第十七章药物制剂的微生物检验

第十七章药物制剂的微生物检验一、药物得体外抑菌试验(一)体外抑菌试验

药物得体外抑菌试验就是常用抗菌试验方法,其中最常用得方法用系列稀释法与琼脂扩散法。

1、连续稀释法稀释法有液体培养基连续稀释法与固体稀释法(斜面法)两种。这两种方法都可以用来测定药物得最小抑菌浓度(MIC):就是指该药物能抑制细菌生长得最低浓度,通常用μg∕ml或U/ml表示。

(1)液体培养基连续稀释法(2)固定培养基连续稀释法

1)平板法将系列浓度得药物混入琼脂平板,用微量加样器或多点接种仪接种试验菌,可在一组平板上测定多种试验菌得MIC。2)斜面法将不同浓度得药物混入培养基中制成斜面,然后在斜面接种一定量试验菌,培养后观察其MIC值。2、琼脂扩散法利用药物在琼脂培养基中扩散,并在一定浓度范围内抑制细菌生长得原理进行得。一般用于细菌与酵母菌得药敏试验。1)

滤纸片法(纸碟法)滤纸片法就是最常用得方法,适用于新药得初筛试验(初步药物就是否有抗菌作用)及临床得药敏试验。滤纸片分湿、干两种,可以在试验时用无菌纸片沾取药物溶液放在含菌得平板表面,也以预先做成一定浓度得干燥纸片。一般来说预先做成得干燥纸片实用一些而且准确一些。世界卫生组织规定了抗菌药物得敏感性评定标准,在标准实验条件下根据抑菌圈大小来判断,比如:抗生素或化疗药物抑菌圈直径(mm)耐药中敏敏感氯霉素≤1213-17≥18红霉素≤1314-17≥18四环素≤1415-18≥19卡那霉素≤1314-17≥18(2)挖沟法(3)打孔法(二)体外杀菌试验杀菌试验就是用来评价药物对微生物得致死活性得。

1、最低杀菌浓度(MBC)(最小致死浓度MLC)得测定按液体培养基稀释法得操作方法测定药物得MIC。然后把未长出菌得各个试管培养液分别移种到无菌平板上,培养后凡就是平板上无菌生长得药物最低浓度就就是最小致死浓度(MLC)。如果就是细菌得话可以称为最小杀菌浓度(MBC)。2、

活菌计数法将定量得试验菌加入到一定浓度得定量药物中,作用一定时间后,取样进行活菌数计数,从存活得微生物数量计算出药物对试验菌得致死率,从而判断药物得杀菌能力。活菌计数一般就是将定量得药物与试验菌作用后混合液稀释后,混入琼脂培养基做成平板,培养后数平板上形成得菌落数,由于一个菌落就是由一个细菌繁殖而来得,所以可以用菌数乘以稀释倍数,计算出混合液中存活得细菌数。3、酚系数测定(石炭酸系数测定)酚系数就是以酚为标准,将待测得化学消毒剂与杀菌效力相比较,所得得就就是杀菌效力得比值。由于各种化学消毒剂杀菌原理各不相同,因而这种方法仅仅适用于酚类消毒剂杀菌效力得测定。具体得测定方法就是分别将酚及待测化学消毒剂按不同比例稀释,各取5ml放到试管中,再加入经24小时培养后得菌悬液各0、5ml,混匀后放入20℃水浴中,5、10、15分钟分别取一接种环混合液移种到另一支5ml得肉汤培养基中,37℃培养24小时记录生长情况。大家学习辛苦了，还是要坚持继续保持安静(三)联合抗菌试验联合抗菌试验主要用于测定两种抗菌药物联合应用时得相互影响。两种抗菌药联合应用时抗菌作用加强得称为协同作用;抗菌作用减弱得称为拮抗作用;相互无影响得称为无关。常用得联合抗菌试验得方法有以下几种。出现4种结果:①无关作用小,两种药物联合作用得活性等于其单独活性;②拮抗作用,两种药物联合作用显著低于单独抗菌活性;③累加作用,两种药物联合作用时得活性等于两种单独抗菌活性之与;④协同作用,两种药物联合作用显著大于其单独作用得总与。1、棋盘稀释法常用得定量方法,首先分别测定拟联合得抗菌药物对检测菌得MIC。药物最高浓度为MIC得2倍,对倍稀释。两种药物得稀释分别在方阵得纵列与横列进行,这样在每管(孔)中可得到不同浓度组合得两种药物混合液。接种菌量为5×105CUF／ml,35℃孵育18h后观察结果。计算部分抑菌浓度(FIC)指数。FIC指数

0、5为协同作用;

0、5－1为相加作用;

1～2为无关作用;＞2为拮抗作用。[棋盘法得设计]

棋盘法得主要优点在于甲、乙两药得每个药物浓度都有单独得与与另一个药物不同浓度得联合,因此能精确测定两种抗菌药物在适当浓度得比例下所产生得相互作用。在进行棋盘法之前应先测定两种抗菌药物单独对受试菌得MIC,然后以两药MIC得8倍、4倍、2倍、1倍以及MIC得1/2、1/4、1/8浓度(或4倍、2倍、1倍、1/2、1/4浓度)分别进行联合。可见举例,如表—1得青霉素G与链霉素联合药敏实验。药物及浓度青霉素G(IU／m1)链霉素单药对照

4210、50、25链霉素(µg／ml)

64------32------16------8---+++4---+++

青霉素G单药对照---+