陈丽H5N1H9N2亚型禽流感病毒NS

H5N1、H9N2亚型禽流感病毒NS1基因在T4噬菌体表面的展示作者：陈丽指导老师：谢青梅禽流感简介禽流感是由正粘病毒科A型流感病毒引起的禽类（家禽和野禽）的一种感染和/或疾病综合征。主要发生在鸡、鸭、鹅、鸽子等禽类和鸟类身上，但主要侵害火鸡和鸡，哺乳动物如猪、马、海豹、人等也可感染。我国《家畜家禽防疫条例》和国际兽医局动物流行病组织（OIE）规定禽流感为Ａ类烈性传染病。

发生禽流感时没有特有的症状表现，其症状的明显和严重程度受感染毒株的毒力、感染禽的品种、日龄、有无并发和继发病、应激、禽群的饲养管理水平、营养状况及环境等因素的影响。防治禽流感现状禽流感在世界范围内的流行，给很多国家带来了严重的经济损失。目前，我国主要采用免疫+扑杀的政策来控制禽流感，但疫苗的大量使用干扰了禽流感疫情的监测，因此现有检测方法难以区分免疫禽群和感染群。因此建立迅速检测区分免疫禽群和感染群方法有很大的现实意义，能够使我们及时了解疫情，做出相应处理，在很大程度上减少经济损失。NS1基因简介NS1基因为禽流感病毒的第8个基因片段,在禽流感病毒的8个片段中最短,编码非结构蛋白。作为病毒的非结构成分,NS1蛋白出现仅仅只局限在病毒感染期，它可刺激机体产生非结构蛋白抗体。因此，针对NS1蛋白的抗体只可能出现于病毒感染群中，而在使用灭活疫苗免疫时不会产生。从而可以将其及其抗体作为病毒感染机体的一个标记用以区分免疫群和感染群的鉴别诊断。NS1的作用近来研究报道非结构蛋白（NS1）可以抵抗干扰素对蛋白质合成的抑制作用。而且能够抑制宿主细胞Pre2mRNA的运输和剪接，在病毒复制过程及与细胞蛋白质的相互作用中发挥重要作用,从而关闭宿主细胞的基因表达,并且可以增强病毒mRNA翻译的效率。反向遗传系统实验已证实,在病毒感染期间，NS1蛋白的Ｎ端区域有增强病毒蛋白合成的功能。更为重要的是NS1蛋白能使流感病毒逃逸宿主的免疫防御，在抑制干扰素(IFNα/β)及肿瘤坏死因子(TNFβ)介导的抗病毒反应中起重要作用。T4噬菌体表达载体的优点容量大、拷贝数多可以展示的肽或蛋白质范围广有两个展示位点，可以同时展示性质完全不同的两种蛋白质适于大规模培养,展示在衣壳表面的外源蛋白容易纯化同时外源蛋白保持了相对完整的生物学活性具有很好的免疫原性研究目的及意义本研究旨在利用T4噬菌体表达NS1蛋白，为下一步研究NS1单克隆抗体或特异性抗体鉴别诊断禽类感染禽流感病毒是由疫苗引起还是病毒感染所致，同时可建立一套鉴别诊断禽流感感染禽群的免疫群和感染群的诊断方法，这对于禽流感的诊断和防制研究具有重要的现实意义和实用价值，对生产实践具有很好的理论指导作用。实验结果

用所设计的引物特异地扩增到H5N1、H9N2NS1基因并获得了其核苷酸序列。2个毒株的NS1基因长分别为678bp、693bp，分别编码226、231个氨基酸；核苷酸序列与GenBank中收录的其他分离株NS1基因比较，其核苷酸同源性很高（96-98%），氨基酸的同源性为87%-97%。将AIVNS1基因克隆至pSOC质粒，NS1基因与SOC基因融合表达得到融合蛋白pSOC-