农业畜禽生产猪群样品采集及蓝耳病状态划分标准、监测预警及状态分类

农业畜禽生产猪群样品采集及蓝耳病状态划分标准、监测预警及状态分类蓝耳病状态划分及划分标准猪群样品采集及检测目的猪蓝耳病的监测预警及状态分类PRRSV感染后体内的病毒与抗体动态变化规律PRRSV感染猪只后，病毒会在体内大量复制，6-12h即可出现病毒血症；病毒血症可持续1个月以上。但是，组织内病毒存续时间比在血液中长，大约150天左右；蓝耳病毒主要存在于淋巴组织中，在各种因素刺激下，可再次激活并通过口鼻分泌物等传播。PRRSV感染后7-9天即可产生特异性的抗体，但这些抗体大部分是针对N蛋白的，N蛋白抗体并没有中和活性，ELISA总抗体维持1年左右。PRRSV中和抗体在感染后3-4周产生，维持时间为3～5个月，中和抗体的出现与肺部病毒的消除具有一致性。中和抗体通过降低病毒粘附力、阻止病毒细胞内化而起作用。图1.PRRSV感染后体内的病毒与抗体动态变化规律另外，γ-干扰素产生细胞在感染后3-4周出现，维持时间可以长达1年甚至更长。PRRSV细胞免疫方面，有研究称，γ-干扰素与蓝耳病的清除相关或者能够抵抗病毒的感染。这些免疫学变化的出现，反映了猪只对PRRSV的免疫应答过程，也提示了我们在防控PRRSV感染时需要注意增强猪只的免疫力。与伪狂犬等疾病不同，猪蓝耳病是一个自限性疾病，没有外来感染的话，机体最终会清除病毒，抗体也会转阴。猪场蓝耳病感染状态评估猪场蓝耳病的监测预警是制定综合防控措施的基础，是蓝耳病防控的重要环节。猪场蓝耳病感染状态可以从猪场生产数据，猪群健康巡视（临床症状、个体治疗反馈）、病原学检测和血清学监测等方面进行全面的评估。2.1猪场生产成绩猪场出现蓝耳病波动后，其生产数据也会随之变化，对生产数据的统计分析，有助于猪场蓝耳病的早期预警。母猪采食量、流产数量、配种分娩率、新生仔猪无效仔率（木乃伊、死产、弱仔等）、产房成活率、保育成活率等是较为敏感的参数指标。母猪流产率的异常上升往往要比检测到PRRSV爆发要提前1-4周。

图2监测繁殖群生产数据有助于蓝耳病早期监测预警通常认为（注意：这个标准各公司并不统一）：（1）蓝耳病稳定场标准：妊娠后期流产率＜1%；分娩舍无效仔率＜5%；保育死淘率＜3%；蓝耳病抗体离散度CV%＜30%。（2）蓝耳病不稳定场特征：母猪妊娠后期流产率＞3%；1%＜母猪早产率＜5%；分娩舍无效仔率＞10%；5%＜保育死淘率＜10%；育肥猪呼吸道综合征突出；50%＜蓝耳病抗体离散度CV%＜70%。（3）蓝耳病暴发场特征：各阶段猪群均出现典型的蓝耳病症状；母猪妊娠后期流产、早产＞10%；无效仔率＞10%；保育死淘率＞10%；蓝耳病抗体离散度CV%＞100%；S/P值＞2.5占比超过10%。2.2病原学检测猪蓝耳病病毒可以在血液中检测到，也可以在扁桃体、口腔液、精液、脐带血、产房处理液（断尾、阉割、乳房擦拭液）中检测到。发病、死亡猪的肺脏、脾脏、扁桃体、淋巴结等组织都是很好的样品。流产母猪采集流产胎儿、母猪血液、口腔液进行检测，采集流产胎儿时尽量多采集几个胎儿的肺脏，也可以采集成形流产胎儿的舌尖作为检测样品。产房小猪监测可采集断尾液、睾丸浸出液、母猪乳房擦拭液、死亡小猪（或死胎）的舌尖等样品，采集断尾液或睾丸浸出液时，是将整窝的处理液作为1个样品。如果产房处理液检测为阳性，表明母猪在排毒，存在产房仔猪的早期感染，需要提前采取干预措施，注射长效抗生素（如加米欣，15%加米霉素注射液）预防细菌继发感染，降低死亡率等。保育阶段重点对断奶弱猪、发病小猪采集血样，也可采集口腔液进行检测。育肥猪、后备母猪往往采集口腔液或血液。表1猪场PRRSV监测采样方案猪群日龄采集样品检测目的备注流产母猪/流产胎儿/血液/口腔液流产原因检测胎儿样品需多采集几份产房小猪1日龄脐带血、死产胎儿舌尖母猪垂直传播状态可5窝合1份检测3-7日龄断尾液、睾丸处理液母猪垂直传播状态整窝采集，可5合混1份检测13日龄

(免疫前)血清/咽拭子产房仔猪感染状态采集弱猪30份，5合1检测(选测)21-28日龄血清断奶猪感染状态断奶时采集30份，5合1检测保育猪40-70日龄血清/口腔液保育猪水平传播重点采集弱猪，可结合抗体检测；病原5合1育肥猪100-120日龄血清/口腔液育肥猪水平传播可结合抗体监测，病原5合1后备猪入群前血清/口腔液感染状态监测结合抗体监测，5合1;口腔液每栏单检。公猪/精液/血清/口腔液公猪感染状态全检，每周/月1次，每份单检。可采用RT-PCR或荧光RT-PCR方法，蓝耳病核酸检测有几个行业标准供选择。荧光定量RT-PCR方法除评价蓝耳病病毒阳性率以外,还可评价其病毒载量。当前我国猪场蓝耳病流行毒株种类多，美洲型和欧洲型毒株均需检测。PRRSV容易发生变异，对检测的引物和探针需要进行评估，当实验室检测结果和临床不符时，需要多用几种检测方法或试剂盒进行复核检测。猪场监测到阳性样本（Ct值低于30），有必要对蓝耳病毒株进行GP5和NSP2基因扩增和测序，并进行遗传进化分析，确定蓝耳病病毒的毒株类型；必要时，对蓝耳病毒株进行全基因组测序分析。2.3抗体监测可将猪群按照生产流程分为多个小群体（如将种猪分为：种公猪、后备母猪、怀孕中期、怀孕后期、哺乳期母猪群），将仔猪或肉猪群按年龄阶段进行分群（如将猪群分为30日龄、60日龄、90日龄、120日龄、150日龄等小群体或按照周龄进行分群），每个阶段（每个小的群体）应采集10份以上样品，种公猪应全部采样监测。后备母猪入群监测，应全部采样，最好能监测1-2次，间隔2周。对蓝耳病抗体的检测常采用ELISA方法。检测蓝耳病的抗体有两类试剂，一类是检测N蛋白抗体，出现早，消失快，以IDEXX、百测、广州悦洋和北京金诺为代表；另一类是检测GP蛋白抗体，出现较晚，持续时间较长，以LSI、海博莱等为代表。对于蓝耳病抗体检测试剂盒的选择要根据检测的目的，要从检测结果与临床表现、感染状态、免疫状态的对应关系，以及试剂盒的稳定性等方面进行综合考虑。猪场蓝耳病状态分类蓝耳病状态划分抗原检测抗体检测划分标准阳性不稳定，高流行率

(I-A);(蓝耳疫情发

生场)阳性，排毒

猪只比例高阳性1、不符合其他类别标准的猪群默认为该类别。

2、妊娠母猪繁殖障碍：流产、早产、产死胎、返情；各日龄

猪呼吸道疾病、继发感染等；仔猪断奶前高死亡率。

3、各类临床样品检测抗原阳性；猪群血清抗体阳性或抗体阳

性率增高。阳性不稳定，低流行率

(I-B);(蓝耳阳性/

不稳定场)阳性，排毒

猪只比例低阳性1、存在任何与PRRS相关的临床症状：(1)妊娠母猪散发性流

产、产死胎、弱仔；(2)断奶猪死淘率增高。

2、每月一次检测，持续90天或至少4个批，血清/处理液/口

腔液抗原检测，5混合1。断奶期仔猪连续90天保持抗原阳性

率<25%。阳性稳定(Ⅱ);(阳性

/稳定场)不确定阳性每月一次检测，持续90天或至少4个批，血清/处理液/口腔

液抗原检测，5混合1,断奶期仔猪连续90天保持抗原阴性。阳性稳定，使用疫苗免

疫(Ⅱ-VX);(阳性/稳

定场)不确定阳性每月一次检测，持续90天或至少4个批，血清/处理液/口腔

液抗原检测，5混合1,断奶期仔猪连续90天保持野毒抗原阴

性。趋于阴性场阴性，不排毒阴性猪群开展剔除阳性猪，引进蓝耳阴性后备猪后60天未感染，

未接种疫苗；ELISA检测后备母猪，猪群为阴性。阴性场阴性，不排毒阴性所有之前感染检测阳性猪只剔除猪群；ELISA检测后备母猪，

猪群为阴性；猪群确认ELISA检测阴性持续一年。表2猪场PRRSV感染状态分类目前行业多采用的分类标准是2019年由美国猪兽医协会（AASV）与美国国家猪肉委员会共同修订的。也有专家将猪场PRRSV的感染状态分为：发病场，阳性/不稳定场，阳性/稳定场和阴性场。开展蓝耳病遗传进化分析猪蓝耳病流行广泛、危害巨大，其病原容易发生变异、重组，临床流行毒株多样性明显。据哈尔滨兽医研究所等国内多个科研院所的监测结果表明，我国猪群中存在L1、L3、L5、L8、L9谱系蓝耳病毒株，流行最广泛的还是以类NADC30、类NADC34为代表的L1谱系毒株。我国当前应用的PRRS疫苗主要包括L8分支活疫苗（CH-1R