《植物组织培养》课件 模块二-2 培养基的制备

任务一母液的配制任务二培养基的制备模块二培养基的配制项目二

培养基的配制任务二培养基的配制知识目标培养基配制方法和步骤；一般掌握培养基的筛选办法。12技能目标熟练掌握培养基配制方法和步骤；熟练掌握培养基的灭菌方法12任务讲解第一节培养基配制流程第二节培养基的选择第一节培养基配制流程分装调PH值接种确定配方移母液定容培养基熬制灭菌称取蔗糖、琼脂扎口水培养基配制流程图1.培养基熬制1.将2/3水倒入铝锅中，近开锅时加入称好的蔗糖和琼脂，边煮边搅拌，防止糊底。2.用旺火煮开，再用文火加热，直至琼脂全部融化。3.将量好的培养基母液倒入铝锅中，搅拌均匀。1.培养基熬制培养基熬制视频视频2-3培养基熬制母液的量取视频视频2-4母液的量取母液的定容

2.定容培养基做好后在调整pH值之前，应对培养基进行定容，考虑培养基本身处于热态并还需要灭菌等要损失部分，因此定容时需要多出近1/10。视频2-5定容母液调pH3.调pH值用0.1MNaOH或HCl调PH值为5.8。在培养基配方不大变动的情况下可用经验法。可以将连续三次测定所加入的酸或碱液的平均值作为以后调整的用量值。调后注意一定要摇动均匀。视频2-6调整PH值4.激素的添加在激素的水平变化较小时，尤其在配制多种培养基时，激素可以在pH值调整后添加。要求严格时应添加激素后再调整pH值（因激素母液可能影响培养基的pH值）。激素的添加培养基分装5.培养基分装趁热分装，100ml的三角瓶约装入30～40ml,30瓶/L。视频2-7培养基分装培养基的扎口与灭菌

6.扎口与灭菌要求封口松紧适宜，系活扣，便于接种操作。培养基应及时灭菌，防止变质。视频2-8培养基灭菌任务小结培养基配制的顺序为：倒水加热称取琼脂入锅加热熔解加入蔗糖待琼脂溶化后加母液搅拌均匀然后加激素。培养基制作视频视频2-9培养基母液配制

0.5mg/ml的NAA配制方法，要求配100ml。某培养基为MS+BA2mg/l+NAA0.2mg/l.

问：如果做2升，应加激素各为多少毫升？（BA母液为0.5mg/ml，NAA为0.5mg/ml）。思考练习12第二节培养基的选择

在建立一个新的实验体系时，为了能研制出一种适合的培养基，最好先由一种已被广泛使用的基本培养基(如MS培养基或B5培养基)开始。当通过一系列的实验，对这种培养基做了某些定性和定量的小变动之后，即有可能得到一种能满足实验需要的新培养基，选择最佳培养基。常用试验方法主要有单因子试验、多因子试验及广谱实验等。单因子试验

在单因子试验中，由于培养基中其他成分都维持在一般水平上，所以只变动一个因子，就可以找出这一因子对试验的影响和影响的程度。例如MS基本培养基的其他成分和用量都不变，只变动NAA用量对某一培养物生根的影响，这种只研究一个因素的试验就是单因子试验。单因子试验

试验中要求对照组与试验组中的试验个体，即植物组织块或其他培养物，必须在遗传性、生理状态、前培养条件等方面，尽可能完全一致。以保证试验结果是来源于试验因子，而不是由于试验材料的不一致导致的。试验中各处理一般都要设有一定的重复，以取得可靠的试验结果。随试验规模和要求不同，大多每个项目要有4～10瓶，每瓶至少3块培养物或3丛小幼苗。多因子试验

对培养基中两个或两个以上因素进行研究的试验称为多因子实验，试验可采用完全试验方案，也可选用正交设计方案，完全试验方案具有均衡完全的特点，各个因子的每个水平都相互搭配，构成了所有可能的处理组合，如研究NAA和6－BA的最佳浓度组合，每个因子各设5个浓度水平(0，0.5，2.5，5，10mg／L)，这两种因子各种浓度的所有组合，就构成了一个具有25项处理的试验见下表。多因子试验2种激素5种浓度的实验组合6-BA(mg/L）00.52.5510NAA012345(mg/L)0.56789102.5111213141551617181920102122232425广谱实验法

在广谱实验法中，把培养基中所有组分分为4大类：无机盐、有机营养物质(蔗糖、氨基酸和肌醇等)、生长素、细胞分裂素。对每一类物质选定低(L)、中(M)、和高(H)3个浓度。4类物质各3种浓度的自由组合即构成了一项包括81个处理的实验。在这81个处理中最好的一个可用4个字母表示。例如，一个包含中等浓度无机盐，低等浓度生长素、中等浓度细胞分裂素和高等浓度有机营养物质的处理即可表示为MLMH。最佳组培方案筛选技巧

一、技术资料的收集

查：学名、品种及商品名，文献资料（近3-5年）。查不到时，查相近的、同属内其他文献。

信息：外植体取材时间、类型；初始培养基、继代、生根培养基；培养基类型，附加成分，尤其激素及特殊成分，pH；培养条件，尤其温度；驯化营养土配方及驯化条件。最佳组培方案筛选技巧

二、预备试验分析上述信息，结合自身工作经验，针对关键因素，拟定方案。一般接种到现有培养基上，观察和判断，找出突破口。

三、正交试验例：苹果生根：在1/4MS，取IBAVB1间苯三酚炭暗培养5个因子，每因子4水平，选用L16(45)正交表。最佳组培方案筛选技巧Ln(tk)列号数（安排的因子数）水平数处理数最佳组培方案筛选技巧最佳组培方案的筛选找出主导因子：IBA、暗培养天数经组合试验：IBA:1.5，2.0，2.5，3.0，5.0暗培养天数：1[2]3[4]5选出：IBA3mg/L暗培养3天

只研究一个因素的试验就是单因子试验；对培养基中两个或两个以上因素进行研究的试验称为多因子实验，试验可采用完全试验方案，也可选用正交设计方案；组培方案筛选的流程为：技术资料的收集

预备试