2024-2025学年人教版高二生物选择性必修3同步练习：微生物的基本培养技术

第2节微生物的培养技术及应用

第1课时微生物的基本培养技术

课标内容(1)概述培养基的配制方法和微生物纯培养的基本操作要求。(2)掌握无

菌技术的操作。(3)掌握酵母菌纯培养的方法及步骤。

一♦自主梳理♦一

知识点1培养基的配制

1.培养基的概念、用途和类型

年、人们按照微生物对营养物质的不同需求,

用空k配制出供其生长繁殖的营养基质

加1嗪、用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积

累其代谢物病彖—包上生生

........*冶，不能用普威塔,基来塔养

I按物/雌培养基不能梃仔

理性｛[(加入凝固剂，如睡4能量白磐

质分I固体培养基为物庆

2.培养基的配方

(1)主要营养物质：水、碳遮、氮源、无机盐。

(2)其他条件：pH、特殊营养物质和氧气。如下表:

厌氧微

微生物乳酸杆菌霉菌细菌

生物

特殊pH调至中性或

添加维生素pH调至酸性无氧

需求弱碱性

知识点2无菌技术

1.获得纯净的微生物培养物的关键：防止杂菌污染。

2.消毒和灭菌

:消毒；：灭菌；

VV

较为温和的物理、

强烈的理化方法

化学或生物等方法强度I

杀死物体表面或内杀死物体内外

部一部分微生物【程度1所有微生物

一般不能杀灭能杀灭

微生物培养的器

操作的空间、操作1适用

1皿、接种用具和

者衣着和双手对象

1培养基等

湿热灭菌、

煮沸消毒法、巴氏常用

1干热灭菌、

消毒法等一、，方法」

▼------灼烧灭:菌等

还有化学药物消毒法、箸外保通寺法—

3.注意事项

(1)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。

⑵为了避免周围环境中微生物的污染，接下来的许多操作都应在超净工作台上并

在酒精灯火焰附近进行。

知识点3微生物的纯培养

1.纯培养的概念

在微生物学中，将接种于培养基内，

［培养物卜在合适条件下形成的含特定种类微生

物的群体

I-----------

［纯培养物卜由单一个体繁殖所获得的微生物群体

［纯.养卜获得纯培养物的过程

2.纯培养的过程(以酵母菌为例)

包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤o

(1)制备培养基

「配制、

拼养基,称取一煮沸一过滤一加琼脂一定容

培养基:高压蒸汽灭菌

cikx培养皿:干热灭菌

电三度)一如下图

通日均送入苗，防止粗D的微■生物污求培条塞

①拔出锥形

②将瓶

瓶的棉塞

口迅速

在酒精町通过火

火焰24r'、\炮

①②

-------3：-

③用拇指和食\

指将培养皿打

开一条稍大于④等待培养基冷却

瓶口的缝隙,凝固后，将培养皿

将培养基(1。~鳗士放置J

20mL)倒入培养皿,立即盖防止泠淤水■滴落以培

上皿盖为基上引疾污策

(2)平板划线法接种和分离酵母菌

__通过接种环在固体培养基表面连续划线

篇度A的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到

小、培养基的表面。经数次划线后培养，可

质自以分离得到单菌落

I步骤＞

①将接种环放②在火焰旁冷却接③将试

在火焰上灼烧,种环。同时，拔出管口通

直到接种环的装有酵母菌培养液过火焰

金属丝烧红的试管的棉塞

注意4、字充侬培枭界表面

⑥在火焰附近将培养皿打⑤将试管

④在火焰

开一条缝隙，用接种环在口通过火

培养基表面迅速划三至焰，并塞附近用接

五条平行线，盖上皿盖上棉塞种环蘸取

一环菌液

以免接种环温度太高，余见苗种V

⑦灼烧接种环，待其途却后,从第一：

■谕次划线的末端开始作第二次划线。重：

谈夕复以上操作，作第三、四、五次划线i

“注意不累将最启一次的训保与第一次的对保相连：

(3)培养酵母菌

将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右的恒温培养箱中培养

24〜48ho

国自查自纠,

(1)在固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基。(X)

提示：固体培养基中添加了凝固剂，加少量水不能制成液体培养基。

(2)实验室培养硝化细菌时，培养基无须加入有机碳源。(♦)

提示：硝化细菌为自养型生物，可以二氧化碳为碳源合成有机物。

(3)灭菌相比消毒对微生物的杀灭更彻底(J)

(4)只要是没有生物活性的材料均可进行高压蒸汽灭菌(X)

提示：没有生物活性的材料不一定要用高压蒸汽灭菌法灭菌，如玻璃器皿可用干

热灭菌法灭菌。

(5)倒平板时，将灭过菌的培养皿放在酒精灯火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基

的锥形瓶，左手拔出棉塞。(J)

(6)进行平板划线操作时，第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生

物污染培养物。(J)

-----♦合作探究♦-----

一、培养基的配制

【情境探疑】

1.下表是某培养基的配方，分析回答：

材料牛肉膏蛋白陈NaCl琼脂水

用量5g10g5g20g定容至1000mL

(1)根据培养基的物理性质，该培养基属于哪类培养基，理由是什么？

提示：固体培养基，因为该培养基的配方中含有凝固剂琼脂。

⑵该培养基中提供碳源和氮源的物质是什么？属于有机物还是无机物？为什么

培养基需要氮源？

提示：该培养基中牛肉膏和蛋白腺提供碳源和氮源。二者均属于有机物。培养基

中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质必需的。

⑶该培养基培养的微生物同化作用类型是理由是什么？

提示：异养型微生物该微生物的碳源和氮源是有机物。

2.培养微生物时，培养基中是否必须有碳源和氮源？

提示：不一定。例如，培养自养型微生物时，一般不需要添加碳源，微生物可以

利用空气中的二氧化碳；培养固氮微生物时，一般不需要添加氮源，微生物可以

利用空气中的氮气。

3.下表是某微生物培养基的成分，请分析该培养基可用来培养哪种微生物？若除

去①，此培养基可用来培养圆褐固氮菌吗？

编号①②③④⑤

(NH4)2SO4

成分KH2P。4FeSO4CaChH2O

含量0.4g4.0g0.5g0.5g100mL

提示：此培养基可用来培养自养型微生物。若除去①圆褐固氮菌虽可以固氮，但

其同化作用类型为异养型，培养基中必须提供含碳有机物，所以该培养基不能用

来培养圆褐固氮菌。

0归纳提升

1.几种微生物的营养和能量来源

（微生物；:.碳源;；氮源::能源：

VVVV

|蓝细菌〉

CO2NH：、NO;等光能

1

CO2NH3NH‘3的氧化

''->®氮微生物

|根瘤菌糖类等有机物N2有机物

显5»饕后鼠蛋白质等有机物

1---------1质等有机物

2.巧记培养基的种类和作用

按物理状态分类

:种类：（用途］

、____,

v▼V

不加凝固剂I液体培养基）工业生产

加凝固剂半固体观察微生物的运动

（如琼脂）培养基分类鉴定

微生物的分离、鉴

加凝固剂

［固体培养基）定，活菌计数，菌

（如琼脂）

种保藏等

【典例应用】

例1下列有关培养基的叙述，错误的是（）

A.微生物的培养都需要提供水、有机碳源、有机氮源、无机盐，缺一不可

B.微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的菌落

C.在培养细菌时，需要将培养基调至中性或弱碱性

D.培养基既能培养细菌，也能培养真菌

答案A

解析并非所有微生物的培养基中都必须含有碳源、氮源，培养自养型微生物不

需要有机碳源，固氮微生物不需要有机氮源，A错误。

例2（2023•江苏徐州高二检测）不同的微生物对营养物质的需求各不相同。下列有

关一种以CO2为唯一碳源的自养型微生物所需营养的描述中，错误的是（）

A.氮源物质为该微生物提供必要的氮元素

B.碳源物质也是该微生物的能源物质

C.无机盐是该微生物不可缺少的营养物质

D.水是该微生物的营养要素之一

答案B

解析微生物生长繁殖需要氮源，氮源物质为该微生物提供必要的氮元素，A正

确；该碳源物质是CO2,属于无机物，不能作为微生物的能源物质，B错误；无

机盐是微生物生长繁殖不可缺少的营养物质，C正确；生物的生命活动离不开水，

水是该微生物的营养要素之一，D正确。

二、无菌技术

【情境探疑】

1.常用酒精擦拭双手是预防新冠感染的日常防护措施之一，这是消毒还是灭菌？

体积分数为70%和95%的酒精，哪种效果更好？为什么？

提示：酒精擦拭属于消毒。酒精消毒时，70%的酒精杀菌效果最好。浓度过高，

使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜，酒精分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌

能力减弱。

2.对培养基、培养皿、接种环、实验者的双手、空气和牛奶常采用的灭菌或消毒

方法分别是什么？

提示：分别为高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌、化学药物消毒、紫外线消毒、

巴氏消毒法。

3.消毒和灭菌的原理是什么？能否杀死所有的微生物？

提示：消毒和灭菌都是使微生物的蛋白质变性，借此杀死微生物。灭菌可杀死处

理材料中的全部微生物（包括芽抱和抱子），而消毒仅杀死部分微生物（一般不包括

芽抱和抱子）。

国归纳提升

消毒和灭菌的主要方法及应用范围

项目主要方法应用范围

63〜65℃消毒30min或

牛奶、啤酒等不耐高温的

巴氏消毒法72〜76°C处理15s或

消液体

80—85°C处理10-15s

分

煮沸消毒法100℃煮沸5-6min家庭餐具等生活用品

接种室、接种箱或超净工

紫外线消毒紫外线照射30min

作台

用体积分数为70%~75%皮肤、伤口、动植物组织

化学药物消毒的酒精、氯气、苯酚或煤

酚皂溶液等处理表面消毒和空气、水消毒

涂布器、接种环、接种针

直接在酒精灯火焰的充分

灼烧灭菌或其他金属用具、试管口

灭燃烧层灼烧

或瓶口等

菌

耐ISJ温的和需要保持干燥

160―170℃的热空气中

干热灭菌的物品，如玻璃器皿、金

维持2〜3h

属用具等

高压蒸汽灭菌100kPa、121℃维持15―

培养基及多种器材、物品

（湿热灭菌）30min

【典例应用】

例3（2023•杭州高二检测）在微生物的培养和分离实验操作中，无菌操作是实验成

功的关键，下列可能造成污染的措施是（）

A.实验操作者双手用体积分数为70%的酒精消毒

B.试管高压蒸汽灭菌时加脱脂棉花

C.在超净台上完成操作

D.接种环需要灼烧灭菌

答案B

解析实验操作者双手用体积分数为70%的酒精消毒，可防止杂菌污染，A不符

合题意；试管用高压蒸汽灭菌法灭菌前要加棉花堵塞，但不能用脱脂棉花，因脱

脂棉易吸水，容易引起杂菌污染，B符合题意；在超净台上完成操作，可防止杂

菌污染，C不符合题意；接种环需要灼烧灭菌，可保证接种时不会引起杂菌污染，

D不符合题意。

例4(多选)防止外来杂菌的入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前

提。下列叙述错误的是()

A.实验室里可以用紫外线或化学药剂进行消毒

B.接种环、接种针等金属用具，直接在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌

C.在实验室中，切记不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，防止被微生

物感染

D.使用后的培养基丢弃前一定要进行消毒处理，以免污染环境

答案BD

解析实验室里可以用紫外线或化学药剂进行消毒，A正确；灼烧灭菌应该在酒

精灯火焰的外焰部位灼烧，B错误；为防止被微生物感染，切记不可在实验室中

吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，C正确；使用后的培养基丢弃前一定

要进行灭菌处理，以免污染环境，D错误。

三、微生物的纯培养

【情境探疑】

1.结合倒平板的操作程序请探究：

图一图二

(1)如图一所示，为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？

提示：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。

(2)如图二所示，从防止杂菌污染的角度思考，为什么培养基冷却凝固后将平板倒

置？

提示：可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成杂菌污染。

(3)培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。可用什么办法来

估计培养基的温度？

提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。

2.下图是平板划线操作的示意图，据图回答下列问题：

(1)用字母和箭头表示平板划线操作的正确步骤：

提不：d—b—f—a—e—c—h-go

⑵为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束

时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？请完善下方的表格。

灼烧时期目的

取菌种前杀死接种环上原有的微生物

杀死上次划线时残留的菌种，使下一次划线的菌种直接来源于上次

每次划线前划线的末端,从而使每次划线时菌种数目逐渐减少,直至得到单个

细菌

接种结束后杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者

(3)在第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？

提示：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末

端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细

菌繁殖而来的菌落。

(4)接种结束后，为什么要将一个未接种的培养基和一个已接种的培养基放在一起

培养，未接种的培养基表面如果有菌落生长，说明了什么？

①②

将接种后的平板①和一个

未接种的平板②倒置，

放入28C左右的恒温培

养箱中培养24~48h

提示：培养未接种培养基的作用是对照，若未接种的培养基在恒温箱中保温1〜2

d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的。若有菌落形成，说明培养基灭菌

不彻底，或培养基被污染了，需要重新制备。

度归纳提升

1.倒平板操作的注意事项

(1)培养基灭菌后需要冷却至50℃左右时才能倒平板。温度过高会烫手，且培养

基凝固后皿盖上凝结的冷凝水过多，易落入培养基造成污染；温度过低，培养基

会凝固。

(2)将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要完全打开，以免杂菌污染培养基。

(3)培养基冷却凝固后，要将培养皿倒置的原因：防止皿盖上的冷凝水落入培养基，

造成污染。

(4)在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平

板应弃用，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。

(5)整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。

2.平板划线操作的注意事项

(1)蘸取菌液前及每次划线后都需灼烧接种环，划线操作结束后仍需灼烧接种环，

每次灼烧的目的不完全相同。

(2)灼烧接种环后，要等其冷却后才能伸入菌液中或进行划线，以免温度过高而杀

死菌种。

(3)最后一次的划线不要与第一次的划线相连，否则无法达到纯化效果。

(4)划线时的力度大小应适宜，防止因用力过大而将培养基划破。

(5)接种环蘸取菌液前后，要将试管口通过火焰；划线操作全程都要在酒精灯火焰

旁进行。

3.实验结果的分析

(1)若未接种的培养基表面有菌落生长，则说明培养基被污染，应该重新制备；若

无菌落生长，则说明未被污染。

（2）在接种酵母菌的培养基上可观察到独立的菌落，这些菌落在颜色、形状和大小

上相似，酵母菌菌落一般表面光滑、多呈乳白色。

（3）若在培养基中观察到不同形态的菌落，原因可能是菌液中混入了其他杂菌，或

在实验操作过程中被杂菌污染。

【典例应用】

例5（多选）（2023•江苏南京调研）下图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分

操作步骤，下列说法正确的是（）

①②③④

A.步骤①后需将培养基灭菌并调节pH

B.步骤①②③操作时需要在酒精灯火焰附近进行

C.步骤③到④的过程中，接种环共灼烧处理了6次

D.图中步骤①结束后需倒置平板，④结束后不需要

答案BC

解析步骤①表示倒平板，培养基需要先调节pH后灭菌，冷却后倒平板，A错

误；接种环在每次接种前和接种结束后都要通过灼烧来灭菌，所以步骤③到步骤

④的过程中5次划线操作前都要灼烧灭菌，接种结束后还需灼烧灭菌1次，防止

造成污染，由此可见，步骤③到步骤④的过程中共需灼烧接种环6次，C正确；

步骤④操作结束后需在培养皿的底上做好标记并倒置后放入培养箱中进行培养，

D错误。

例6（2023・四川绵阳高二期中）在分离纯化大肠杆菌实验中，划线接种（甲）、培养

结果（乙）如图所示。有关叙述错误的是（）

甲乙

A.甲中a区域为划线的起始位置

B.接种前应对培养基进行高压蒸汽灭菌

C.接种过程中至少需要对接种环灼烧5次

D.连续划线的目的是获得单个细菌，以便形成单菌落

答案A

解析乙图呈现的培养结果是：从d区域到a区域菌落逐渐减少，而形成单菌落

的区域是划线的末端，所以a区域应为划线的终点位置，A错误；在培养微生物

时必须进行无菌操作，培养基可通过高压蒸汽灭菌来保证无菌，B正确；划线前

后都要对接种环灼烧，共划线4次，所以需要灼烧5次，C正确；平板划线法是

分离单菌落的常用方法，划线将细菌分散，到划线的末端可以获得单菌落，D正

确。

例7（2023•江苏无锡高二期末）下列关于“酵母菌的纯培养”实验的叙述，错误的

是（）

A.马铃薯捣烂后的滤液中含有酵母菌生长所需的多种营养成分

B.接种环灭菌时，顶端的环和环后的部分柄均需通过火焰灼烧

C.平板划线时，接种环应在固体培养基表面轻轻地连续划线

D.完成平板划线后，应将平板立刻倒置培养以免污染培养基

答案D

解析完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，再将平板倒置培养，D错误。

题后反思

1.培养基中微生物数目过多或连成一片的原因可能是什么？

提示：（1）菌液浓度过高。

（2）培养过程中被杂菌污染。

（3）利用接种环划线时，每次划线前未灼烧灭菌。

2.污染的培养基能否经过灭菌再次使用？

提示：不能，因为这可能导致营养物质发生变化，从而使培养基失去营养价值。

课堂小结♦-

思维导图晨读必背

1.获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。

2.消毒是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死

物体表面或内部一部分微生物。灭菌是指使用强烈的理化

液体培养基虐消孑悬刎彼法・

固体培恭基阳培苗」毒、巴氏消毒法

源*:无咫西机机宫等*等卜养基1•S基i本r术S]干干「热涉热灭灭菌菌方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽抱和抱子。

在划线法1接种]馥L纯培养灼烧火苗3.由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获

稀释涂布平J-分离一~

板法

得纯培养物的过程就是纯培养。

4.菌落是分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部

繁殖形成的肉眼可见的，有一定形态结构的子细胞群体。

随堂检测

L关于培养基的配制，下列说法错误的是（）

A.在配制培养乳酸杆菌的培养基时，需加入维生素

B.微生物的适应性强，配制培养基时可以不考虑pH

C.虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有碳源、氮源、水和无机盐

D.配制培养基时要注意各种养分的浓度和比例

答案B

解析培养基除需要满足碳源、氮源、水和无机盐等几种营养物质外，还需要满

足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需求，如培养乳酸杆菌时需要在培

养基中添加维生素，A正确，B错误；虽然各种培养基的具体配方不同，但一般

都含有碳源、氮源、水和无机盐，C正确；不同微生物的生长对各种营养物质的

需求不用，配制培养基时要注意各种养分的浓度和比例，D正确。

2.（2023•山东潍坊高二检测）下列关于培养基的叙述，正确的是（）

A.培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质

B.培养基都含有水、碳源、氮源、无机盐等

C.牛肉膏蛋白陈培养基属于合成培养基，营养全面

D.微生物在培养基上生长，都需要将pH维持在中性

答案A

解析培养基是为微生物的生长繁殖提供碳源、氮源、水和无机盐等营养的基质，

A正确；微生物培养基的主要营养物质有碳源、氮源、水和无机盐等，有的自养

型微生物的碳源是二氧化碳，固氮菌的氮源是氮气，此时培养基中不需要加碳源

或氮源，B错误；牛肉膏蛋白腺培养基属于天然培养基，营养全面，C错误；不

同微生物生长的最适pH不同，如霉菌一般适合在酸性环境中生长，细菌一般适

合在中性或弱碱性环境中生长，D错误。

3.下图为实验室中酵母菌纯培养的部分操作步骤，下列说法错误的是（）

①②③④

A.①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行

B.步骤①中待倒入的培养基冷却后盖上培养皿的皿盖

C.步骤③中，每次划线前后都需对接种环进行灭菌处理

D.划线接种结束后，将图④平板倒置后放入培养箱中培养

答案B

解析由图可知，①是倒平板，②是用接种环蘸取菌液，③是进行平板划线，

④是培养。①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行，以防止杂菌污染，A正

确；倒完平板后应立即盖上培养皿的皿盖，冷却后将平板倒过来放置，B错误；

第一次划线前灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养基，除

第一次划线外，每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残

留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而

通过增加划线次数，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单菌落，最后

一次划线后也需要对接种环进行灭菌处理，C正确；划线接种结束后，将平板倒

置后放入培养箱中培养，可以防止培养皿皿盖上的水珠落入培养基造成污染，D

正确。

4.（多选）灭菌和无菌操作是获得微生物纯培养物的基础，在接种、培养、分离酵母

菌时，下列操作错误的是（）

A.用浸泡在体积分数为70%的酒精中的涂布器直接涂布

B.将接种后的培养皿倒置在恒温培养箱中培养酵母菌

C.为了防止污染，接种环经火焰灼烧灭菌后应趁热快速挑取菌落

D.倒平板时，应将培养皿的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上

答案ACD

解析将浸泡在体积分数为70%的酒精中的涂布器拿出后还需要经过灼烧灭菌及

冷却后才能进行涂布，A错误；将接种后的培养皿倒置在恒温培养箱中培养酵母

菌，B正确；接种环经火焰灼烧灭菌之后还需要冷却后才能挑取菌落，C错误；

倒平板时，用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基（10〜20

mL）倒入培养皿，立即盖上培养皿的皿盖，D错误。

课时精练

（时间：30分钟）

【基础对点】

知识点1培养基的配制

1.在制备牛肉膏蛋白腺固体培养基的过程中加入琼脂这一理想的凝固剂，下列关

于琼脂的说法，错误的是（）

A.不被所培养的微生物分解利用，对所培养的微生物无毒害作用

B.在微生物生长温度范围内保持固体状态

C.琼脂凝固点低，有利于微生物的生长

D.琼脂在灭菌过程中不会被破坏，透明度好，凝固力强

答案C

解析琼脂不会被微生物利用且对微生物无毒害作用，在灭菌过程中不会被破坏，

透明度好，凝固力强，A、D正确；琼脂在水中加热至98℃时开始熔化，温度降

至44℃时才开始凝固，微生物生长最适宜的温度范围为16〜30℃,所以琼脂在

微生物生长温度范围内保持固体状态，B正确；琼脂的凝固点相对于微生物生长

的温度较高，凝固剂的凝固点不能太低，否则不利于微生物的生长，C错误。

2.（2023・武汉高二期中）关于培养基的配制的说法，错误的是（）

A.配制培养基时要注意各种养分的浓度和比例

B.合适的培养基可实现分离、鉴定微生物等不同目的

C.在培养尿素分解菌的培养基中，尿素既是氮源也是碳源

D.不同培养基的配方不同，但一般含有碳源、氮源、水和无机盐

答案C

解析配制培养基时，要注意各种营养物质的浓度和比例，A正确；培养基有选

择培养基、鉴别培养基和加富培养基等，可实现分离、鉴定微生物等不同目的，

B正确；在培养尿素分解菌的培养基中，尿素是唯一的氮源，培养基中添加葡萄

糖，葡萄糖作为碳源，c错误；微生物的营养物质主要包括碳源、氮源、水和无

机盐等，D正确。

3.（2023•河北衡水中学高二检测）下表是某同学培养微生物时配制的培养基，关于

此培养基的说法，错误的是（）

编号①②③④⑤

(NH4)2SO4

成分KH2P。4FeSO4CaChH2O

含量0.4g4.0g0.5g0.5g100mL

A.此培养基可用来培养自养型微生物

B.此表中的营养成分共有三类，即水、无机盐、氮源

C.表中各成分的质量按照所培养的微生物的营养需要来确定

D.若除去①，此培养基可用于培养大肠杆菌

答案D

解析由表中成分可知，该培养基中未添加有机碳源，故此培养基可用来培养自

养型微生物，A正确；分析表格可知，表中的营养成分共有三类，即水、无机盐、

氮源，B正确；培养基中各成分的质量按照所培养的微生物的营养需要来确定，

C正确；大肠杆菌是异养型生物，且不能固氮，因此培养大肠杆菌还需要添加有

机碳源，D错误。

知识点2无菌技术

4.（2023•江苏南通高二期末）许多生物学实验十分重视无菌操作，防止杂菌污染。

下列操作正确的是（）

A.对无菌室、超净台和实验员可采用紫外线杀菌

B.家庭制作酸奶时，要将容器和鲜牛奶进行灭菌

C.加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌

D.灼烧灭菌法杀死微生物的营养体和芽抱

答案D

解析对无菌室、超净台可采用紫外线杀菌，对实验员可用酒精擦拭双手进行消

毒，A错误；家庭制作酸奶时，要将容器煮沸消毒，鲜牛奶不进行灭菌，B错误；

加入培养基中的指示剂和染料也需要灭菌，否则可能会污染培养基，C错误；灼

烧灭菌法可杀死物体内外所有的微生物（包括微生物的营养体、芽抱和抱子），D

正确。

5.（2023・湖北黄冈高二检测）下列哪项不属于无菌技术（）

A.将培养皿、接种工具和培养基进行灭菌

B.实验操作应在酒精灯火焰附近进行

C.避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触

D.操作者的衣着和双手用纯净水洗干净

答案D

解析为保证不被杂菌污染，应将培养皿、接种工具和培养基等进行灭菌，A不

符合题意；酒精灯火焰附近可以形成一个相对无菌区，为避免周围环境中微生物

的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行，B不符合题意；周围物品可能含有

杂菌，为防止污染，实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接

触，C不符合题意；对实验操作的空间，操作者的衣着和双手，需进行清洁和消

毒，仅用纯净水洗干净不属于无菌技术，D符合题意。

6.获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，无菌技术围绕着如何避免杂菌

污染展开。请分析下列操作中错误的是（）

A.倒平板后，对空白培养基进行培养，可检测培养基是否被污染

B.接种箱或超净工作台在使用过程中，可用紫外线照射30min,进行消毒

C.若培养皿的皿盖和皿底之间溅有培养基，则不宜用此培养基培养大肠杆菌

D.高压蒸汽灭菌时，不能直接关闭排气阀进行加热灭菌

答案B

解析实验室中检测培养基是否被污染，一般在倒平板后，对空白培养基进行培

养，A正确；接种箱或超净工作台在使用前，可用紫外线照射30min,进行消毒，

B错误；空气中的微生物可能在培养皿的皿盖和皿底之间的培养基上滋生，因此

若培养皿的皿盖和皿底之间溅有培养基，则不宜用此培养基培养大肠杆菌，C正

确；高压蒸汽灭菌时，刚开始加热灭菌锅时，要打开排气阀，使水沸腾一段时间

后再关闭排气阀，这样操作的目的是排尽锅内冷空气，使锅内温度能上升到要求

的温度（121℃）,达到良好的灭菌效果，D正确。

知识点3微生物的纯培养

7.下图为纯培养酵母菌的一个操作环节，下列相关叙述中，错误的是（）

A.该操作步骤是接种，方法是平板划线法

B.除第一次划线外，以后的每一次划线的起点是上一次划线的末端

C.图中酵母菌密度最小的是5处

D.该接种方法适用于酵母菌的计数

答案D

解析平板划线法只能用于微生物的分离、培养，不能用于计数，D错误。

8.下列有关平板划线操作的描述，错误的是（）

A.将接种环放在酒精灯火焰上灼烧，直到接种环烧红

B.接种环在平板上划线的位置是随机的

C.在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过酒精灯火焰

D.最后一区的划线不能与第一区的划线相连

答案B

解析将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他的金属用具，直接在酒精

灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，A正确；接种环在平板上划线

时，采用分区划线，每个区要划3〜5条平行线，而不是随机划的，B错误；在挑

取菌种前和接种完毕后的试管口均要通过酒精灯火焰，以防止杂菌污染,C正确。

9.（2023•贵州高二月考）如图是倒平板的操作，下列相关叙述错误的是（）

甲乙丙丁

A.正确的操作顺序是丙一乙一甲一丁

B.甲应在酒精灯火焰附近进行

C.此培养基不可能为液体培养基

D.完成甲后应快速进行丁操作

答案D

解析等待所倒的平板冷却凝固后，再进行丁的操作，D错误。

【综合提升】

10.（2023•浙江宁波高二检测）微生物培养过程中，要十分重视无菌操作，现代生物

学实验中的许多方面也要进行无菌操作，以防止杂菌污染。请分析下列操作，错

误的是（）

①煮沸消毒可以杀死微生物的细胞和部分芽抱②接种操作要在酒精灯火焰附近

进行③培养基要进行高压蒸汽灭菌④加入培养基中的指示剂和染料不需要灭

菌⑤紫外线消毒可以对接种室、接种箱、超净工作台和操作人员进行消毒，以

杀死物体表面或者空气中的微生物⑥在接种过程中，试管口、瓶口等易被污染

的部位，也可以通过火焰灼烧来灭菌

A.①②B.⑤⑥

C.③⑤D.④⑤

答案D

解析100℃煮沸5〜6min可以杀死微生物的细胞和一部分芽抱，①正确；酒精

灯火焰附近存在一个相对无菌区，为防止杂菌污染，接种操作要在酒精灯火焰附

近进行，②正确；培养基的灭菌方法通常采用高压蒸汽灭菌，该方法应注意将压

力达到预定要求，③正确；指示剂和染料可能混有微生物，故也需灭菌，④错误；

接种室、接种箱或超净工作台在使用前，可以用紫外线消毒，但不能对操作人员

进行紫外线消毒，⑤错误；将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属

工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此外，在接

种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰灼烧来灭菌，

⑥正确。

11.（多选）（2023•沈阳高三模拟）大肠杆菌是寄生于人和动物肠道中的细菌，利用其

代谢产物能与染料伊红一亚甲蓝反应，使菌落呈深紫色并带有金属光泽，从而将

其鉴别出来。下表是其培养基配方。下列相关叙述错误的是（）

0.5%美

蛋白磷酸二2%伊红

成分乳糖X蒸储水蓝

月东氢钾水溶液

水溶液

含量10g10g2g20~30g1000mL20mL13mL

A.培养基配方中X的成分不能是琼脂

B.该培养基中蛋白陈提供的主要营养有碳源、氮源和维生素等

C.可采用干热灭菌法对该培养基灭菌

D.可利用培养基上菌落的特征来判断和鉴别大肠杆菌的存在

答案AC

解析鉴别培养基将产生深紫色菌落的大肠杆菌鉴别出来，需要使用固体培养基,

则培养基配方中X的成分可以是琼脂，A错误；该培养基中，蛋