2.2.2动物细胞融合技术与单克隆抗体课件高二下学期生物人教版选择性必修3

第2章细胞工程第2节动物细胞工程Part2动物细胞融合技术与单克隆抗体目录/CONTENTS0102动物细胞融合技术单克隆抗体及其应用植物体细胞杂交植物细胞融合植物组织培养温故而知新：意义：打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育植物新品种。

温故而知新：实验：人——鼠细胞荧光标记融合实验501动物细胞融合技术使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。形成具有原来两个或多个细胞的遗传信息的杂交细胞

细胞膜具有一定的流动性1、概念：4、结果：2、原理：3、诱导方式物理法：电融合法化学法：聚乙二醇（PEG)生物法：灭活病毒诱导法与植物原生质体融合的方法相同——动物细胞融合特有601动物细胞融合技术5、过程:动物细胞融合动物细胞培养细胞膜的流动性细胞增殖701动物细胞融合技术灭活病毒诱导细胞融合的原理灭活：指用物理或化学手段使病毒失去感染能力（不感染细胞），但是并不破坏病毒的抗原结构（诱导细胞融合）。

病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。【拓展】801动物细胞融合技术正在融合的淋巴细胞与骨髓瘤细胞7、应用：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。6、意义：

至今，种间、属间、科间，甚至动物和植物之间的细胞融合都已获得成功。研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。为制造单克隆抗体开辟了新途径。项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理步骤诱导方法结果意义比较动物细胞融合与植物体细胞杂交细胞膜的流动性和植物细胞的全能性细胞膜的流动性酶解法去掉细胞壁后，诱导原生质体融合，形成杂种体细胞，再经过植物组织培养形成杂种植株分散成单个细胞后诱导细胞融合物理方法、化学方法物理方法、化学方法、灭活病毒形成杂种植株形成杂种细胞克服远缘杂交不亲和障碍课堂检测1.关于动物细胞融合的说法错误的是()A.动物细胞融合后形成的具有原来两个或多个动物细胞遗传信息的多核细胞称为杂交细胞B.动物细胞融合己成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的重要手段C.常用于诱导动物细胞融合手段有聚乙二醇、灭活的病毒、电激等D.细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能A2.关于动物细胞融合与植物体细胞杂交技术的比较,下列叙述合理的是 (

)A.均可使用PEG、电激或灭活病毒诱导细胞融合B.两者都可以跨越种属间的生殖隔离C.两者都可以体现细胞的全能性D.在适宜条件下，均可发育成完整个体B课堂检测121302单克隆抗体及其应用1.定义：机体受抗原刺激后产生的，能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。2.抗体的分布：1）血清（主要）2）组织液及外分泌液（如乳汁中）体液免疫

抗体1）每个B淋巴细胞只分泌一种特异性的抗体2）体内产生的特异性抗体种类多达百万种以上抗体1402单克隆抗体及其应用1抗原传统抗血清（所有抗体混合）免疫

1

1234缺陷：产量低、纯度低，特异性差。（不能无限增殖）动物体内1抗原注射浆细胞1抗体

1B淋巴细胞增殖分化1、传统抗体制备方法及缺陷

1

1502单克隆抗体及其应用动物细胞融合杂交细胞动物细胞培养单克隆抗体骨髓瘤细胞

（能无限增殖）一种B淋巴细胞（只分泌一种特异性抗体）杂交瘤细胞既能迅速大量增殖，又能产生专一抗体一个极富创造力的方案1975年，米尔斯坦和柯勒1984年，诺贝尔生理学或医学奖1602单克隆抗体及其应用动物细胞融合杂交细胞动物细胞培养单克隆抗体骨髓瘤细胞

（能无限增殖）一种B淋巴细胞（只分泌一种特异性抗体）杂交瘤细胞既能迅速大量增殖，又能产生专一抗体单克隆抗体一个B淋巴细胞细胞群抗体克隆一个极富创造力的方案1702单克隆抗体及其应用注射特定抗原从患骨髓瘤的小鼠体内取骨髓瘤细胞的培养多种已免疫B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合小鼠的脾脏中获取2、单克隆抗体的制备过程1802单克隆抗体及其应用2杂交瘤细胞(多种)13置于选择性培养基上培养

第一次筛选融合的细胞BB132BB瘤瘤瘤瘤√1902单克隆抗体及其应用克隆化培养抗体检测第二次筛选(抗原-抗体杂交技术)能分泌所需抗体的杂交瘤细胞阳性细胞杂交瘤细胞(多种)2002单克隆抗体及其应用体外培养单克隆抗体体内或体外培养能分泌所需抗体的杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔21【培养杂交瘤细胞的方法比较】项目腹腔培养体外培养优点缺点易于控制培养条件（如无需提供无菌环境等），操作简单，成本较低规模小，产量少可大规模培养，大量生产需要人为控制培养条件，成本相对较高02单克隆抗体及其应用2302单克隆抗体及其应用动物细胞融合动物细胞培养给小鼠注射特定的抗原蛋白B淋巴细胞（免疫）骨髓瘤细胞杂交细胞杂交瘤细胞单克隆抗体能分泌所需抗体的杂交瘤细胞第一次筛选第二次筛选诱导融合选择培养基克隆化培养，专一抗体检验体外培养或小鼠腹腔内增殖特异性强灵敏度高可大量制备既能大量繁殖又能产生专一抗体知识拓展：第一次筛选获得杂交瘤细胞①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基喋呤阻断。②人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但不能分裂增殖。

③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，但能不断分裂增殖。筛选出杂交瘤细胞方法？B淋巴细胞及同型融合细胞不能无限增殖，死亡骨髓瘤细胞及同型融合细胞不能无限增殖，死亡杂交瘤细胞能无限增殖，生长二、单克隆抗体及其应用培养基中加入氨基嘌呤2502单克隆抗体及其应用阳性孔抗体检测的方法——抗原-抗体杂交法在单克隆抗体制备过程中，两次筛选的目的和方法是不相同的。将杂交瘤细胞群稀释，约每孔1个细胞进行培养（克隆化培养）一段时间后，检测各孔上清液中细胞分泌的抗体上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔多孔细胞培养板抗体检测板分泌抗体能跟特定抗原结合的细胞即为所需杂交瘤细胞总结注射特定抗原的目的是获得什么细胞？B淋巴细胞第一次筛选的目的？如何筛选？

筛选原理是？筛选出杂交瘤细胞；选择培养基；在选择培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长杂交瘤细胞的特点是？既能迅速大量繁殖，又能产生抗体总结第二次筛选的目的？如何筛选？筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞；选择抗体检测呈____性的杂交瘤细胞用96孔板培养，在每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞的情况下，进行克隆化培养和抗体检测抗体和抗原能特异性结合阳抗体检测原理是？总结如何获取大量所需的杂交瘤细胞？在体外条件下大规模培养或注射到小鼠腹腔中如何获得单克隆抗体？从细胞培养液或小鼠腹水中获取能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗体发生特异性结合，并且可以大量的制备。单克隆抗体的优点单克隆抗体制备过程的原理细胞膜具有一定的流动性和细胞增殖课堂检测B3.如图所示为杂交瘤细胞的制备示意图。骨髓瘤细胞由于缺乏次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT-),在HAT选择培养液中不能正常合成DNA，无法生长。下列叙述错误的是(

)A.可用灭活的病毒诱导B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合B.两两融合的细胞都能在HAT选择培养液中生长C.杂交瘤细胞需进一步筛选才能用于生产D.细胞膜的流动性是细胞融合的基础课堂检测4.如图2-2-6为单克隆抗体的制备流程示意图。下列叙述正确的是(

)图2-2-6A.甲是从已免疫的小鼠脾脏中获得的致敏T淋巴细胞B.①表示将骨髓瘤细胞去核后进行细胞融合C.乙为融合细胞，同时具有细胞甲和骨髓瘤细胞的特性D.②表示筛选能产生特异性抗体的细胞D课堂检测5.犬细小病毒(CPV)单克隆抗体(CpvMcAb)可抑制病毒对宿主细胞的侵染及病毒的复制，进而杀灭幼犬体内病毒。下列相关叙述，错误的是()A．在Cpv、McAb的制备过程中用到了动物细胞培养和动物细胞融合技术B．给幼犬注射CPV后，CPV抗体检测呈阳性，说明发生了体液免疫反应C．经选择性培养基筛选出来的杂交瘤细胞即可直接生产CpvMcAbD．对杂交细胞培养时，需要无菌无毒环境，且温度、气体环境等要适宜C单克隆抗体应用（1）诊断试剂——最广泛应用

在受精后不久，胎盘滋养层细胞就会分泌人绒毛膜促性腺激素(HCG)，是由受孕妇女体内胎盘产生的一种糖蛋白类激素，在孕妇的尿液中大量存在。而在非妊娠妇女尿液中几乎不含有。抗（人绒毛膜促性腺激素）单克隆抗体资料1

用抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体做成的“早早孕诊断试剂盒”，在妊娠第8天就可以作出诊断，这比原来的诊断方法提前了10d左右，可以避免孕妇在不知道妊娠的情况下因服用药物而对胎儿造成不利影响。该方法检测的准确率在90%以上。3302单克隆抗体及其应用1、诊断试剂——最广泛应用抗原-抗体杂交法抗人绒毛促性腺激素单克隆抗体在妊娠第8天就可以作出诊断，比原来诊断方法提前了10d左右，准确率在90﹪以上。具有准确、高效、简易、快速特点诊断优点：3、单克隆抗体的应用3402单克隆抗体及其应用乙肝测定试剂艾滋病检测试剂血型检测试剂新冠病毒检测试剂（2）用于治疗疾病和运载药物单克隆抗体应用资料2

使用高效的细胞毒素类药物进行化疗可以有效杀伤肿瘤细胞。但细胞毒素没有特异性，在杀伤肿瘤细胞的同时还会对健康细胞造成伤害，这限制了它在临床上的应用。抗体一药物偶联物（antibody-drugconjugate,ADC）通过将细胞毒素与能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体结合，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。ADC通常由抗体、接头和药物（如细胞毒素）三部分组成，它的作用机制如下图所示。抗体药物接头细胞凋亡ADC被细胞吞噬3602单克隆抗体及其应用主要用于癌症治疗。2、运载药物优点：位置准确、疗效高、副作用小单克隆抗体+接头+药物（如细胞毒素）=ADC（抗体-药物偶联物）单克隆抗体+药物=“生物导弹”讨论：ADC的抗体和药物各具有什么作用？

抗体主要发挥靶向运输作用，即通过特异性结合靶细胞表面的抗原，将连接的药物输送到靶细胞；药物发挥治疗效应，如杀伤靶细胞。3802单克隆抗体及其应用单克隆抗体+同位素（荧光标记）2、运载药物在特定组织中成像的技术，可定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病。结合荧光标记的单克隆抗体药物3、治疗疾病医药领域，单抗类药物占用重要地位练习与应用

一、概念检测1.下列有关动物细胞融合与植物体细胞杂交比较的叙述，错误的是（

）A.它们的原理都涉及细胞膜的流动性B.都可以用电融合法或PEG融合法诱导融合C.融合前都需用纤维素酶或果胶酶处理细胞D.前者主要是为了获得细胞产品，后者主要是为了获得杂种植株2.科学家以SARS病毒的核衣壳蛋白为抗原，制备出了单克隆抗体。下列相关叙述正确的是（

）A.利用该单克隆抗体可以诊断是否感染SARS病毒B.体外培养单个B淋巴细胞可以获得针对SARS病毒的单克隆抗体C.将等量B淋巴细胞和骨髓瘤细胞混合，经诱导后融合