（高清版）DB62∕T 4031-2019 马铃薯黑痣病抗性室内鉴定技术规程

马铃薯黑痣病抗性室内鉴定技术规程2019-09-30实施2019-09-30实施甘肃省市场监督管理局发布本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由甘肃省农业农村厅提出并监督实施。本标准由甘肃省粮食作物栽培标准化技术委员会归口。本标准起草单位：定西市植保植检站、定西市种子管理站、甘肃省农业科学院植物保护研究所、兰州市农业科技研究推广中心、岷县农业技术推广站。本标准主要起草人：陈爱昌、席旭东、魏周全、李继平、刘小娟、李锦龙、牛旭东、袁保东、张廷义、韩相鹏、何克菊、李燕芳、李建德、邓成贵。I本标准规定了马铃薯黑痣病抗性室内鉴定方法凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。下列术语和定义适用于本文件。4.1PSA培养液马铃薯去皮切片，称取马铃薯200g,琼脂20g,蔗糖20g,蒸馏水定容止1000mL,用纱布过滤，补加蒸馏水至1000mL,加入乳糖20g,溶化后于121℃高压灭菌20m4.2PDA培养基马铃薯去皮切片，称取200g,加1000mL蒸馏水，煮沸10min～20min,用纱布过滤，补加蒸馏水至4.31%的次氯酸钠(NaClO)培养皿、锥形瓶、纱布、酒精灯、塑料花盆(直径21cm、高13cm)等。12从马铃薯黑痣病发病薯块用常规组织分离法分离黑痣病病原物(参见附录A)。确认为立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)后取菌落末端菌丝于PSA培养基中培养纯化，经柯赫氏(koch)法则验证后，保存备种在PSA平板上培养4d的待测菌株菌饼10片(直径0.8将马铃薯黑痣病接种于PDA斜面培养基上，在20℃~25℃的恒温箱中培养7d,置4℃~8℃冰箱内保存；或在斜面上加一层灭菌矿物油(超过斜面顶部1cm)后置冰箱冷藏空或室温下保存。将马铃薯黑痣病菌接种于液体石蜡管，置2℃~8℃冰箱中保存。选取未感病的马铃薯种薯在直径21cm,高13cm的塑料花盆中播种。播种基质为草炭、蛭石和菜田土(2:1:1)。经高温蒸汽灭菌(134℃,30min)。在日光温室里育苗，室内温度白天为20℃~25℃,夜播种期将马铃薯种薯用1%NaClO溶液灭菌20min,单株接种量为6g,均匀混于花盆内。7.6接种后管理接种后将植株置于鉴定室内，每天光照14h,强度为700001x,保持植株正常生长的土壤湿度，接种期间鉴定室温度控制在20℃~25℃范围内。7.7病情调查7.7.1调查时间接种后60d～75d调查病情，根据此期间感病的对照品种病级扩展到感病级的时间作适当调整。7.7.2病情级别划分病情级别及其对应的症状描述见表1。表1马铃薯黑痣病抗性室内鉴定病情级别的划分病情级别0级无病斑1级2级3级5级7.7.3调查方法调查每份鉴定材料接种株发病情况，根据病害症状描述，逐份材料进行调查，记载单株病情级别，并计算每份鉴定材料的病情指数(DI)。........s——各病情级别的代表数值；n——各病情级别的植株数；N——调查总植株数；S——最高病情级别的代表数值。计算结果取3次重复平均值。8抗病性评价8.1抗病性评价标准依据鉴定材料的病情指数(DI)评价值确定其抗性水平，划分标准见表2。34病情指数(DI)免疫(I)高抗(HR)中抗(MR)中感(MS)高感(HS)当感病对照材料达到其相应感病程度(DI>50),抗病对照材料与实际抗性程度相符，该批次抗黑(资料性附录)鉴定结果原始记载表鉴定结果记载表格式见图A.1。品种/品质病情级别01234