生物化学分析实验室技巧训练题

综合试卷第=PAGE1*2-11页（共=NUMPAGES1*22页） 综合试卷第=PAGE1*22页（共=NUMPAGES1*22页）PAGE①姓名所在地区姓名所在地区身份证号密封线1.请首先在试卷的标封处填写您的姓名，身份证号和所在地区名称。2.请仔细阅读各种题目的回答要求，在规定的位置填写您的答案。3.不要在试卷上乱涂乱画，不要在标封区内填写无关内容。一、选择题1.下列哪种酶在生物化学分析中常用作底物？

a.胰蛋白酶

b.磷酸酯酶

c.肝素酶

d.糖酵解酶

2.生物化学分析中常用的分离技术不包括以下哪一项？

a.气相色谱法

b.液相色谱法

c.离子交换色谱法

d.电泳法

3.下列哪种化合物是生物化学分析中常用的标准品？

a.碘化钾

b.氯化钠

c.硫酸铜

d.氢氧化钠

4.生物化学分析中，用于测定蛋白质含量的方法不包括以下哪一项？

a.伯纳姆比色法

b.凯氏定氮法

c.萨巴蒂尔法

d.酶比色法

5.下列哪种物质是生物化学分析中常用的缓冲溶液？

a.氢氧化钠

b.氯化钠

c.磷酸盐缓冲液

d.碳酸氢钠

6.生物化学分析中，用于测定DNA含量的方法不包括以下哪一项？

a.碘化物法

b.荧光法

c.高光谱法

d.比色法

7.下列哪种物质在生物化学分析中用于抑制酶活性？

a.硫酸铵

b.氢氧化钠

c.氯化钠

d.溴化物

8.生物化学分析中，用于测定酶活性的方法不包括以下哪一项？

a.酶动力学法

b.酶比色法

c.离子交换法

d.高效液相色谱法

答案及解题思路：

1.答案：b.磷酸酯酶

解题思路：磷酸酯酶在生物化学分析中常用作底物，因为它的活性可以被各种磷酸酯化合物抑制，便于进行酶活性研究。

2.答案：d.电泳法

解题思路：电泳法通常用于分离DNA和蛋白质，而不是用于生物化学分析中的分离技术。

3.答案：c.硫酸铜

解题思路：硫酸铜常用于生物化学分析中作为标准品，因为它的颜色和化学性质易于识别和量化。

4.答案：c.萨巴蒂尔法

解题思路：萨巴蒂尔法不是测定蛋白质含量的常用方法，伯纳姆比色法、凯氏定氮法和酶比色法是更常用的方法。

5.答案：c.磷酸盐缓冲液

解题思路：磷酸盐缓冲液是生物化学分析中常用的缓冲溶液，因为它在生理pH范围内具有较高的缓冲能力。

6.答案：d.比色法

解题思路：碘化物法、荧光法和高效光谱法都是测定DNA含量的常用方法，而比色法不常用于此目的。

7.答案：d.溴化物

解题思路：溴化物在生物化学分析中用于抑制酶活性，因为它可以与酶的活性位点结合。

8.答案：c.离子交换法

解题思路：酶动力学法、酶比色法和高效液相色谱法都是测定酶活性的方法，而离子交换法主要用于分离和纯化蛋白质。二、填空题1.生物化学分析中常用的分离技术包括电泳、离心、层析等。

解题思路：在生物化学分析中，分离技术是基础，电泳、离心和层析是最常用的方法，分别适用于不同类型和大小的分子分离。

2.蛋白质含量的测定方法有Lowry法、Bradford法、Biuret法等。

解题思路：蛋白质含量的测定是生物化学中的重要环节，Lowry法、Bradford法和Biuret法是三种经典的蛋白质定量方法，它们基于不同的原理，能够满足不同的实验需求。

3.生物化学分析中常用的缓冲溶液有TrisHCl、磷酸盐缓冲液、Tris醋酸盐缓冲液等。

解题思路：缓冲溶液在生物化学实验中用于维持溶液的pH稳定，TrisHCl、磷酸盐缓冲液和Tris醋酸盐缓冲液都是常用的缓冲体系，适用于不同的实验条件和pH范围。

4.酶活性的测定方法有底物法、产物法和抑制法等。

解题思路：酶活性是酶学研究的关键指标，底物法、产物法和抑制法是测定酶活性的三种主要方法，每种方法都有其特定的操作步骤和原理。

5.DNA含量的测定方法有比色法、荧光定量PCR、Southern印迹等。

解题思路：DNA含量的测定是分子生物学研究的基础，比色法、荧光定量PCR和Southern印迹是三种常用的DNA含量测定方法，分别适用于不同的实验目的和条件。

答案及解题思路：

答案：

1.电泳、离心、层析

2.Lowry法、Bradford法、Biuret法

3.TrisHCl、磷酸盐缓冲液、Tris醋酸盐缓冲液

4.底物法、产物法、抑制法

5.比色法、荧光定量PCR、Southern印迹

解题思路：

针对每一种分离技术，了解其原理和适用范围。

对蛋白质含量的测定方法，掌握不同方法的操作步骤和原理。

对于缓冲溶液，理解不同缓冲体系的pH范围和适用性。

酶活性的测定，了解不同方法的原理和如何操作。

DNA含量的测定，熟悉不同方法的原理和实际应用。三、判断题1.生物化学分析中，常用的缓冲溶液pH值应在7.0左右。（×）

解题思路：在生物化学分析中，常用的缓冲溶液pH值并不一定在7.0左右。缓冲溶液的pH值取决于所选用的缓冲系统，例如磷酸盐缓冲液、TrisHCl缓冲液等，它们的pH值可以根据实验需求设定在特定的范围内，通常不是7.0。

2.生物化学分析中，所有分离技术都可以用于蛋白质分离。（×）

解题思路：并非所有的分离技术都适用于蛋白质分离。虽然有许多分离技术可以用来分离蛋白质，如离子交换色谱、凝胶过滤色谱、亲和色谱等，但某些技术如离心法主要用于分离细胞组分或大分子复合物，而非蛋白质。

3.酶比色法是测定酶活性的最常用方法。（×）

解题思路：虽然酶比色法是测定酶活性的一种常用方法，但它并不是唯一或最常用的。还有其他方法，如荧光法、电化学法、滴定法等，根据不同的实验需求和酶的特性选择最合适的方法。

4.离子交换色谱法是分离DNA的有效方法。（×）

解题思路：离子交换色谱法主要用于蛋白质和核酸的分离纯化，特别是蛋白质的分离。尽管它可以用于DNA的分离，但更常用的DNA分离方法是琼脂糖凝胶电泳和柱层析技术。

5.生物化学分析中，所有化合物都可以作为标准品。（×）

解题思路：并非所有化合物都适合作为标准品。标准品通常需要具有高纯度、稳定性好、易于储存和测量等特性。一些化合物可能具有不稳定性、易分解或难以制备高纯度，因此不适合作为标准品。

：四、简答题1.简述生物化学分析中常用的分离技术及其原理。

答案：

凝胶过滤：基于分子大小差异的分离技术，小分子物质可以通过滤膜，而大分子物质则被截留在滤膜上。

离子交换层析：基于带电基团吸引与交换原理，根据带电性质不同进行分离。

电泳：利用分子在电场中带电性质和电荷大小差异，进行分离。

柱层析：根据样品组分在固定相和流动相之间分配系数的不同，进行分离。

解题思路：

此题考查考生对生物化学分析中分离技术的理解，需要考生对各种分离技术的原理和应用有所了解。

2.简述生物化学分析中常用的酶活性测定方法及其原理。

答案：

底物浓度法：根据反应速率与底物浓度成正比，通过测定底物浓度变化来确定酶活性。

产物形成法：根据反应产物浓度变化，通过检测产物速率来确定酶活性。

抑制剂法：加入酶的抑制剂，通过观察反应速率变化来确定酶活性。

解题思路：

此题考查考生对生物化学分析中酶活性测定方法的了解，需要考生掌握不同测定方法的原理和应用。

3.简述生物化学分析中常用的DNA含量测定方法及其原理。

答案：

光吸收法：利用DNA对紫外光的吸收特性，通过测定吸光度来确定DNA含量。

遗传分析仪法：通过测定DNA电泳迁移率，结合标准曲线计算DNA含量。

定量PCR法：利用PCR技术扩增DNA片段，通过测定扩增产物浓度来确定DNA含量。

解题思路：

此题考查考生对生物化学分析中DNA含量测定方法的了解，需要考生熟悉不同测定方法的原理和应用。

4.简述生物化学分析中常用的蛋白质含量测定方法及其原理。

答案：

考马斯亮蓝法：利用蛋白质与考马斯亮蓝的亲和性，通过测定溶液颜色变化来确定蛋白质含量。

紫外光吸收法：根据蛋白质对紫外光的吸收特性，通过测定吸光度来确定蛋白质含量。

荧光光谱法：利用蛋白质荧光特性，通过测定荧光强度来确定蛋白质含量。

解题思路：

此题考查考生对生物化学分析中蛋白质含量测定方法的了解，需要考生掌握不同测定方法的原理和应用。

5.简述生物化学分析中常用的缓冲溶液及其作用。

答案：

醋酸醋酸钠缓冲溶液：用于维持溶液pH稳定。

TrisHCl缓冲溶液：用于维持溶液pH稳定。

磷酸盐缓冲溶液：用于维持溶液pH稳定，同时具有离子交换作用。

解题思路：

此题考查考生对生物化学分析中缓冲溶液的了解，需要考生熟悉常用缓冲溶液的组成和作用。五、计算题1.某溶液中蛋白质浓度为0.1g/L，计算其在比色法中的吸光度值（假设比色法标准曲线的斜率为0.001）。

解题思路：根据比色法原理，吸光度值（A）与溶液中蛋白质浓度（C）成正比，即A=ɛlc，其中ɛ为摩尔吸光系数，l为光程，c为溶液浓度。本题中已知斜率即为ɛl的值，通过计算可以直接得到吸光度值。

2.某酶在37℃、pH7.0条件下的最大酶活性为0.2U/mL，求在相同条件下，该酶的米氏常数（Km）和最大反应速率（Vmax）。

解题思路：米氏常数（Km）是酶促反应速率达到最大值一半时的底物浓度，而最大反应速率（Vmax）是酶在饱和底物浓度下的反应速率。根据题目中给出的最大酶活性，可以假设此值为Vmax，然后根据酶动力学方程计算Km。

3.某DNA溶液浓度为0.5μg/μL，计算其在荧光法中的荧光强度（假设荧光法标准曲线的斜率为0.1）。

解题思路：荧光强度与DNA浓度成正比，即荧光强度=斜率×DNA浓度。根据题目中给出的斜率和DNA浓度，可以直接计算出荧光强度。

4.某蛋白质溶液在凯氏定氮法中的氮含量为0.02g，计算其在比色法中的吸光度值（假设比色法标准曲线的斜率为0.02）。

解题思路：首先需要知道蛋白质中氮的质量百分比，然后根据氮含量计算出蛋白质的总质量，再通过比色法标准曲线的斜率计算出吸光度值。

5.某缓冲溶液的pH值为7.4，求该缓冲溶液的缓冲容量。

解题思路：缓冲容量是缓冲溶液抵抗pH变化的能力，通常用HendersonHasselbalch方程计算：pH=pKalog([A]/[HA])，其中pKa是缓冲对的酸解离常数。通过查找或已知缓冲溶液的pKa值，可以计算出缓冲容量。

答案及解题思路：

1.吸光度值A=0.001×0.1=0.0001

解题思路：使用公式A=ɛlc，其中ɛl为斜率0.001，c为浓度0.1g/L。

2.米氏常数Km和最大反应速率Vmax

解题思路：Km=[S]×Vmax/(VmaxV0)，V0为酶促反应速率，此处假设V0为0，因此Km=[S]×Vmax。

答案：Km=0.2U/mL，Vmax=0.2U/mL。

3.荧光强度=0.