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第三章动植物细胞培养产酶与微生物细胞相比，动物细胞和植物细胞具有各自不同的特性，需采用各自不同的培养工艺。

植物细胞结构一、植物细胞培养产酶

1.植物细胞培养的特点

植物细胞培养是指在离体条件下，将愈伤组织或其它易分散的组织置于液体培养基中进行振荡培养，得到分散成游离的悬浮细胞，通过继代培养增殖，获得大量细胞的一种技术。2.培养基特点应用最广的是MS培养基和LS培养基

MS培养基是1962年由Murashinge和Skoog为烟草细胞培养而设计的培养基。LS培养基是在其基础上演变而来的。3.培养方法：悬浮细胞培养①细胞株的建立；外植体与愈伤组织②扩大培养；③大罐培养；外植体：从植株取出，经过预处理后，用于植物组织培养的植物组织（包括根、茎、叶、芽、花、果实、种子等）的片段或小块。愈伤组织：将上述外植体植入诱导培养基中，于25℃左右培养一段时间，从外植体的切口部位长出小细胞团。水稻的外植体（幼胚）和愈伤组织外植体愈伤组织4.培养条件的影响与控制（1）温度（2）pH（3）通气与搅拌（4）光照的控制（5）前体的添加（饲喂）（6）刺激剂（elector）的应用5.植物细胞培养产酶实例以大蒜细胞培养生产超氧化物歧化酶（SOD）为例(1)大蒜愈伤组织的诱导选取结实、饱满、无病虫害的大蒜蒜瓣，去除外皮，先用70%乙醇消毒20s，再用0.1%升汞消毒10min，然后无菌水漂洗3次。在无菌条件下，切成0.5cm3的小块，植入含有3mg/L2,4-D和1.2mg/L6-BA的半固体MS培养基中，在25℃，600lux，12h/d光照条件下培养18d，诱导得到愈伤组织，每18天继代一次。(2)大蒜悬浮细胞培养

将上述在半固体MS培养基上培养18d的愈伤组织，在无菌条件下转入含有3mg/L2,4-D和1.2mg/L6-BA（苄基腺嘌呤）

的液体MS培养基中，加入灭菌的玻璃珠，25℃，600lux，12h/d光照条件下震荡培养18d，使愈伤组织分散成为小细胞团或单细胞。然后在无菌条件下，经过筛网将小细胞团或单细胞转入含有3mg/L2,4-D和1.2mg/L6-BA的液体MS培养基中，25℃,600lux，12h/d光照条件下震荡培养18d。(3)酶的分离纯化细胞培养完成后，收集细胞，经过细胞破碎、提取、分离得到超氧化物歧化酶。二、动物细胞培养产酶

动物细胞模式图

1.动物细胞培养的特点细胞生长速度慢。（需添加抗生素）细胞体积大，无细胞壁保护，对剪切力敏感。反应过程成本高，产品价格贵。细胞具有锚地依赖性。原代细胞一般繁殖50代。

2.培养基

①天然培养基

②合成培养基

③无血清培养基3.培养方法

(1)悬浮培养(suspensionculture)(2)贴壁培养(anchorage-dependentculture)

微载体培养(microcarrierculture)

4.培养条件的影响与控制（1）温度：一般控制在36.5℃.

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