《动物实验技术》课件-任务3：实验动物安死术

动物实验技术实验动物安死术与人类“替难者”告别实验动物是人类的“替难者”，它们为人类生命健康医疗、科技文明进步做出了卓越的贡献。安乐死(euthanasia)词源于古希腊语，eu意思是“好的”，thanatos意思是“死亡”。安乐死：指公众认可的、以人道主义的方法处死实验动物的过程，即采用一种降低或消除痛苦和焦虑的方法来结束动物的生命。课程目标深度理解实验动物安乐死与人道终点评价的重要意义，了解人道终止时机判断指标。同时了解实验动物常用安死术，并重点掌握大/小鼠脊椎脱臼、二氧化碳吸入与过量麻醉处死法的操作要领、注意事项重要应用。珍爱生命、敬畏生命，能准确判断人道终止时机，根据具体动物种类、实验需求，选择合理、合适的处死方式。一、安死术7.4.5安死术7.4.5.1处死动物是对动物福利的最终剥夺，对必须处死的动物应实施安死术。7.4.5.2应有明确的政策规定对动物实施安死术的时机、方案和方式，应经过IACUC的审核。7.4.5.3只要可行，应采用适宜的国际公认的安死术。7.4.5.4在实施安死术时，应使动物在未感到恐惧和紧迫感的状态下迅速失去意识，并且使动物历经最少表情变化、声音变化和身体挣扎，令旁观者容易接受以及对操作人员安全。应考虑药品的经济性和被滥用的风险。如果动物的组织还将用于实验，应选择适宜于动物特征和不影响后续实验结果的安死术。7.4.5.5应保持实施安死术操作的区域安静、整洁和相对隐蔽，不对其他动物产生影响。一、安死术二、人道终点思考：什么时候该对实验动物实施安死术呢？二、人道终点人道终点：考虑人道对待动物的要求和实验要求，合理终止动物用于实验的时机二、人道终点大家来思考人道终止时机设定的目的是什么？动物实验人道终点的确定是科学目的与动物福利相权衡的结果给予实验动物人道主义关爱，体现动物实验伦理、福利及“3R”原则；优化动物实验策略；帮助判断安乐死时机，予以动物合理的死亡节点，可减少实验动物临终疼痛和应激。什么时候考虑人道终点？当研究的科学目标已达到，实验没必要继续进行下去；当动物遭受意外的痛苦；实验开始前预料到动物会遭受这种痛苦，但实际中遭受的痛苦比预料得更严重；动物遭受的疼痛/痛苦由实验本身引起，并在实验开始前就预料到。“达到研究目的”不是实施人道终点的必要条件，当动物遭受的疼痛或痛苦达到预定级别，即使实验尚未达到预期目标，也应考虑提前结束实验。二、人道终点大家来思考人道终止时机设定的目的是什么？动物实验人道终点的确定是科学目的与动物福利相权衡的结果给予实验动物人道主义关爱，体现动物实验伦理、福利及“3R”原则；优化动物实验策略；帮助判断安乐死时机，予以动物合理的死亡节点，可减少实验动物临终疼痛和应激。什么时候考虑人道终点？当研究的科学目标已达到，实验没必要继续进行下去；“达到研究目的”不是实施人道终点的必要条件，当动物遭受的疼痛或痛苦达到预定级别，即使实验尚未达到预期目标，也应考虑提前结束实验。当动物遭受意外的痛苦；实验开始前预料到动物会遭受这种痛苦，但实际中遭受的痛苦比预料得更严重；动物遭受的疼痛/痛苦由实验本身引起，并在实验开始前就预料到。二、人道终点人道终点评价指标·通用指标·特定指标通用指标指标判定标准体重下降快速失去体重失去体重的10-20%生长期动物持续无增重长期无增重未检测体重但动物呈现恶病质及持续性肌肉消耗时肌肉持续性消耗、消瘦丧失食欲小型啮齿类动物完全丧失食欲或食欲不佳食欲低于正常量之50%，丧失食欲达24小时；食欲不佳达3天及以上大动物完全丧失食欲或食欲不佳食欲低于正常量之50%，丧失食欲达5天；食欲不佳达7天及以上虚弱无法自行摄食或饮水无自主饮食长期无法站立或极度勉强才可站立达24小时（需先排除是否为麻醉后动物苏醒期，再评估是否因疾病或实验等因素导致动物虚弱）身体器官感染呈现物理性指标及异常的血检值对药物治疗无良好反应且持续演变为全身性疾病垂死/濒死动物在没有麻醉或镇静的状态下，表现精神抑郁伴随体温过低明显精神抑郁，对呼喊驱赶无反应或具备反应但无法自由活动，体温持续低于37℃器官系统衰竭出现严重的器官系统功能障碍的临床症状且治疗无效经兽医（资质人员）判断器官系统衰竭、预后不佳其他持续性的自残行为；严重影响动物进食饮水病症、传染性病末期不愈合的伤口；持续性低温、明显的器官及五官功能损伤动物遭受窘迫及疼痛时的行为及生理现象特定指标指标判定标准肿瘤肿瘤生长体积过大生长超过动物原体重的10%，平均肿瘤直径在小鼠超过15mm、在大鼠超过30mm肿瘤破溃肿瘤转移或快速增长至溃烂，造成感染或坏死等呼吸道系统严重呼吸道感染呼吸困难、发绀循环系统严重贫血、无法控制的出血红细胞比积（PCV）低于正常值的15%黄疸症状消化道系统疾病或实验造成消化道问题严重持续性呕吐或下痢、阻塞、畅套迭、腹膜炎、腹围扩大等泌尿生殖系统泌尿生殖系统疾病肾衰竭、腹腔积水等肌肉骨骼系统肌肉损伤、骨骼受损等四肢无法站立行走或自主运动神经系统异常的中枢神经反应抽搐、颤抖、瘫痪、歪头等，无法有效控制疼痛评价指标包括通用指标和特定研究的指标；动物实验评估人员根据实验特点，选择合适的指标，以充分反映动物实验过程中所承受的疼痛、痛苦、疾病、焦虑等指标，来判断人道终点。三、大/小鼠常见处死方法颈椎脱臼法颈椎脱臼就是用外力将动物颈椎脱臼，使脊髓与脑髓断开，进而导致大小鼠死亡；能使动物快速失去意识，执行时间短，无化学药物影响机体组织优点可能造成执行者的心理负担。如操作手法不熟练，可无法使动物迅速死亡，反而对动物造成极大的痛苦缺点由于其能使实验动物很快丧失意识，具有减少痛苦、容易操作、动物内脏不受损害等优点，是大/小鼠等啮齿类动物常用安乐死方法。

三、大/小鼠常见处死方法过量麻醉处死法，顾名思义，当实验动物摄入大过量麻醉剂时的一种安乐死方法。过量麻醉处死法主要分为注射麻醉与吸入麻醉。三、大/小鼠常见处死方法过量麻醉处死法通过注射过量的麻醉剂，可使动物迅速死亡；常选用巴比妥类及其衍生物的药物对动物执行安乐死；适用于啮齿类、家兔、犬等多种实验动物，是非常可靠的动物安乐死方法。此外也可采用异氟烷或七氟烷等气体麻醉剂进行过量麻醉处死。三、大/小鼠常见处死方法二氧化碳吸入处死法准备材料：待安乐死的动物、安乐死箱、有通气孔的密闭式上盖、二氧化碳（CO2）钢瓶二氧化碳吸入处死法：是一种常用的实验室动物安乐死方法，其原理是利用二氧化碳浓度过高导致动物窒息，最终导致死亡。该方法操作简单、成本低廉、对实验结果影响小，因此被广泛应用于实验室动物的安乐死操作中。·二氧化碳处死法操作流程放入动物，以每分钟替换安乐死箱容积的10-30%的速度灌注CO2于箱内，确定动物不动、不呼吸、瞳孔放大；（注意：放入动物前，不可先灌注CO2到安乐死箱内；）关闭CO2，观察2min以上，确定动物死亡三、大/小鼠常见处死方法急性失血法对于已经失去意识的实验动物，可配合放血方法可确保动物完全死亡；由于大量失血，动物会表现出焦虑和痛苦，因此放血不可作为安乐死的单一方法；我们再对大/小鼠采血时，讲到一个非常重要的方法，即下腔静脉采血法，我们再大量采集动物血液的同时，实验动物因失血过多而死亡。此外也可采用腹主动脉放血的方式对大/小鼠实施安乐死。大/小鼠可采用颈动脉、腹主动脉放血方式进行处死此外我们还可以针对不同种类的实验动物实施特殊安死术，如家兔可采用空气栓塞法、击大法等，同学们应根据具体实验动物种类、实验要求、实验条件选择适宜的安死术。四、执行安乐死前后的注意事项动物的应激性叫声和惊恐行为、或令动物惊恐的气味等，都会引起动物的焦虑、不安和应激，这些因素会影响存活动物的身心健康和福利，干扰实验结果。因此，动物安乐死时应在远离存活动物的非公开场所执行。执行安乐死所用的药物与仪器设备，应随时保持最佳的使用状态。依据动物品种、体重及数量，事先准备好足量的药物与设备仪器，并定期维护。动物安乐死时被血液、粪尿污染的器具应及时清洗消毒，一面造成其他安乐死前动物的焦虑。避免造成存活动物的恐惧安乐死设备四、执行安乐死前后的注意事项所有动物的安乐死，最终步骤须确认动物是否已经完全死亡。应检查动物的心跳是否完全停止、瞳孔是否放大。执行动物安乐死及尸体处理的人员必须了解该动物是否有人畜共患病的潜在危害、是否曾进行过放射性物质或有毒化学物质试验，必要时应有适当的人员防护措施（personalprotectiveequipment,PPE）。确认动物死亡动物尸体处理动物安乐死首要考虑解除动物临死前的痛苦与焦虑，因此对于精神亢奋或难以控制的动物，应先给予相应的镇静剂或止疼药后再对其执行安乐死。辅助安乐死的方法四、执行安乐死前后的注意事项动物的应激性叫声和惊恐行为、或令动物惊恐的气味等，都会引起动物的焦虑、不安和应激，这些因素会影响存活动物的身心健康和福利，干扰实验结果。因此，动物安乐死时应在远离存活动物的非公开场所执行。执行安乐死所用