DB12-T987-2020-鲜、冻畜禽肉中磺胺类、喹诺酮类和四环素类兽药残留量的测定液相色谱-串联质谱法-天津市

ICS65.020.30DB12B41天津市地方标准DB12/T987—2020鲜、冻畜禽肉中磺胺类、喹诺酮类和四环素类兽药残留量的测定液相色谱-串联质谱法Determinationofresiduesofsulfonamides,quinolonesandtetracyclinesinfreshandfrozenmeatoflivestockandpoultrybyliquidchromatography-tandemmassspectrometry天津市市场监督管理委员会发布DB12/T987—2020前言本标准依据GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由天津市农业农村委员会提出并归口。本标准起草单位：天津市农业质量标准与检测技术研究所、摩天众创（天津）检测服务有限公司。本标准主要起草人：李娜、林宏芳、邵辉、李辉、刘磊、张玉婷、郭永泽、绳慧珊、卢娜、冯兆欣、郝玉杰、潘喆。IDB12/T987—2020鲜、冻畜禽肉中磺胺类、喹诺酮类和四环素类兽药残留量的测定液相色谱-串联质谱法1范围本标准规定了鲜、冻畜禽肉中磺胺类、喹诺酮类和四环素类兽药残留量的测定-液相色谱-串联质谱法的方法提要、试剂和材料、仪器和设备、试样制备与保存、测定步骤、灵敏度、准确度和精密度。本标准适用于鲜、冻畜禽肉中磺胺类、喹诺酮类和四环素类共28种兽药残留的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要试样经酸化乙腈提取，提取液浓缩、甲醇定容后，用液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS）测定，基44.1基本要求1DB12/T987—20204.3.1氢氧化钠溶液（1mol/L）：称取4.0g氢氧化钠，用水溶解并定容至100mL。4.3.2氢氧化钠溶液（0.03mol/L）：称取0.12g氢氧化钠，用水溶解并定容至100mL。4.3.3Na2EDTA-McIlvaine缓冲溶液（0.1mol/L）：称取12.9g柠檬酸，10.9g磷酸氢二钠，37.2g乙二胺四乙酸二钠，加900mL水溶解，用1mol/L氢氧化钠溶液调pH值至4.0，加水定容至1000mL。4.3.40.1%甲酸水：移取0.1mL甲酸加入100mL水中，混匀。4.3.50.1%甲酸甲醇：移取0.1mL甲酸加入100mL甲醇中，混匀。4.3.6甲醇-0.1%甲酸（10:90，V:V）：移取10mL甲醇加入90mL0.1%甲酸水溶液中，混匀。4.4标准品磺胺醋酰、磺胺嘧啶、磺胺吡啶、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺甲噻二唑、磺胺氯哒嗪、磺胺甲噁唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺异恶唑、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、麻保沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、二氟沙星、噁喹酸、氟甲喹、土霉素、金霉素、强力霉素标准品：纯度≥98.0%；环丙沙星纯度≥95.0%，(达氟)单诺沙星纯度≥94.0%，沙拉沙星纯度≥95.0%，四环素纯度≥96.5%。4.5标准溶液配制4.5.1标准储备溶液（1000mg/L）：准确称取10mg各兽药标准品，根据标准品的溶解性不同，磺胺类、四环素类兽药用乙腈溶解并定容至10mL，喹诺酮类兽药先用2mL氢氧化钠溶液溶解，甲醇定容至10mL，于-18℃避光保存，有效期1年。4.5.2标准工作溶液：分别吸取28种兽药标准储备液0.25mL于25mL容量瓶，用乙腈稀释并定容，配制成浓度为10mg/L的混合标准工作液，于4℃避光保存，有效期1个月。4.6.1十八烷基硅烷键合硅胶（C18）：40~60μm。氨基硅烷化硅胶（NH2）：40~60μm。4.6.3微孔滤膜（有机相）：0.22μm。56鲜、冻畜禽肉类样品剔去毛、淤血、骨等，取缩分后样品，用匀浆机捣碎成肉糜状，混匀，装入清洁容器内，密封并标识。用冷冻畜禽肉类样品在室温下自然解冻至稍微变软，且冻水未流出待制备。2DB12/T987—20206.2试样保存试样应在-18℃条件下保存。7测定步骤7.1样品前处理准确称取试样2.00g（精确至0.02g）于50mL聚丙烯塑料离心管中，加入2mL0.1mol/LNa2EDTA-McIlvaine缓冲溶液，3mL乙腈，涡旋2min，4000r/min离心5min，收集上清液于另一50mL离心管中，残渣加5mL乙腈，涡旋2min，4000r/min离心5min，合并上清液于上述50mL离心管中。于上清液中依次加入200µL乙酸，1g氯化钠，涡旋1min，4000r/min离心5min，取上层乙腈相2mL于10mL聚丙烯塑料离心管中，加入C18和NH2吸附剂各100mg，涡旋1min，4000r/min离心5min，取上清液，氮气吹干。残渣用1mL甲醇-0.1%甲酸水（10:90，V:V）定容，过0.22µm有机滤膜。7.2测定7.2.1液相色谱条件如下：——色谱柱：AcquityBEHRP18柱(2.1×100mm，1.7μm)；——流动相：A相：0.1%甲酸甲醇；B相：0.1%甲酸水；梯度洗脱条件见表1。——进样量：10μL；——柱温：30℃。表110111214a7.2.2质谱条件如下：——电离源：电喷雾正离子(ESI+)；——毛细管电压：3.0kV；3DB12/T987—2020液相色谱-串联质谱法对样品定性确证须满足以下要求：——待测样品的保留时间在外标标准样品的保留时间的±2.5%之内；——定性离子的信噪比大于3（S/N>3）；——与外标标准品相比，样品的两个特征离子相对丰度在表2规定的许可范围内。28种兽药的多反应监测（MRM）色谱图参见附录B。表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度比（%）＞50允许的最大偏差（%）±20±25±30±50＞20～50＞10～20≤107.4定量采用外标法定量。用色谱数据处理软件或按公式（1）计算试样中的目标物含量（µg/kg）：AV3V..................................(1)1sAV2ms式中：ω——试样中目标物的含量，单位为微克每千克（µg/kg）；ρs目标物标准工作溶液的浓度，单位为微克每升（µg/L）；A试样测定液中目标物定量离子的峰面积；As标准工作溶液中目标物定量离子的峰面积；V1提取溶液中乙腈的总体积（mL）；8灵敏度28种兽药的检测限在0.5µg/kg～3.0µg/kg之间。磺胺醋酰、磺胺嘧啶、磺胺吡啶、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺甲噻二唑、磺胺氯哒嗪、磺胺甲噁唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺异恶唑、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、麻保沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、单诺沙星、环丙沙星、恩诺沙星、二氟沙星、沙拉沙星、噁喹酸、氟甲喹的定量限为5.0µg/kg，四环素、土霉素、金霉素和强力霉素的定量限均为10.0µg/kg。94DB12/T987—20209.1.1鲜、冻畜禽肉中磺胺类和喹诺酮类兽药在5µg/kg～50µg/kg添加水平，回收率在70%～110%之间；9.1.2鲜、冻畜禽肉中四环素类兽药在10µg/kg～50µg/kg添加水平，回收率在70%～110%之间。9.2精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。5DB12/T987—2020AA附录A（资料性附录）28种兽药检测表A.128种兽药中英文名称、保留时间、质谱检测条件和定量限保留时间定性离子对定量离子对锥孔电压碰撞能量检测限定量限名称(min)(m/z)(m/z)(V)(V)(µg/kg)(µg/kg)磺胺醋酰Sulfacetamide磺胺嘧啶215/155.8;215/104.154.524.874.995.385.385.946.036.176.156.636.826.776.82215/155.8251/155.8182525202530253030253025303012;2318;2815;1614;2120;1620;2319;2524;3116;2015;2520;2428;4525;2025;331.21.31.01.50.51.22.80.50.53.01.01.51.01.05.05.05.05.05.05.0107.7251/155.8;251/107.7Sulfadiazine磺胺吡啶250.2/155.8;250.250.2/155.Sulfapyridine磺胺噻唑2/1848256.2/107.8;256.256.2/107.sulfathiazole磺胺甲基嘧啶Sulfamerazine麻保沙星2/155.8265/155.8;265/171.88265/171.8363.1/320.1;363.363.1/320.362/318.2;362/261.1Ofloxacin320.1/276.1;320.320.1/302.358.1/340.1;358.358.1/340.332.1/314.1;332.332.1/314.5.06DB12/T987—2020磺胺甲噻二唑Sulfamethizole二氟沙星271.2/107.8;271.271.2/155.6.807.377.8722353522;1325;2424;350.80.50.55.05.05.02/155.88400/382;400/356400/382Difloxacin沙拉沙星386/368;386/299386/368Sarafloxacin磺胺氯哒嗪285/155.8;285/107.7Sulfachloropyridazine8.13285/155.82420;301.25.0磺胺甲噁唑254/155.8;254/107.78.248.77254/155.8479/444253520;2520;250.83.05.010Sulfamethoxazole金霉素479/462;479/444Chlortetracycline磺胺间甲氧嘧啶Sulfamonomethoxine281/155.8;281/107.78.70281/155.83018;251.35.0磺胺异恶唑268.3/107.8;268.268.3/155.9.1611.4811.6011.7811.9212.0122252732282526;1320;3522;4325;3515;2520;370.82.51.21.01.00.55.010sulfisoxazole强力霉素3/155.88445/428;445/154445/428Doxycycline噁喹酸301/155.7;301/107.77DB12/T987—2020BB附录B（资料性附录）28种兽药的多反应监测（MRM）色谱图4.1215>155.8(SA)2.39e95%-2.02.02.02.04.06.08.08.08.08.010.010.010.010.012.012.012.012.04.1215>107.7(SA)1.49e9%-4.06.04.54.5251>155.8(SD)1.50e9%-4.04.06.006.00251>107.7(SD)1.89e9%-4.812.04.94.98DB12/T987—20209%-5.35.35.35.3265>171.8(SM1)1.63e2.04.04.04.04.06.06.06.08.08.08.08.010.010.010.010.012.0265>155.8(SM1)1.09e9%-2.012.09%-5363.1>345(MAR)6.27e2.002.0012.09%-5363.1>320.1(MAR)8.14eTim6.012.05.9445>427(TC)5.40e9%-2.02.02.02.04.04.04.04.06.05.98.08.08.08.010.010.010.010.012.0445>410(TC)1.01e9%-5.011.46.06.012.09%-5.59DB12/T987—20206.66.6320.1>302.1(NOR)3.43e9%-2.02.02.02.04.04.04.04.06.06.06.06.08.08.08.08.010.010.010.010.012.0320.1>276.1(NOR)1.98e9%-12.06.8358.1>340.1(DAN)2.63e9%-12.06.86.7358.1>81.6(DAN)2.48e9%-7.1Tim12.0332.1>314.1(CIP)2.29e9%-2.02.02.02.04.04.04.04.06.06.06.06.08.08.08.08.010.010.010.010.012.0332.1>288.1(CIP)1.03e6.76.89%-12.06.8281>155.8(SMP)2.82e281>107.7(SMP)3.44e10DB12/T987—20207.37.3400>382(DIF)3.79e9%-2.02.02.04.04.04.06.06.06.08.010.010.010.012.012.012.012.0400>356(DIF)3.26e9%-8.07.8386>368(SAR)2.54e9%-8.07.8386>299(SAR)1.12eTim9%-2.02.02.02.02.04.04.04.04.04.06.06.06.06.06.08.010.010.010.010.010.08.1285>155.8(SCP)2.09e9%-8.012.08.1285>107.7(SCP)2.76e9%-8.012.08.2254>155.8(SMZ)1.43e9%-8.29%-9%-281>155.9(SMM)6.48e9%-281>107.8(SMM)1.67eTim9%-11DB12/T987—20209.19.1268.3>155.8(SIZ)2.69e9%-2.02.02.04.04.04.06.06.06.08.08.08.010.010.010.012.0268.3>107.8(SIZ)7.41e9%-12.011.4445>428(DC)4.08e9%-12.011.4445>154(DC)2.74e8%-1Tim2.02.02.04.04.04.06.06.06.08.08.08.010.010.010.012.012.0262>244.1(