RON及Claudin - 4在人膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义

RON及Claudin-4在人膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义一、引言膀胱移行细胞癌（bladdertransitionalcellcarcinoma，BTCC）是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，其发病率在全球范围内呈上升趋势。尽管目前在BTCC的诊断和治疗方面取得了一定进展，但对于肿瘤的发生、发展机制仍有待深入研究。寻找可靠的分子标志物，对于BTCC的早期诊断、预后评估以及靶向治疗具有重要意义。RON（Recepteurd'OrigineNantais）和Claudin-4是近年来研究较多的分子，在多种肿瘤中发挥着重要作用，然而它们在BTCC中的表达及临床意义尚未完全明确。二、材料与方法（一）研究对象选取[具体时间段]在我院泌尿外科行手术切除的膀胱移行细胞癌组织标本[X]例，患者年龄范围为[最小年龄]-[最大年龄]岁，平均年龄（[平均年龄]±[标准差]）岁。同时选取距离肿瘤边缘至少[X]cm的癌旁正常膀胱黏膜组织标本[X]例作为对照。所有标本均经病理确诊，术前患者均未接受过放疗、化疗或其他抗肿瘤治疗。（二）主要试剂与仪器主要试剂：兔抗人RON多克隆抗体、兔抗人Claudin-4多克隆抗体、免疫组化检测试剂盒、DAB显色试剂盒等均购自[试剂公司名称]。主要仪器：光学显微镜（[显微镜品牌及型号]）、石蜡切片机（[切片机品牌及型号]）、离心机（[离心机品牌及型号]）等。（三）实验方法免疫组织化学染色：采用免疫组织化学EnVision法检测RON和Claudin-4在膀胱移行细胞癌组织及癌旁正常组织中的表达。具体步骤如下：将石蜡切片常规脱蜡至水，3%过氧化氢溶液室温孵育10min以阻断内源性过氧化物酶活性。微波抗原修复后，滴加正常山羊血清封闭液，室温孵育15min。分别滴加适量稀释的RON和Claudin-4一抗，4℃过夜。次日，PBS冲洗后滴加生物素标记的二抗，室温孵育15min，再滴加辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素工作液，室温孵育15min。DAB显色，苏木精复染，脱水，透明，封片。用PBS代替一抗作为阴性对照，已知阳性切片作为阳性对照。结果判定：RON和Claudin-4阳性产物均定位于细胞核和（或）细胞质，呈棕黄色颗粒。根据阳性细胞占全部细胞数的百分数进行判断：阳性细胞数＜10%为阴性（-），10%-50%为弱阳性（+），51%-75%为中度阳性（++），＞75%为强阳性（+++）。将弱阳性、中度阳性和强阳性均视为阳性表达。（四）统计学分析采用SPSS[具体版本]统计学软件进行数据分析。RON和Claudin-4在膀胱移行细胞癌组织与癌旁正常组织中的表达差异比较采用χ²检验；RON和Claudin-4表达与膀胱移行细胞癌临床病理参数之间的关系采用χ²检验或Fisher确切概率法。以P＜0.05为差异有统计学意义。三、结果（一）RON和Claudin-4在膀胱移行细胞癌组织及癌旁正常组织中的表达RON的表达：在癌旁正常膀胱黏膜组织中，RON阳性表达率为[癌旁正常组织中RON阳性率]（[阳性例数1]/[癌旁正常组织例数]），主要呈弱阳性表达；在膀胱移行细胞癌组织中，RON阳性表达率为[癌组织中RON阳性率]（[阳性例数2]/[癌组织例数]），明显高于癌旁正常组织（P＜0.05），且随着肿瘤分级的升高，RON阳性表达率逐渐升高（P＜0.05）。Claudin-4的表达：Claudin-4在癌旁正常膀胱黏膜组织中阳性表达率为[癌旁正常组织中Claudin-4阳性率]（[阳性例数3]/[癌旁正常组织例数]），多为弱阳性或阴性表达；在膀胱移行细胞癌组织中，Claudin-4阳性表达率为[癌组织中Claudin-4阳性率]（[阳性例数4]/[癌组织例数]），显著高于癌旁正常组织（P＜0.05），并且Claudin-4阳性表达与膀胱移行细胞癌的临床分期、淋巴结转移密切相关（P＜0.05），分期越晚、有淋巴结转移的患者，Claudin-4阳性表达率越高。（二）RON和Claudin-4表达与膀胱移行细胞癌临床病理参数的关系与肿瘤分级的关系：RON阳性表达率在低级别膀胱移行细胞癌中为[低级别癌中RON阳性率]，在高级别癌中为[高级别癌中RON阳性率]，差异有统计学意义（P＜0.05）。Claudin-4阳性表达率在不同肿瘤分级之间差异无统计学意义（P＞0.05）。与临床分期的关系：Claudin-4阳性表达率在Tis-T1期患者中为[Tis-T1期Claudin-4阳性率]，在T2-T4期患者中为[T2-T4期Claudin-4阳性率]，差异有统计学意义（P＜0.05）。RON阳性表达率与临床分期无明显相关性（P＞0.05）。与淋巴结转移的关系：有淋巴结转移的膀胱移行细胞癌患者中Claudin-4阳性表达率为[有淋巴结转移组Claudin-4阳性率]，无淋巴结转移患者中为[无淋巴结转移组Claudin-4阳性率]，差异有统计学意义（P＜0.05）。RON阳性表达与淋巴结转移无明显相关性（P＞0.05）。（三）RON和Claudin-4表达的相关性在膀胱移行细胞癌组织中，RON和Claudin-4的表达呈正相关（r=[相关系数]，P＜0.05）。四、讨论（一）RON在膀胱移行细胞癌中的表达及意义RON是一种受体酪氨酸激酶，属于巨噬细胞刺激蛋白受体家族。研究表明，RON在多种肿瘤组织中异常表达，并与肿瘤的发生、发展、侵袭和转移密切相关。本研究结果显示，RON在膀胱移行细胞癌组织中的阳性表达率显著高于癌旁正常组织，且其表达水平与肿瘤分级相关，提示RON可能参与了膀胱移行细胞癌的恶性转化过程。RON的激活可通过一系列信号转导途径，促进肿瘤细胞的增殖、存活、迁移和侵袭，其具体机制可能与上调细胞周期蛋白、抑制细胞凋亡以及激活基质金属蛋白酶等有关。此外，RON还可能通过与其他信号通路的相互作用，进一步增强肿瘤细胞的恶性生物学行为。因此，RON有望成为膀胱移行细胞癌诊断和治疗的潜在靶点。（二）Claudin-4在膀胱移行细胞癌中的表达及意义Claudin-4是紧密连接蛋白家族的重要成员，在维持上皮细胞的极性和屏障功能方面发挥着关键作用。近年来的研究发现，Claudin-4在多种肿瘤中表达异常，其表达水平与肿瘤的侵袭、转移及预后密切相关。本研究结果表明，Claudin-4在膀胱移行细胞癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常组织，且与临床分期、淋巴结转移相关。这提示Claudin-4可能参与了膀胱移行细胞癌的进展过程，其机制可能是Claudin-4异常表达破坏了上皮细胞间的紧密连接，导致细胞极性丧失，促进肿瘤细胞的侵袭和转移。此外，Claudin-4还可能通过调节细胞内信号通路，影响肿瘤细胞的增殖和存活。因此，检测Claudin-4的表达水平对于评估膀胱移行细胞癌的预后具有重要意义。（三）RON和Claudin-4表达的相关性及联合检测的意义本研究发现，在膀胱移行细胞癌组织中RON和Claudin-4的表达呈正相关。这提示两者可能在膀胱移行细胞癌的发生、发展过程中存在协同作用。RON的激活可能通过影响Claudin-4的表达或功能，进一步促进肿瘤细胞的侵袭和转移；反之，Claudin-4的异常表达也可能影响RON信号通路的活性。因此，联合检测RON和Claudin-4的表达，有助于更全面地了解膀胱移行细胞癌的生物学行为，为临床诊断、治疗及预后评估提供更有价值的信息。五、结论RON和Claudin-4在膀胱移行细胞癌组织中均呈高表达，且RON表达与肿瘤分级相关，Claudin-4表达与临床分期、淋巴结转移相关。在膀胱移行细胞癌组