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职业教育医学生物技术专业教学资源库动物克隆胚胎的构建职业教育医学生物技术专业教学资源库1.1供体（donor)细胞的获得

供体细胞的获得主要有2种途径。一条途径是直接从新鲜组织消化分离，不经过体外培养直接用于体细胞克隆。多用于卵丘细胞等易于分离的细胞。其优点是操作迅速、简便，细胞不易发生遗传变异；缺点是不能进行细胞周期同期化和基因的改造。职业教育医学生物技术专业教学资源库1.1供体（donor)细胞的获得

另一条途径是通过一定的方法建立体细胞的原代细胞系，经过体外培养后用于体细胞克隆。此种方法多用在成纤维细胞等易于体外培养的细胞。其优点是在体外培养过程中，可以进行基因改造并可以进行细胞周期的同期化处理，还可以获得很多遗传背景相同的克隆动物；缺点是体外培养可能影响克隆胚胎的重编程能力，从而影响克隆效率。职业教育医学生物技术专业教学资源库1.2细胞周期同期化处理

体细胞克隆是两个不同来源的细胞之间核质的重新组合的过程，因此，核质的协调是保证克隆效率的重要条件。细胞处于不同的细胞周期具有不同的细胞核结构和胞内蛋白组分。职业教育医学生物技术专业教学资源库1.2细胞周期同期化处理用于细胞核移植的供体细胞（核）有3大类：早期胎细胞、胚胎干细胞、胚胎成纤维细胞（严格来讲胚胎成纤维细胞也是体细胞）和体细胞，它们可来自活休或体外培养的细胞。移植前采用机械吹打或酶消化分散成单个细胞，培养、处理，使核供体细胞周期与受体细胞周期相协调和同步化，然后获取细胞核（可含少量细胞质）为供体。职业教育医学生物技术专业教学资源库1.3

核移植（nucleartransplantation)

利用显微操作技术将供体细胞移植到去核的卵母细胞并将细胞核融入到卵母细胞胞质中是体细胞克隆中最为精细的一步。此操作通常需要借助显微操作仪，对操作技能要求比较高。此操作通常有2种方法，即间接细胞融合法和直接注入法。职业教育医学生物技术专业教学资源库1.3.1

间接细胞融合法

间接细胞融合法就是将供体细胞注射到卵周隙中，通过细胞融合使供体细胞核进入到受体胞质中。该技术发源于20世纪70年代，最初是使用灭活的仙台病毒介导细胞质膜的融合，而后逐渐被毒性较低的聚乙烯乙二醇代替。与化学诱导膜融合同时发展起来的电融合技术是目前最为常用的方法。电融合效率高，操作简便，但其受到的影响因素很多，如温度、电脉冲参数、融合液的渗透压、离子种类和浓度等。职业教育医学生物技术专业教学资源库1.3.2

直接注入法

由于小鼠卵胞质膜较脆、抗电击能力差，而且小鼠体细胞较小，因此电融合率较低；再者，小鼠胚胎基因组激活发生在二细胞期，甚至在受精卵后期就开始表达，留给移入核的重编程时间短。因此Wakayama等利用Piezo驱动的注射

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