快速检测方法的原理、试剂与材料、试样制备、测定、结果判定与表述、检测限和特异性。本标准适用于农产品中甲基对硫磷农药残留的在线筛查和快速监测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而构成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误表的内容）或修改版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法GB2763-2019食品安全国家标准食品中农药最大残留限量3原理采用间接竞争ELISA方法，在微孔板上包被甲基对硫磷包被抗原，检测样品中残留的甲基对硫磷农药与微孔板上的包被抗原竞争甲基对硫磷抗体，加入酶标羊抗鼠二抗后，显色剂显色，终止液终止反应。用酶标仪测定450nm处吸光度，吸光值与检测样品中的甲基对硫磷残留量成负相关。4试剂与材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯和GB/T6682中规定的三级水。酶联免疫检测试剂盒：甲基对硫磷酶联免疫检测试剂盒，试剂盒中包括阳性参考品、阴性参考品、甲醇、样品处理液、检测液、甲基对硫磷抗体溶液、酶标二抗溶液、底物溶液、终止溶液和包被有甲基对硫磷包被源的可拆卸96孔板，96孔板使用铝箔袋真空干燥密封包装。5试样制备称取10g±0.1g大米样品，粉碎后，加入1mL甲醇，静置15min。加入5mL样品处理液，充分混匀后，利用滤纸进行固液分离。滤液转移至10mL容量瓶并定容至10mL（样品处理液冲洗滤纸中的样品）。样品滤液由检测液进行2.5倍稀释。6测定2撕开铝箔袋，根据检测样品数取出一定量的检测微孔条。用检测液将抗体溶液100倍稀释，并与样品处理液等体积混合后，按照50uL/孔加样，同时设置两孔阴性参考品、两孔阳性参考品对照，并设一孔空白对照。37℃孵育45min，并洗板。用检测液将酶标二抗溶液100倍稀释，按照50uL/孔加样。37℃孵育30min，并洗板。按照50uL/孔加样，加入底物溶液。按照25uL/孔加样，加入终止溶液，并在5min之内测定OD450值。7结果判定与表述对照阳性参考品OD450平均值、阴性参考品OD450平均值和空白孔的结果，根据竞争免疫法的原理及微孔板OD450值，按照如下原则进行结果判定：（a）无效：阳性参考品显色OD450平均值≤0.8或阴性参考品OD450平均值≥0.1；（b）阳性：样品OD450值与阳性参考品显色OD450平均值的比值≥0.2；（c）阴性：样品OD450值与阳性参考品显色OD450平均值的比值＜0.2。7.1在试纸条的质控区未出现色带，判定为无效；7.2仅在试纸条质控区出现一条红线，判定为阳性；7.3在试纸条检测区及质控区各出现一条红线，判定为阴性；7.4在试纸条质控区出现一条红线，检测区现一条糊的阴影线，判定为临界值。出现临界值时，需重复检测两次以上。8检测限和特异性蔬菜中甲基对硫磷的检测限为0.02mg/kg（依据为GB2763-2019