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文档简介

主讲老师：郭巧玲ZhangzhouInstituteofTechnolony

蛋白质的测定及制备蛋白质的制备与测定一、分离蛋白质的目的1、研究蛋白质的分子结构、组成和某些物理化学性质，需要纯的蛋白质样品。2、研究蛋白质的生物功能，需要样品保持它的天然构想。3、制药工业中，需要把某种特殊功能的蛋白质提纯到规定的要求，特别是要把干扰或有拮抗性质的成分除去。蛋白质的制备与测定二、蛋白质的制备1、提取一般先破碎细胞，然后再用适当溶剂进行提取

动物组织可采取搅碎、匀浆法把细胞破碎；植物组织可以用石英砂和适当的提取液混合磨碎；微生物的细胞壁非常坚韧，可采用超声波、高压挤压、酶解等方法加以破碎。

提取过程通常要在低温（一般接近0℃）时操作，以保持酶的活性。蛋白质的制备与测定2、分离

有机溶剂沉淀法：在提取液中加入酒精或丙酮等有机溶剂，破坏蛋白质胶粒的水膜，而使蛋白质沉淀。然而蛋白质易变性，整个过程必须在低温下进行。

等电点法：将提取液的pH调到所制备蛋白质的等电点，使蛋白质沉淀析出。

盐析法：在提取液中加中性盐如(NH4)2SO4等，破坏蛋白质胶体表面的电荷，若同时调节pH到蛋白质的等电点则蛋白质沉淀效果更好。蛋白质的制备与测定3、纯化凝胶过滤法：又叫分子筛分离法，它利用凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同进行分离纯化。

离子交换层析法：离子交换剂是通过化学反应将带电基团引入到惰性支持物上，使其与有相反电荷的蛋白质分子结合，从而达到纯化目的。电泳法：根据蛋白质分子所带净电荷量及分子形状的不同进行分离纯化。蛋白质的制备与测定三、生物样品中蛋白质含量的测定常用方法：

先测定蛋白质中含氮量，再按蛋白质含氮量约为16%，折算出蛋白质含量=蛋白氮×6.251、凯氏定氮法3、紫外光谱吸收法2、考马斯亮蓝法

蛋白质分子中，酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，使蛋白质具有吸收紫外光的性质。

样品中加入考马斯亮蓝后，溶液呈蓝色，用分光光度计测定吸光度。这一方法目前正被广泛采用。主讲老师

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