TCACM1326.33-2019假鹰爪种子超低温保存技术规程

ICSC T/CACM1326.33—TechnicalcodeofpracticeforcryopreservationofDesmoschinensis 中华中医药学会T/CACMT/CACM1326.33—目前 活 附录A（规范性附录）试剂的配制和保存方 前——T/CACM1326.1——T/CACM1326.2——T/CACM1326.3——T/CACM1326.4——T/CACM1326.5——T/CACM1326.6——T/CACM1326.7——T/CACM1326.8——T/CACM1326.9——T/CACM1326.10GB/T1.1－2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。T/CACMT/CACM1326.33—本标准规定了假鹰爪（Desmoschinensis）种子超低温保存过程中的术语和定义、种子的选择、GB/T3543.6假鹰爪Desmos为番荔枝科（Annonaceae）假鹰爪属（DesmosLour.）灌木，在我国南部山丘上常见，花美丽，假鹰爪果实Desmoschinensis内有种子1～7颗。假鹰爪种子Desmoschinensisseedof℃月4（2）法测定假鹰爪种子生活力。待测种子在30℃～35℃温水中浸种2h，随后取吸胀种子20粒，整齐地埋于备好的1.5％BTB琼脂凝胶中，注意要将胚埋入凝胶中。将培养皿置于35℃温箱中26hBTBAA.1≥50𝐴

×100%⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯（1）用尼龙网袋包裹假鹰爪种子，置于盛有变色硅胶的干燥器内，硅胶与种子的体积比为60：1，室温条件下干燥处理0h～22h，在干燥过程可定期测定种子含水量，将种子含水量由15％～20％降至14％～15％。

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×100%……….900假鹰爪种子超低温保存的冷冻方式为玻璃化冷冻法，即将装有种子的5mL（每管45种子）置于装载液（LS）中并于25℃处理种子20min，再用玻璃化保护溶液（PVS2）冰浴处理种子30min，换上预冷新鲜的PVS2后迅速投入液氮中进行超低温保存。LSPVS2AA.2A.324h2402min洗涤液（DS）15min3DSAA.4取出1管解冻后的种子，按照5.1活力检测方法，进行超低温保存后的初始生活力检测。当种子生活力≥20％时视为保存成功。将剩下1管解冻后的假鹰爪种子，播种到带有无菌滤纸的带盖发芽盒中，温度25℃～30℃，湿度70％～85％条件下培养。附录BTB精密称取BTB0.1g，溶解于煮沸过的100mL纯水中，然后用滤纸去残渣。滤液若呈黄色，可1.5BTB0.1BTB40mL0.5g加入杯中，加热并不断搅拌使之完全溶解。待溶液稍稍冷却即可趁热倒入9cm培养皿中，使之成一13.7g11.9mLMSpH5.8100mL，高温高压灭菌，4℃冷藏。23.8mL13.6mL13.6mL13.7gMS中，调pH至5.8后，定容至100mL，高温高压灭菌，4℃冷藏。精密称取蔗糖41.1gMS溶液中，调pH至5.8后，定容至100mL，高温高压灭菌，4℃LiPing-tao,MichaelG.Gilbert.Annonaceae[M]//FloraOfChinaBeijing:SciencePress/St.Louis:MissouriBotanicalGardenPress.2011.19:681-682.中国科学院中国植