食品三级质量检验员培训笔记-微生物

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红色字体为重点记忆部分，蓝色字体为整理后发现的问题，绿色字体为培训老师的解答

欢迎各位老师指正

视频：matespace

目录：

001楼：细菌检验基础知识-分类、形态、生理、培养分离

002楼：细菌检验基础知识-生化试验、菌种保存

005楼入口：沙门氏菌

014楼入口：志贺氏菌-待补充

030楼入口：金黄色葡萄球菌

039楼入口：溶血性链球菌

待续。。。

细菌检验基础知识

1、分类

细菌属于原核细胞型微生物。

最精确的方法为遗传学分类方法。

最常用的是经典传统分类法：按照细菌的亲缘关系，界门纲目科属种型株分类。

科：由共同情书关系的属组成，如肠杆菌科；

属：是种的高一级分类单位，通常包含有共同特征或关系密切的种，用以描述微生物的主要

特征，如埃希氏菌属；

种：是分类等级的基本单位，同一种微生物形态、生理学特征和组成成分基本相同，用以描

述微生物的次要特征，如大肠埃希氏菌；

菌株或品系：同种微生物中不同来源的纯培养物，如大肠埃希氏菌CGMCC1.3373。

2、细菌形态学及形态学检查法

细菌形态结构主要指细菌的大小、形状、排列及超微结构。细菌结构与其生理功能、致病性、

免疫性有关。

2.1形态结构

2.1.1基本形态3类：球菌、杆菌、螺旋菌，杆菌是最常见的形态。

2.1.2大小

测量细菌大小的单位为微米Um。球菌以直径表示大小，杆菌以长与宽表示大小，

同一种细菌在不同情况下大小形态也有差别：涂片干燥、固定、染色时细菌收缩；快速生长

的球菌往往呈短杆状。

菌龄与细菌大小的关系受许多因素影响，主要与代谢废物的积累及培养基中渗透压上升等因

素有关。

2.1.3结构

基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、核质；

特殊结构：鞭毛、菌毛、荚膜、芽抱等。

菌毛是什么？-菌毛(Pilus)许多革兰氏阴性菌菌体表面遍布的比鞭毛更为细、短、直、硬、

多的丝状蛋白附属器，也叫做纤毛其化学组成是菌毛蛋白菌毛与运

（Fimbriae）o（Pilin）,

动无关。菌毛可分为普通菌毛（Commonpilus）和性菌毛（Sexpilus）两种。普通菌毛长0.3〜l.Oum,

直径7nm。具有粘着细胞（红细胞、上皮细胞）和定居各种细胞表面的能力，它与某些细

菌的致病性有关。无菌毛的细菌则易被粘膜细胞的纤毛运动、肠蠕动或尿液冲洗而被排除,

失去菌毛，致病力亦随之丧失。性菌毛有的细菌还有1〜4根较长的性菌毛，比普通菌毛而

粗，中空呈管状。性菌毛由质粒携带的•种致育因子（Ferilityfactor）的基因编码，故性菌

毛又称F菌毛。带有性菌毛的细菌称为F+菌或雄性菌，无性菌毛的细菌称为F-菌或雌性菌。

F+菌体内的质粒或染色体DNA可通过中空的性菌毛进入F-菌体内，这个过程称为接合

（conjugation）,细菌的毒性及耐药性等性状可通过此方式传递，这是某些肠道杆菌容易产

生耐药性的原因之一。（摘自百度）

2.2形态学检查法

分为不染色标本检查法和染色标本检查法。

不染色标本检查法：依靠普通显微镜，虽可观察细菌大小、形态，但主要用于观察细菌的动

力。

观察细菌有动力时，应选用新鲜的幼龄培养物（幼到啥程度？-对数期），并在20℃以上室

温中进行，同时应掌握区别细菌真正运动与溶胶的布朗运动。常用的方法有压滴法、悬滴法、

暗视野映光法等。

染色标本检验法：分为单染色法、复染色法、特殊染色法。

观察细菌菌毛应使用鞭毛染色法。

细菌学中最常用的鉴别染色法是革兰氏染色法。

基本步骤为：涂片一干燥一固定一染色

革兰氏染色的结果与培养基成分、培养条件及操作技术等有着密切关系。酒精脱色为关键步

骤。

3、细菌生理学

3.1化学组成

水、蛋白质、糖类、脂类、无机盐、核酸、维生素，各种组成随细菌种类、菌龄、细菌所处

环境不同而有差异。

固形成分占菌体质量15%~25%,其中碳、氢、氧、氮四种元素占90%~97%,其他元素占3%~10%。

水分：占细菌质量75%~85%,芽抱约40%。繁殖体内主要是游离水，芽抱内主要是结合水。

结合水不易蒸发，不冻结，不能作为溶剂，也不能渗透。

蛋白质：分布在菌体各个组成部分，占菌体固形成分50%~80%。除少量白蛋白、球蛋白等

单纯蛋白质外，绝大部分与其他物质结合成复合蛋白质，如核蛋白、糖蛋白、脂蛋白等，其

中核蛋白含量最高。蛋白质是维持细菌生命活动的最基本物质，是细菌酶类的主要组成部分。

核酸：分RNA（细胞质、细胞膜中，约占固形成分10%）与DNA（染色体、质粒中，占固

形成分3%左右）两种。

糖类：占固形成分10%~30%,主要以多糖形式存在，如荚膜多糖、纤维素、淀粉、糖原等。

脂类：细菌体内能量储存场所。

无机盐类：调节剂渗透压和维持酶活性的作用。

其他：生长因子主要是B族维生素，大多数是菌体内的辅酶成分。色素种类很多，一般都是

含氮的有机物。

3.2物理性状

带电现象：菌体蛋白质由许多氨基酸组成。氨基酸是兼性离子，在等电点时，其所带正电荷

与负电荷相等。革兰氏阳性菌pH2~3,革兰氏阴性菌pH4~5。一般培养、染色、血清学试验

中，多数为中性或弱碱性环境，pH值高于细菌等电点，均带负电荷。环境中pH值越高所带

负电荷越多。带电现象与细菌的染色反应、凝集反应、抑菌、杀菌作用等都有密切关系。

多相胶体：原生质中具有多种蛋白质，成分结构各不相同，为多相胶体，因此可同时进行各

种性质不同的生化反应。细胞外浓度较低的化学物质可被原生质中的某一相选择性的吸收浓

缩于细胞内。

表面积：单位体积的表面积比其他大生物的表面积大。每立方厘米葡萄球菌的表面积为

60000cm2„因而细菌代谢活跃，繁殖速度很快，同样对外界环境因素的影响也十分敏感。

布朗运动：在溶液中，因受到分散酶分子的撞击，发生不移动位置的颤动，叫做布朗运动。

光学性质：菌体呈半透明状态，光线照射菌体时，一部分光被吸收，一部分光发生散射，所

以细菌悬液呈现浑浊现象。

渗透性:细菌的细胞壁和细胞膜都有半渗透性,吸收营养和代谢产物均依赖于这种通透作用。

细菌具有坚韧的细胞壁，除能耐受菌体内部的高渗透压外，还能保护细菌在渗透压较低的环

境中不致破裂，但在纯水中也不免吸收水分而胀裂。

3.3代谢

细菌为了生长繁殖,必须从环境中吸取营养物质作为能源和基本原料,并排出不需要的产物,

这些生化过程称为细菌的代谢，包括分解代谢和合成代谢。

3.3.1分解代谢及生化反应

定义：将复杂的营养物质分解为简单的化合物，一方面提供合成菌体成分的原料，一方面从

物质分解中获得能量。

（1）糖类：大多数细菌能利用糖，由于各种细菌所具有的酶系统不同，故分解糖类的能力

也不同。基本的糖代谢过程：多糖一单糖一丙酮酸，而丙酸酮进一步分解的后续过程则因各

种细菌而异。

1）糖发酵试验：经常用于细菌的鉴别。如大肠埃希氏菌，使丙酮酸生成甲酸，并由甲酸解

氢酶分解甲酸生成C02和H2,所以分解葡萄糖时产酸产气；而伤寒杆菌只有使丙酮酸生成

甲酸的能力，分解葡萄糖只能产酸不能产气。

2）V-P试验：产气杆菌能使丙酮酸脱竣，生成中性乙酰甲基甲醉。乙酰甲基甲醇在碱性溶

液中被大气中的氧分子氧化，生成红色化合物，这一反应成为V-P试验阳性。大肠埃希氏菌

不生成乙酰甲基甲醇，故阴性。该实验肠道菌必做。

3）甲基红试验：在上述产气杆菌培养液中，由于2个分子的丙酮酸已变为1个分子的中性

乙酰甲基甲醉（位于有氧无氧分解的交界点上），生成的酸量就相应减少，故pH值相应较

高（PH5.4以上），用甲基红做指示剂时，培养液呈现橘黄色，称为甲基红试验阴性。而大

肠埃希氏菌因分解丙酮酸时不产生乙酰甲基甲醉，产生的酸较多，故培养液的pH值下降到

4.5或更低，因此甲基红指示剂呈红色反应，即阳性。

（2）蛋白质：蛋白质分子量大，不能被菌体直接吸收作为营养基质，有必要先通过细菌的

胞外酶，如蛋白酶，把蛋白质分解成为能透进细胞壁与细胞膜的多肽或氨基酸，才能运转入

菌细胞内被利用。细菌分解蛋白质的过程一般为：蛋白质一蛋白口（音“示”）一蛋白豚一

多肽f氨基酸。不同细菌分解蛋白质的能力不同，可用明胶液化试验或蛋白质消化试验来鉴

别细菌的种类。氨基端进一步分解主要分三种方式进行：脱氨基作用、脱竣基作用、其他分

解作用（生成明跺、生成硫化氢、分解尿素）。

（3）枸椽酸盐利用试验：产气杆菌能利用枸檬酸盐作为碳源，因而在仅含枸檬酸盐而不含

其他碳源的培养基上生长，分解枸椽酸盐生成碳酸盐，使培养基山原来的中性变为碱性，以

嗅麝香草酚蓝为指示剂可显示出培养基由绿色变为深蓝色，即枸檬酸盐阳性。相反，大肠杆

菌不能利用枸椽酸盐为唯一碳源，故不能在此培养基上生长，培养基颜色不变,为阴性反应。

3.3.2合成代谢及其产物

（1）毒素与侵袭性酶：

细菌产生的内毒素和外毒素均有强烈毒性，尤以外毒素为甚。

内毒素为革兰氏阴性菌的细胞壁成分，即脂多糖，其毒性存在于脂类A部分，当菌体死亡

崩解后才游离出来。其性质稳定，加热至160℃2~4h或用强酸、强碱或强氧化剂加温煮沸

30min才灭活。

外毒素是蛋白质，在细菌生活过程中即可释放出菌体。产生外毒素的细菌大多是革兰氏阳性

菌，但也有少数革兰氏阴性菌。其性质不稳定，易被热（50~60℃20~120min）破坏。

某些细菌还能产生具有侵袭性的酶，能损伤机体组织，如产气荚膜梭菌的卵磷脂酶、链球菌

的透明质酸酶等。

（2）热原质：许多革兰氏阴性杆菌能产生一种多糖，将它注入人体或动物体内能引起发热

反应，故称热原质。121℃20min也不能破坏。用吸附剂和特制石棉滤板可除去输液中的大

部分热源质，玻璃器皿上的热原质则需在250℃高温下干烤才能破坏（时间？）。如变形杆

菌、铜绿假单胞菌（旧称绿脓杆菌）。

（3）色素：有些细菌在一定条件下（氧气充足、温度适宜或暴露阳光）能产生各种颜色的

色素。产生的色素有的能溶于水而扩散至周围环境中，另一些色素为脂溶性不溶于水仅使菌

落本身有色。

（4）抗生素：主要是由某些微生物在代谢过程中产生的一种抗生物质，能抑制或杀死某些

生物细胞（主要是微生物和肿瘤细胞）。抗生素主要由放线菌和真菌产生，由细菌产生的较

少，只有多黏芽泡杆菌产生的一组多肽类抗生素（多黏菌素）和由第一芽抱杆菌产生的多肽

类抗生素（杆菌肽）等少数几种。

（5）细胞素：某系细菌种株间产生的一类具有抗菌作用的蛋白质。与抗生素不同，其抗菌

范围狭窄，仅对■产生与细胞素的菌株有近缘关系的细菌才有抑杀作用。由于其具有特异性,

已用于细菌种内的分型。

（6）维生素：维生素是细菌必须的生长因子，有些细菌能自己合成，除供菌体本身所需外，

也能分泌至菌体外。人体肠道内的大肠埃希氏菌能合成维生素B6、B12、K2等，可供人体

所需。

4、细菌的培养和分离技术

4.1用途

通过细菌培养可以研究细菌的形态、代谢活动、生化反应、抗原结构及致病力等，并且对细

菌进行鉴定。

细菌培养应用于食品和环境等样品的细菌学检验，以评价食品或环境的卫生情况。

对患者或带菌者体内（代谢物）的病原菌进行培养，鉴定其种属并对病原菌进行药物敏感性

试验，从而做出确切的病原学诊断，选择有效药物进行治疗。

4.2培养所需条件

4.2.1培养基：细菌培养所使用的培养基应满足细菌生长和鉴别所需要的条件，选择相应的

营养要素和基质成分。

按其用途可分为六大类：基础培养基、营养培养基、选择培养基、鉴别培养基、特殊培养基

和厌氧培养基。

现使用的商业化的培养基为干燥培养基，其中含有培养基的各种成分，使用时只要按一定比

例加入适量水分即可，具有节省制备时间、质量稳定、携带方便等优点。

4.2.2细菌培养的其他条件

合适的酸碱度:对细菌的生长繁殖影响很大。多数病原菌最适宜的酸碱度在pH7.2~7.6之间，

个别细菌如霍乱弧菌可在碱性PH8.4~9.2环境中生长。许多细菌在培养过程中因分解糖类而

产酸，影响了本身的生长，因此有时需在培养基中加入磷酸氢二钾、磷酸氢二钠等缓冲剂,

防止溶液pH值波动过大.

适宜的温度：一般细菌在15~40℃都能生长，但多数病原菌的最适生长温度为36~37℃。

一定的湿度：细菌生长需要•定的水分，以利于营养物质的渗透。干燥不利于细菌的生长。

必要的气体环境：需氧菌须在有氧环境下生长，厌氧菌须在无氧条件中才能生长。牛布鲁氏

菌及脑膜炎球菌初分离时，必须在培养环境的大气中增加5%~10%的CO2o

4.3细菌培养法

根据对氧气需求不同可分为需氧培养和厌氧培养。

根据培养基的物理状态不同分为液体培养、固体培养、半固体培养。

4.3.1液体培养：不同类型的细菌在液体培养基中会出现不同的生长现象。

（1）浑浊：细菌向四周均匀扩散，出现肉眼可见的不同程度的均匀浑浊生长。

（2）沉淀：少数排列成链状的细菌可呈沉淀式生长，沉淀物上面的液体清澈，如链球菌。

（3）菌膜：专性需氧菌多生长在液体表面，形成菌膜，如枯草杆菌。

4.3.2固体培养

将检材中的目标对象菌用人工培养法分离出来成为纯种，称为分离培养。

常用的分离方法有平板划线分离法利涂布法。

分离培养可使细菌在平板培养基表面生长。

如果接种的细菌能适当的分开，经一定时间培养后，便形成单•菌落。

菌落的大小、形状、色泽、边缘、透明度、湿润度、溶血现象等特点则因细菌的种类和所用

培养基不同而异。

菌落的这些特征是识别细菌的重要依据。

当细菌在固体培养基表面密集生长时，多个菌落融合在一起，称为菌苔。

4.3.3半固体培养

细菌在半固体培养基中生长时，无鞭毛的细菌沿着穿刺线生长，有鞭毛的细菌，除了沿穿刺

线生长外，还可看见从穿刺线向外扩散生长的趋势。

因此，以穿刺法将细菌接种于半固体培养基中有助于鉴别细菌是否有动力，是否有鞭毛。

细菌检验基础知识

本帖最后由浑身是血于2011-3-1523:18编辑

5、细菌的生物化学试验

利用生物化学的方法来检查这些代谢产物以鉴别细菌的方法称为细菌的生物化学试验，简称

生化试验。

5.1糖类代谢试验

5.1.1糖（醇）类发酵试验

不同细菌含有发酵不同糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同。即使某些能发酵

同样的糖（醇），但其产物也不同，有的产酸产气，有的产酸不产气，可根据这些特点来鉴

别细菌。

大致可分为：

液体发酵管：无糖肉汤或蛋白陈水中，加入1%糖（醇）类指示剂，一支小玻管，经灭菌后

备用。若被检细菌对营养要求较高时，则在试验前加入2%~5%无菌血清。

半固体发酵管：在液体糖（醇）发酵培养基中，加入0.3%~0.5%琼脂，溶化后分装试管，灭

菌后让试管直立，使琼脂凝固，做成高层培养基，接种细菌应用接种针穿刺接种。

固体发酵管：此类培养基一般不常用，仅用于营养要求较高的某些细菌，在含糖类及5%~10%

血清琼脂斜面上进行发酵试验。另外固体高层糖发酵管，可用于厌氧细菌糖发酵试验，如产

气荚膜杆菌在含糖的固体高层发酵管中出现汹涌发酵（产生大量气体）。

双糖（或三糖）高层斜面发酵管：这种培养基含有葡萄糖和乳糖（或再加蔗糖），这两种糖

（或三种糖）混在一起，制成高层斜面（有没有直径与高的比例？），其中葡萄糖和乳糖（或

蔗糖）比例为1:10。

各种糖（醇）发酵管含糖（醇）的浓度，一般为0.5%~1%,有时可达2%。经121℃20~30min

灭菌，容易水解变质，特别是在碱性溶液中更易破坏。

故糖（醇）发酵培养基常用高压蒸汽115°C15min灭菌。

应用的糖（醇）种类很多：

单糖：葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、果糖、木胶糖、半乳糖；

双糖：乳糖、麦芽糖、蔗糖、覃糖（啥糖？-音qin2,应该是海藻糖）；

多糖：菊糖、肝糖、糊精、淀粉；

醇：甘露醇、卫矛醇、山梨醇、侧金盏花醇、肌醇、丙三醇（甘油）；

糖甘：水杨昔等。

最常用的指示剂有酚红、溟麝香草酚蓝、嗅甲酚紫、酸性复红。

前两者颜色反应较敏感，但稳定性差，后二者比较稳定。特别是一些迟缓发酵的细菌，培养

时间长，应用后二者指示剂。

酚红pH6.8（黄色）~pH8.4（红色）

5.1.2甲基红试验（methylred）

甲基红指示剂变色范围是PH4.4（红色）~pH6.2（黄色），产气肠杆菌分解葡萄糖产生丙酮

酸，但又很快将丙酮酸脱竣，转化成醇等物质，则培养液的pH值仍在6.2以上，故此时加

入甲基红指示剂，培养液呈黄色，此为阴性对照菌。阳性对照菌是大肠埃希氏菌，呈现红色

为阳性。

5.1.3V-P试验

伏-普试验，目的是检查细菌是否能分解葡萄糖，产生乙酰甲基甲醇。

阳性对照菌是产气肠杆菌，分解葡萄糖（被检细菌接种到葡萄糖蛋白陈水中，36℃18-24h）

产生丙酮酸，再将丙酮酸脱竣形成乙酰甲基甲醉，在碱性条件下（乙液-40%KOH溶液），被

氧化为二乙酰，与培养基蛋白豚中精氨酸等所含的胭基（甲液-6%a一蔡酚酒精溶液？）结合，

通常在lOmin内形成红色化合物。

若不显色，放置于50℃水浴2h,或放置于37℃培养箱中4h,充分摇动，观察培养液反应

结果，不显红色为阴性，阴性对照菌是大肠埃希氏菌。

5.1.4ONPG试验

邻硝基酚-B-D-半乳糖甘的缩写，利用该试剂可以检查被检细菌有无B-半乳糖甘酶和渗透酶,

发酵乳糖的细菌具有这两种酶。

渗透酶将乳糖分子带入菌细胞内，而半乳糖甘酶可将乳糖的B-半乳糖甘链切断，产生葡

萄糖和半乳糖。

迟缓发酵乳糖的细菌，缺乏渗透酶，而ONPG渗入菌细胞内，被B-半乳糖甘酶分解产生邻

位硝基苯酚，一般在20~30min内显黄色，为阳性，对照菌为枸椽酸盐杆菌和亚利桑那菌。

方法：将被检细菌接种到1%的乳糖肉汤琼脂培养基上，37℃培养过夜。取菌苔接种于0.25ml

生理盐水中做成悬液。加入1滴甲苯，并充分振摇，使酶释放。在悬液中再加入ONPG液

0.25ml,混匀，置于37℃培养箱或水浴箱中，分别在20min和3h后观察培养液反应结果

不出现黄色者为阴性，对照菌是沙门氏菌。

5.1.4氧化发酵试验

测定糖类的氧化或发酵及糖类未被利用的代谢类型。

氧化型：细菌在分解葡萄糖过程中，必须有氧分子参加。无氧环境中不能分解葡萄糖。

发酵型：在分解葡萄糖的过程中，可以进行无氧降解。发酵型细菌无论在有氧或无氧的环境

中都能分解葡萄糖。

产碱型：不分解葡萄糖的细菌。

将待检菌同时穿刺接种两支HL培养基，其中一支培养基滴加无菌的液体石蜡油，高度不少

于1cm,37℃培养48h或更长，观察反应结果。

培养基变黄色为产酸。

两支培养基均产酸为发酵型细菌，仅不加石蜡的培养基产酸的是氧化型细菌，两支培养基均

不变化的为产碱型细菌。

5.2蛋白质、氨基酸及含氮化物代谢试验

5.2.1苯丙氨酸脱氨酶试验

原理：某些细菌具有苯丙疑酸脱氨酶，可使苯丙氨酸脱氨形成苯丙酮酸，苯丙酮酸与三氯化

铁发生螯合作用，形成绿色络合物。

方法:将被检细菌的斜面培养物（先增菌）大量移种到苯丙氨酸琼脂斜面上,37℃培养18-24h,

再从斜面上滴加10%三氯化铁溶液4-5滴，使其自斜面培养物上缓缓流下（?多慢，快了会

怎样？），观察结果。

结果：溶液出现绿色为阳性，对照菌是变形杆菌；不变色为阴性，对照菌是产气肠杆菌。

5.2.2脱竣酶试验

原理：某些细菌具有某种氨基酸的脱竣能，可使氨基酸脱去炭基产生胺和二氧化碳，胺使

pH值＞7,此时指示剂溪麝香草酚蓝由绿色变为蓝色。

滨麝香草酚蓝酸性显黄色，碱性显紫色。

方法：将被检细菌接种到两支脱竣酶培养基中，其中一支不加氨基酸，另一支加赖氨酸/精

氨酸/鸟氨酸，再在培养基上覆盖一层灭菌的液体石蜡，37℃培养18-24h,观察结果。

结果：两管培养基均含有葡萄糖，产酸，浪麝香草酚蓝山蓝变黄。含有氨基酸的一管出现脱

竣基降解作用，产生碱性反应，浪麝香草酚蓝再由黄变蓝，为阳性。

鸟氨酸阴性对照菌为阴沟肠杆菌，显黄色。

5.2.3靛基质（口引咪）试验

原理：某些细菌能分解蛋白豚中的色氨酸，产生靛基质（写I躲），靛基质与对二甲氨基苯甲

醛结合，形成玫瑰红色化合物。

方法：将被检细菌接种到胰蛋白陈水培养基中，37c培养24-48h后，滴加数滴试剂于培养

基液面，轻轻摇动（不可剧烈振动），观察结果。

结果：出现红色为阳性，对照菌是大肠埃希氏菌；出现黄色为阴性，对照菌是产气肠杆菌。

5.2.4硫化氢试验

原理：某些细菌能分解含硫的氨基酸（胱氨酸、半胱氨酸等），产生硫化氢，硫化氢与培养

基中的铅盐或铁盐反应，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。

方法：将被检细菌以接种针穿刺接种于醋酸铅或双糖铁培养基（哪双糖？-乳糖+葡萄糖）中，

37℃培养24h,观察结果。

结果：有黑色出现为阳性。

说明：在硫化氢试验的培养基加入硫代硫酸钠的作用是还原作用，以保持培养基处于还原状

态，是产生的硫化氢不被氧化。

产硫化氢较少的菌种可在试管口放置醋酸铅试条。

5.2.5尿素酶试验

原理：某些细菌具有尿素酶，在含有尿素的培养基中，分解尿素产生氨，使培养基呈碱性,

此时培养基中的酚红指示剂显红色。

方法：将被检细菌接种的尿素固体斜面培养基上，36℃培养4h检查一次，再每天检查诙，

培养5天，观察结果。

结果：出现红色为阳性，对照菌为变形杆菌；变色为阴性，对照菌是大肠埃希氏菌。

5.3枸椽酸盐利用试验

原理：

枸檬酸盐培养基系一综合性培养基，其中枸椽酸钠为碳的唯一来源，磷酸二氢钱是氮的唯一

来源。

有的细菌能利用枸檬酸钠为碳源，能在培养基上生长，并且能分解枸檬酸盐，最后产生碳酸

盐，使培养基变为碱性。

培养基中的澳麝香草酚蓝指示剂由绿色变为深蓝色。

不能利用枸椽酸盐为碳源的细菌在该培养基上不生长，培养基不变色。

方法：

将被检细菌的菌悬液（啥是菌悬液？-挑取菌苔后，洗至生理盐水中）接种到枸椽酸盐培养

基上，37℃培养24h,观察结果。

结果：

培养基上有菌生长，培养基变为深蓝色为阳性，对照菌是产气肠杆菌；若培养基不变色，则

继续培养7天，培养基仍不变色者为阴性，对照菌为大肠杆菌。

5.4呼吸酶类试验

5.4.1氧化醐试验

原理：某些细菌具有氧化酶，能将二甲基对苯二胺或四甲基对苯二胺试剂氧化（先使细胞色

素C氧化，电子传递体）成红色配类化合物。

方法：取白色洁净滤纸蘸取待测菌落，加盐酸二甲基对苯二胺溶液1滴；Ewing氏改进法,

再加a-蔡酚溶液1滴。

结果：阳性者立即出现粉红色，并逐渐加深，变为淡紫色，再到深紫色，Ewing氏改进法阳

性于0.5min内呈现鲜蓝色，对照菌为绿脓杆菌（铜绿假单细胞菌）；阴性者颜色无变化,Ewing

氏法阴性为2min内不变色，对照菌为大肠杆菌。

1%盐酸二甲基对苯二胺溶液要避免接触含铁物质，防止出现假阳性反应。此试剂应少量新

鲜配制，于冰箱内避光保存，也可购置氧化酶试条。

该实验用于分辨革兰氏阴性杆菌中的肠杆菌科（阴性）与弧菌科（阳性）。

5.4.2触酶活力试验

原理：具有触酶的细菌能催化过氧化酶，放出生态氧，继而形成氧分子，出现气泡。

方法：取3%过氧化氢0.5ml,滴加到不含血液的被检细菌琼脂培养物上，或滴加到不含血液

的肉汤培养物中，观察结果。

结果：培养物出现气泡者为阳性。

说明：过氧化氢浓度过高（30%）会产生气泡出现假阳性；血液中含有触能，容易出现假阳

性。

5.4.3硝酸盐还原试验

原理：某些细菌能将培养基中的硝酸盐还原为亚硝酸盐，亚硝酸盐与醋酸作用生成亚硝酸,

亚硝酸与试剂中的对氨基苯磺酸作用生成重氮苯磺酸，再与a-蔡胺结合，生成N-a一蔡胺偶

氮苯磺酸（红色）。

方法：将被检细菌接种于硝酸盐培养基中，37℃培养1~4天，每天吸取培养物2ml,加甲液

（对氨基苯磺酸0.8g,5mol/L醋酸100ml）和乙液（a-蔡胺0.5g,5mol/L醋酸100ml）各

数滴，同时以为接种细菌的培养基作对照，观察结果。

结果：出现红色为阳性。

说明：亚硝酸盐在自然界分布很广，容易污染试剂，硝酸盐不纯或保管不妥也可能含有亚硝

酸盐，因此必须做空白对照；繁殖迅速而还原硝酸盐能力强的细菌如果培养时间过久，可能

将亚硝酸盐全部分解为氨和氮，出现假阴性反应，故需每天试验，空白对照。

5.5毒性酶类试验

5.5.1溶血试验

原理：某些细菌在代谢过程中，产生溶血素，能使人或动物的红细胞发生溶解。

方法：

1）平板法：将被检细菌接种到血液琼脂平板培养基上，37℃培养24h。

2）试管法：取被检细菌16-18h肉汤培养物若干，加等量经生理盐水洗涤三次的2%羊红细

胞悬液，置于37℃水浴箱中，30min后观察结果。

结果：

1）平板法：若菌落周围出现透明的溶血环，为完全溶血（B溶血），菌落周围出现绿色溶血

环，为不完全溶血（a溶血），无溶血环为不溶血（Y溶血）。

2）试管法：液体澄清透明为溶血，阳性。

5.5.2链激酶试验

原理：A群链球菌在代谢过程中，产生链激酶，能激活血液中的纤维蛋白酶原为溶纤维蛋白

酶，促使纤维蛋白凝块溶解。

方法：取血浆0.2ml,放入灭菌小试管中，加无菌生理盐水0.8ml,再加被检细菌18-24h肉

汤培养物0.5ml,充分混匀后，再加入0.25%氯化钙水溶液0.25ml,置于37C水浴中，观察

结果。

结果：lOmin内血浆先凝固，而后又开始溶解，溶解时间与链激能含量成正比。链激醐含量

多时:20min内凝固的血浆完全溶解。如无变化，应在水浴中持续2h、24h,分别观察结果。

血浆凝块完全溶解者为阳性，时间越短表明毒性越强。24h血凝块仍不溶解者为阴性。

5.5.3血浆凝固酶试验

原理：某些细菌能产生血浆凝固酶，分两种，•种结合在细菌细胞壁上，遇到血浆直接作用

于血浆的纤维蛋白，使细菌凝成颗粒状，使用玻片法；另种分泌到细菌细胞外，称为游离

血浆凝固酶，能使血浆中的纤维蛋白原变为纤维蛋白，使用试管法试验。

方法：

1）玻片法：取生理盐水2滴，分别滴于载玻片上，以接种环挑取被检细菌菌落，放在2滴

生理盐水中，研磨成浓菌悬液。在1滴悬液中加1滴未稀释的血浆，另一滴加入1滴生理盐

水作为对照，迅速摇动，观察结果。

2）试管法：取3支小试管，每支加1:4稀释的新鲜血浆0.5ml,其中1支加被检细菌生理盐

水悬液或肉汤培养物0.5ml,另••支加阳性菌株生理盐水悬液或肉汤培养物0.5ml作阳性对

照，再一支加生理盐水或肉汤培养液0.5ml作阴性对照。3支试管置于37℃水浴箱中，每隔

30min观察一次结果。

结果：

1）玻片法：若在加血浆的1滴中迅速出现凝固颗粒，在加生理盐水对照的1滴中未出现凝

固颗粒，为阳性；若超过2min才开始出现凝固颗粒者不作阳性（多为非致病性）。

2）试管法：6h内，若试验管和阳性对照管出现凝固，阴性对照管不出现凝固，为阳性；多

数阳性细菌在0.5-lh内发生凝固。

5.6嗜盐试验

原理：在高于3%的氯化钠培养基上不生长或生长不好，但能在无言培养基上生长的，称为

非嗜盐菌，如肠杆菌科。能在3%-6%氯化钠培养基上生长，但在无盐培养基上不生长，称为

嗜盐菌，如副溶血性弧菌。在无盐和高盐培养基上均能生长，但长得不茂盛，称为耐盐菌,

如葡萄球菌、铜绿假单细胞菌。

方法:取被检细菌分别接种到1支无盐葡萄糖蛋白陈水和一支5%-6%氯化钠葡萄糖蛋白陈水

中，37℃培养6-24h,观察生长情况。

结果：培养物出现浑浊生长为阳性。

6、菌种保存

6.1普通营养琼脂培养基保存法

将细菌的普通琼脂斜面培养物放于4℃冰箱或室温10-16℃冷暗处保存。

用这种方法只可保存数天，只作暂时保存用。

6.2半固体培养基穿刺保存法

用穿刺接种法将细菌培养物接种于半固体培养基内，37℃培养18-24h后，加一层厚度约为

1cm的无菌液体石蜡，置于室温中保存。肠道杆菌及葡萄球菌等用这种方法一般可保存3-6

个月。传代移种时，将半固体菌种管倾斜，使液体石蜡流至一边，再取少量菌苔移种于新的

培养基（液体培养基复苏能力比固体强）。将蘸有少量液体石蜡的接种环浸于95%酒精中片

刻，再烧灼灭菌，以免直接在酒精灯下烧灼时，液体石蜡四溅，引起污染。

6.3冷冻干燥保存法

即将要保存的微生物样品先经过低温预冻，然后在低温状态下进行减压干燥（升华干燥）。

此法保存菌种时间长，如沙门氏菌等肠杆菌科菌种能保存20年之久。

沙门氏菌

本帖最后由浑身是血于2011-4-1811:32编辑

1、简介：

通过人或动物的消化道传播，

在各类食物中毒案例中排前两位，

主要并发症为肠胃炎、败血症，

常见的被污染食品为：

肉制品：美国约20%,日本约10.3%,英国约9.9%

蛋制品：3.9%~43.7%,取决于蛋壳污染程度

蔬菜：欧美生食较多

污染的原因：

生前带菌交叉污染

带菌者污染

患病者污染

水源污染

2、生物学特性：

肠杆菌科，沙门氏菌属，6个亚属l~VI,亚属川称为亚利桑那菌。

沙门氏菌为革兰氏阴性菌，短杆菌，无芽抱，无荚膜，周生鞭毛，有动力（也有无动力的变

种），

需氧兼性厌氧，35℃~37℃为最适生长温度，pH6.8~7.8为最适，

能在营养琼脂上生长，菌落直径2~3mm,圆形或卵形，无色半透明，液体培养基中混合均

匀生长。

不发酵乳糖、蔗糖，不液化明胶，不能分解蛋白质，也不产生靛基质，不分解尿素，有规律

的发酵葡萄糖并产生气体。

与埃希氏菌属的主要区别在硫化氢反应和乳糖反应。

对热及外界环境抵抗力中等，60℃20-30min即被杀死，普通水中不易繁殖但可存活2~3周，

自然环境粪便中生存1~2月，干燥垫草中生存8~20周，冰箱中生存3-4月，-5℃存活10月；

对化学药品抵抗力较弱，对氯霉素敏感，5%苯酚5min即可杀死，胆盐、煌绿及孔雀绿抑制

作用大但对肠杆菌抑制作用弱，可用以制备选择性培养基。

3、抗原构造和分类：

菌体抗原，记为O抗原，多糖-类脂-蛋白质复合物，加热至100℃2.5h不能被破坏，也不能

被乙醇和0.1%石碳酸破坏，多糖决定O抗原特异性，用于分群。

鞭毛抗原，记为H抗原，蛋白质，不耐热，60℃15min或乙醇处理后被破坏，沙门H抗原

有两种，第一相特异相，第二相非特异相，用于分型。

表面抗原，要求掌握Vi抗原，糖脂，60℃30min或100℃5min即可破坏，可阻止O抗原与

0抗体的特异性凝集反应，但Vi抗原被破坏后O抗体仍可和相应的。抗原凝集。

4、变异性

4.1S-R初次分离菌株一般是光滑型，经长期人工传代培养，菌体特意多糖抗原丧失，在盐水

中自凝。

4.2H-0有鞭毛的细菌失去鞭毛的变异。

4.3位相变异双相H抗原的沙门氏菌变成只有其中某一相H抗原的单相菌。

沙门氏菌血清学分型时，如遇到单相菌，特别是只有第二相时，需反复分离和诱导出第相

方可鉴定。

4.4V-W失去Vi抗原

5、检验原理

食品中沙门氏菌含量较少，且常由于食品加工过程使其受到损伤而处于濒死状态，所以对某

些加工食品（哪些不要？-一般生鲜蛋或肉类）必须经过前增菌处理，即无选择性的培养基

使其恢复活力，再进行选择性增菌，是沙门增殖，其他大多数细菌收到抑制。

利用沙门的生化特征，借助于三糖铁、靛基质、尿素、KCN、赖氨酸等试验可与肠道其他菌

属相鉴别。

通过菌种特殊的抗原结构（O抗原为主），可以把他们分辨出来。

复活（前增菌）一培养（选择性增菌）一分离（平板划线分离培养）一鉴定（生化鉴定/血

清鉴定）

6、操作步骤

6.1前增菌

25g（ml）检样放入225ml缓冲蛋白陈水BPW（BufferedPeptoneWater）均质（上课时强调

了拍打式均质器的优越性），36c±1℃培养8~18h（时间按照什么来定？-一般•天不到18

小时）。

酸性或碱性样品需用lmol/ml无菌氢氧化钠或盐酸调节pH至6.8+0.2,用试纸测量。

6.2增菌

摇动增菌培养物，移1ml转种于10ml四硫磺酸钠煌绿TTB增菌液中,42℃±培养18~24h。

适合除伤寒副伤寒沙门氏菌培养。浅黄色。

同时，移1ml转种于10ml亚硒酸盐胱氨酸SC增菌液中，36℃±1℃培养18~24h。适合伤寒

副伤寒沙门氏菌培养。

亚硒酸氢钠对革兰氏阴性菌G-有毒，磷酸盐中和毒性，促沙抑大，亚硒酸盐还原时.，pH±

升，乳糖分解产酸，磷酸盐缓冲，维持培养基中性。煮沸，流动蒸汽灭菌，不能高压灭菌。

浅棕色？待查。

6.3分离

6.3.1亚硫酸钮（BS）琼脂平板：强选择性，强烈抑制大肠类，略抑制沙门，需延长培养时

间，无乳糖指示系统，有硫化氢指示系统。还原亚硫酸锈为硫化钝，产物为黑色或褐色，亚

属川有金属光泽。灭菌方式为煮沸3次。本身为绿色。

用接种环取增菌液1环，划线接种，36℃±1℃培养40~48h。

典型菌落为黑色或褐色，亚利桑那菌为黑色有金属光泽。

6.3.2三种平板任选其一，用接种环取增菌液1环，划线接种，36℃±1℃培养18~24h。

木糖赖氨酸脱氧胆盐XLD：分解乳糖粉红色？待确认。产生硫化氢，黑色中心周边无色。

HE琼脂：分解乳糖为黄色，不分解乳糖为蓝绿色或蓝色。

科玛嘉沙门氏菌显色平板：沙门氏为紫红色，埃希氏菌为蓝色。

6.4生化试验及初步血清学鉴定

6.4.1初步鉴定

平板上挑取2~5个典型或可疑菌落，分别接种三糖铁TSI（表面划s,内部穿刺）和赖氨酸

脱竣酶（和营养琼脂培养基？偶上课的时候没听到--b-营养琼脂要同时做），36℃±1℃培养

18~24h,必要时延长到48小时（按照什么延长？）。

三糖铁阴性为绛红色，阳性为黄色，

大肠发酵乳糖，令三糖铁斜面和底层变为黄色。

大肠？具有某种氨基酸的脱竣酶，可使氨基酸脱去竣基产生氮和二氧化碳，氨使pH>7,此

时指示剂浪麝香草酚蓝显蓝色（偏紫色），酸性为黄色。

因此可排除三糖铁琼脂内斜面产酸（阳性）、底层产酸（阳性）、赖氨酸脱竣酶试验阴性（蓝

色？）的菌株。

其他反应结果均有沙门氏菌属的可能，也均有不是的可能。

三糖铁反映结果中+（-）和+/-的表达意义有什么区别？-+（-）表示有可能阳性也有可能阴性,+/-

为大多数阳性小部分阴性

6.4.2生化试验

初步鉴定的同一批菌落，接种尿素琼脂PH7.2和胰蛋白豚水（靛基质）、氟化钾培养基，36℃

±1℃培养18~24h,必要时延长到48小时。

靛基质试验（口引跺）：

埃希氏菌能分解蛋白陈中的色氨酸，产生的靛基质与对二甲氨基苯甲醛结合，形成红色化合

物。

将被检细菌接种到胰蛋白陈水培养基中，培养后滴加数滴试剂（啥试剂？）于培养基液面，

轻轻摇动，观察结果。

出现红色为阳性，出现黄色为阴性。阳性对照是埃希氏菌，阴性对照是产气肠杆菌。

尿素酶试验：

某些细菌具有尿素酶，如变形杆菌，在含有尿素的培养基中，能分解尿素，产生氨，使培养

基呈碱性，此时培养基中酚红指示剂显纠色。

把被检细菌接种到尿素固体斜面培养基上，培养4h检查一次，再每天检查••次，培养5天，

观察结果。

出现红色为阳性，阳性对照菌是变形杆菌，阴性对照菌是大肠埃希氏菌。

氟化钾试验：没说，偶确定没说。。。

反应序号A1：硫化氢阳性，靛基质阴性，尿素琼脂阴性，氟化钾阴性，赖氨酸脱竣酶阳性

为典型反应，判定为沙门氏菌属。尿素、氟化钾、赖氨酸脱竣基三项中有两项异常，为非沙

门氏菌。

反应序号A2：硫化氢阳性，靛基质阳性，尿素琼脂阴性，氟化钾阴性，赖氨酸脱竣酶阳性，

需补做甘露醉和山梨酥试验。沙门氏菌靛基质阳性变体两项都是阳性，但需要结合血清学鉴

定结果进行判定。

方法不知道。

反应序号A3：硫化氢阴性，靛基质阴性，尿素琼脂阴性，氟化钾阴性，赖城酸脱竣酶多数

阳性，少数阴性，补做ONPG,阴性为沙门氏菌，赖氨酸脱竣醐基本阳性，只有甲型副伤寒

沙门阴性。

ONPG即O-nitrophenyl-B-D-galactopyranside邻硝基酚-B-D-半乳糖甘。发酵乳糖的细菌有两

类酶，渗透酶和B-半乳糖甘酶，渗透酶将乳糖分子带入菌细胞内，B-半乳糖甘酶可将乳糖

的B-半乳糖甘链切断，产生葡萄糖和半乳糖。迟缓发酵乳糖的细菌缺乏渗透酶，ONPG渗入

细胞内，被B-半乳糖甘酶分解产生邻位硝基苯酚，显黄色。将被检细菌接种到1%的乳糖肉

汤琼脂培养基上，37℃培养过夜，取菌苔接种于0.25ml生理盐水中做成悬液，加入1滴甲

苯，并充分震摇，使酶释放。在悬液中再加入ONPG液0.25ml,混匀，置于37℃培养箱或

水浴箱中，分别在20min和3h后观察培养液反映结果。呈黄色为阳性，一般在20~30min

即显黄色，不出现黄色为阴性。阳性对照菌为枸缘酸盐杆菌、亚利桑那菌，阴性对照菌是沙

门氏菌。

6.4.3自动鉴定方法

根据初步鉴定结果，从营养琼脂平板上挑取可疑菌落，用生理盐水制备成浓度适当的菌悬液

（多少浓度适当？），使用API20E生化鉴定试剂盒或VITEK全自动微生物鉴定系统进行鉴定。

6.5A-F多价诊断血清凝集试验

当图片染色和生化反应都疑为沙门氏时，应用沙门氏属A-F群多价0诊断血清进行凝集试验，

同时用生理盐水作对照。

6.5.1抗原准备

1.2%~1.5%琼脂培养物作为玻片凝集试验的抗原。

0血清不凝集时，将菌株接种在2%~3%琼脂培养基上再检查，挑取菌苔于1ml生理盐水中

做成浓菌液，酒精灯火焰上煮沸后在检查。检查是否Vi抗原作用。

H抗原发育不良时，将菌株接种在0.55%~0.65%半固体琼脂平板中央，菌落蔓延生长时，在

其边缘部分取菌检查，或将菌株通过装有0.3%~0.4%半固体琼脂的小玻管1~2次，自远端取

菌培养后在检查。（如何通过小玻管？-穿刺）

6.5.2多价菌体抗原。鉴定

在玻片上划出两个约lcmX2cm区域，挑取1环待测菌，各放（需确定标准动作）1/2环于

玻片上的每一个区域上部，在其中一个区域下部加入一滴生理盐水，作为对照。再用无菌接

种环或针分别将两个区域菌落研成乳状液。将玻片倾斜，摇动混合1分钟，并对着黑暗背景

观察，任何程度的凝集现象皆为阳性反应。

6.5.3多价鞭毛抗原H鉴定

与菌体抗原类同。

7、检查结果

综合生化试验和A-F多价诊断血清凝集结果，报告：25g（ml）样品检出或未检出沙门氏菌，

必要时将菌株送至专业检验检疫部门进一步血清学鉴定。

志贺氏菌

本帖最后由浑身是血于2010-12-1317:39编辑

1、生物学特性

革兰氏阴性短杆菌，长2~3um,宽0.5~0.7um,无芽泡，无荚膜，无鞭毛，不运动，鞭毛

是与沙门氏菌的显著不同点。

兼性厌氧，营养要求不高，营养琼脂上生长良好，培养18~24h,圆形菌落，微凸，光滑，

湿润，无色半透明，边缘整齐，直径约2mm（宋内氏扁平粗糙）。最适温度37℃,最适pH

值7.2~7.4,肉汤培养基中均匀浑浊生长，不形成沉淀。

不发酵乳糖（宋内氏迟缓发酵），发酵葡萄糖一般不产气（福氏6型微量产气），不产生硫化

氢。

主要鉴别特征为不运动，对各种糖的利用力较差，并且在含糖培养基内不形成气体。

1.1抗原构造与分型

0抗原和K抗原，无H抗原。。抗原是分类依据，有群特异性和型特异性两种。根据生化反

应和0抗原不同，将志贺氏菌分为4个血清群和40+血清型。。抗原100℃60min不受破坏。

K抗原能阻断0抗原与相应抗血清的凝集作用。加热至100℃保持60min可消除K抗原的阻

碍作用。

1.2抵抗力

对理化因素抵抗力弱，外界环境中宋氏最强，福氏次之，痢疾最弱。潮湿土壤中存活34天，

37℃水中20天，冰中3个月，20℃粪便11天，日光直射30min可杀死，56~60℃19min即

可杀死，1%酒碳酸中浸泡15-30min可杀死，高浓度胆汁可抑制生长，对磺胺、链霉素、氯

霉素敏感，但易产生耐药性。

2、实验原理

样品在GN增菌液中增菌6~8h后，HE或SS及麦康凯或EMB选择性平板进行分离，三糖铁

初步生化试验，半固体培养基动力试验，如三糖铁上：斜面阴性，底层阳性，不产气，硫化

氢阴性，无动力，可疑为志贺氏菌。

3、操作步骤

3.1增菌

25g检样加入装有225mlGN增菌液的500ml广口瓶内（必要性确认），打碎研碎乳化，于

36℃培养6~8h,当培养液出现轻微浑浊时终止培养。

志贺氏菌在常温存活期较短，24h内检验，保存在冰箱，更长时间应放低温冰箱。GN抑菌

效果差，时间过长易使杂菌繁殖。

3.2分离培养

取增菌液1环，HE或SS平板，麦康凯或EMB平板，各划一个平板，36℃±1℃培养18~24h,

志贺氏菌在这些培养基上生成无色透明不发酵乳糖的较小菌落。

3.3初步生化试验

挑取平板上可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各一管。2~5个菌落。36℃±1℃培

养18~24h,分别观察结果。

弃去：

三糖铁琼脂斜面上蔓延生长的培养物；

18~24h内发酵乳糖、蔗糖的培养物；

不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培养物；

产气的培养物；

有动力的培养物；（怎么算有动力？这我没听到-出现放射性生长为有动力）

产生硫化氢的培养物。

其他的做血清学分型和进一步生化试验。

3.4血清学分型

挑取三糖铁培养物，做玻片凝集试验。

4种志贺氏菌多价血清检查，不凝集一煮沸后再检查；凝集一用Al、A2、B群多价、D群血

清分别试验。（?）

B群福氏一群和型因子血清分别检查。（??）

福氏先用群因子血清检查，再根据群因子血清出现凝集的结果，依次选用型因子血清检查。

（???）

4种多价血清不凝集的菌株，用鲍氏多价1,2,3,分别检查，并进一步用1~15各型因子血清检

查。

鲍氏不凝集，用痢疾志贺氏菌3-12型多价血清及各型因子血清检查。

3.5进一步生化试验

血清学分型的同时，做葡糖糖镂、西蒙氏柠檬酸盐和赖氨酸、鸟树酸脱竣酶、PH7.2尿素、

氟化钾生长，水杨甘和七叶背的分解。

志贺氏菌的培养物均为阴性结果（宋内氏、鲍氏13型鸟氨酸阳性），氧化酶阴性，革兰氏阴

性。

已判定为志贺氏菌属的培养物，进一步做50g/L乳糖、甘露糖、棉籽糖、甘油发酵、靛基质

试验。

金黄色葡萄球菌

本帖最后由浑身是血于2010-12-1415:03编辑

葡萄球菌的菌落颜色•般分为三种：金黄色、白色、柠檬色。

《伯杰氏鉴定细菌学手册》（第8版）按照生理化学组成将其分为：金黄色葡萄球菌、表皮

葡萄球菌、腐生葡萄球菌。

腐生一般为非致病菌，表皮偶尔致病，金葡是引起人类疾病的主要葡萄球菌。

金葡菌除了可引起皮肤组织炎症外，还可以产生肠毒素，

肠毒素是一种外毒素，有耐热性，加热至100℃30min不被破坏，要使其完全破坏需煮沸2h。

引起人类食物中毒，毒素型食物中毒（还有其他哪些类别的食物中毒？）。

金葡菌对人的健康是一种潜在危险，所以检查食品中的金黄色葡萄球菌及数量具有重要的实

际意义。

1、生物学特性

球形，直径为0.4~1.2um,致病性葡萄球菌般较非致病性菌小，且各个菌体大小及排列

也较整齐。

多个平面不规则分裂，堆积成为葡萄串装排列，

液体培养基中生长，常呈双球或短链装排列。

无鞭毛无芽抱，一般不形成荚膜，易被碱性染料着色，革兰氏阳性，

衰老、死亡、或被白细胞吞噬后转为革兰氏阴性G-,对青霉素有抗药性的菌株也为G-。

营养要求不高，普通培养基上生长良好，

需氧兼性厌氧，最适生长温度37℃,最适pH值7.4。

耐盐性强，10~15%氯化钠培养基中能生长，

20~30%的二氧化碳环境中培养，可产生大量毒素。

肉汤培养基中生长迅速，37℃培养24h,呈均匀浑浊生长，延长培养时间，管底出现少量沉

淀，摇动时易消散。

营养琼脂上培养24~48h后，形成的菌落圆形凸起，边缘整齐，表面光滑湿润有光泽，不透

明，菌落直径2mm,也有部分4~5mm,

可产生脂溶性色素，不溶于水，故只限于培养物，不外渗至培养基中。

22c或含糖类、牛乳及血清的培养基中色素形成最好。

在血琼脂平板上形成的菌落较大，多数致病性菌株可产生溶血毒素，使菌落周围产生透明溶

血圈（B溶血）。

触媒反应（需具体了解）阳性，厌氧条件下能分解甘露醇，甲基红试验阳性。

葡萄球菌抵抗力较强，是不形成芽抱的细菌中的最强者，

干燥脓汁或血液中可存活数月，

80℃30min才能杀死，煮沸可迅速杀死,5%石碳酸lg/L汞（紫药水儿?）中10~15min死亡。

对某些染料较敏感，1：100000~1：200000稀释的龙胆紫溶液能抑制其生长。

对磺胺类药物敏感较低。

对青霉素、红霉素、庆大霉素高度敏感，很多菌株对青霉素有耐药性。

△葡萄球菌的致病力取决于细菌产生的毒素和酶的能力，主要有：

1）溶血毒素

多数致病菌能产生，根据其对动物细胞的溶血范围、抗原性、溶血时所需温度的不同，可

分为a、B、Y、6四种。

以a溶血素为主（先前说多数致病菌产生透明溶血圈B溶血，有何关联？）。

2）杀白细胞素

可溶性物质，有抗原性，能破坏白细胞和巨噬细胞。

致病和非致病性葡萄球菌均能被吞噬细胞吞噬，致病性葡萄球菌产生杀白细胞素，不仅不

被破坏，反能在吞噬细胞内生长繁殖。

3）肠毒素

能引起人、猫、猴的急性肠胃炎，分6型，具有不同的血清学特性，A型引起的食物中毒

最多，B型、C型次之。

是一种可溶性蛋白质，耐热，100C30min不被破坏，不受胰蛋白酶影响。

4）血浆凝固酶

令含有枸缘酸钠或肝素抗凝剂的兔血浆或人血浆发生凝固的酶。

大多数致病性产生，非致病性一般不产生。因此血浆凝固酶是鉴别葡萄球菌有无致病性的

重要指标。

较耐热，100°C30min或高压消毒后仍保存部分活性，但易被蛋白分解酶破坏。

5）溶纤维蛋白酶

一种激酶（百度说“一般指从一个三磷酸核甘转移磷酸基至受体分子的酶，受体分子通过

这个磷酸基的转移获得能量而被激活（变得更不稳定），所以很多的激酶需要从NTP转移磷

酸基”），可激活血浆蛋白原为血浆蛋白酶，是人、犬、豚鼠、家兔饿已经凝固的纤维蛋白溶

解。

初次培养后，聚落周围若出现一个不透明圈，表示产生凝固酶，继续培养，不透明圈消失，

这是溶纤维蛋白酶作用的结果。

6）透明质酸酶

透明质酸有高度黏稠性，是机体结缔组织中基质的主要成分。

透明质酸酶水解透明质酸后，结缔组织细胞间失去黏性，呈疏松状态，有利于细菌和毒素

在机体内扩散，因此又称扩散因子。

7）脱氧核糖核酸酶

组织细胞及白血球崩解时，释放出核酸，能增加组织渗出物的黏性，而该的能迅速分解之，

有利于细菌在组织中的扩散。

脱氧核糖核酸酚是鉴定葡萄球菌毒力的又•指标。

2、检验原理

金葡耐盐性强适宜生长盐浓度为5%~7.5%,10%~15%能生长,可利用其选择增菌,抑制杂菌。

金葡可产生溶血素，血平板上生长菌落周围有溶血环。

可产生卵磷脂酶，分解卵磷脂，产生甘油酯和可溶性磷酸胆盐，所以在BP平板上生长菌落

为黑色，周围有浑浊带，外层有一透明圈。

金葡菌可产生血浆凝固酶，可令血浆中的血浆蛋白酶原（酶原还是原？）变成血浆蛋白酶,

使血浆凝固，这是鉴定致病性金葡的重要指标。

3、操作步骤（今年考2008版，10版只要求了解）

3.1取25g/ml样品加入225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000~10000r/min

均质lmin-2min（或用拍打器）,制成1:10样品匀液。

3.2取5ml匀液，接种于50ml7.5%氯化钠肉汤（呈浑浊生长）或10%氯化钠胰酪陈大豆肉

汤培养基（有时液体澄清，菌量多时浑浊生长）内，36℃±1℃培养18~24h。

3.3取一环分别接种baird-parker平板（36℃±1℃培养18~24h）和血平板（36℃±1℃培养

18~24h或45~48h）。

3.4取可疑菌落做涂片染色、观察溶血、血浆凝固酶试验

3.4.1BP琼脂上菌落直径为2~3mm,颜色呈灰色到黑色，边缘淡色，周围为一浑浊带，外层

有一透明圈。血平板上菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、白色或金黄色，周围有完全透明

溶血圈。革兰氏阳性球菌，排列成葡萄球状，无芽抱、无荚膜，直