细胞生产中的污染控制58课件

细胞生产中的污染控制细胞培养污染是指培养环境中侵入了对细胞生存有害的成分和造成细胞变异的异物。细胞污染不能完全被消除，但能减少其发生的频率和后果的严重性细胞污染的分类物理污染化学污染生物污染（细菌、霉菌、病毒、支原体污染）控制污染良好的无菌操作技术完善的细胞库良好的规章制度检测细胞污染合理应用抗生素物理性污染培养环境中的物理因素会对细胞产生影响：细胞、培养液等培养试剂暴露于放射线、辐射(紫外线或荧光)或过冷过热的温度中，可以引起细胞代谢发生改变，如细胞同步化、细胞生长受抑制甚至细胞死亡。培养液用前恢复至室温培养用试剂应尽量避免存放于光照之下保持细胞培养环境的稳定温度化学性污染血清选用同一批次的血清，减少成分差异新购血清使用之前要进行预试验培养液及试剂选择高纯度的试剂正确的使用浓度正确储存，在保质期内使用水使用新鲜超纯水避免高压蒸汽灭菌试剂中的化学物质残留培养用器皿生产过程中有毒物质残留消毒剂和清洗剂的残留包装纸残留操作时烤焦的瓶塞培养箱CO2混有有毒气体消毒剂和清洗剂的残留生物性污染容易发现的生物污染包括细菌、霉菌和酵母菌不容易被发现的生物污染包括病毒、原虫、昆虫、支原体和其它细胞系细菌污染污染迅速黑色细沙状，可有不同的外形。培养液浑浊变黄对细胞生长影响明显。有抗生素存在时可长期带菌例：洋葱佰克霍尔德菌污染霉菌污染培养液清亮培养2-3天出现絮状杂质，细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝细胞仍可生长，但长时间则细胞的活力状态变差酵母菌污染培养液清亮培养瓶底部出现较大颗粒，单个或聚集成团细胞仍可生长，但长时间则细胞的活力状态变差例:白色念珠菌污染细菌、真菌污染的来源与预防灭菌不彻底的培养器皿污染的试剂与器材空气中常见菌工作环境潮湿人体带菌彻底灭菌，在有效期内使用试剂用前检菌环境及设施消毒正确的无菌操作方法支原体污染污染严重难发现显微镜看不到不引起培养液浑浊和PH改变营养要求高不容易用传统的微生物培养法检测到难去除不能通过过滤清除大多数抗生素对其无效支原体污染来源与预防被污染的种子批人体组织及体液支原体飞沫传播牛血清中的支原体保证细胞及血清的来源确保基质和器材无菌细胞培养时避免交谈操作结束时消毒台面定期检验定期更换细胞做好详细的细胞记录病毒污染难发现隐性感染，无病变，如1型圆环病毒感染难清除无法药物控制，一旦污染只能废弃严格的宿主性自限性对操作人员的潜在危险来源病毒生产过程中漏毒细胞株带毒血清及其他动物源性试剂人体带毒预防种子批的外源病毒检验原辅料的检验良好的生产规章制度细胞污染细胞系交叉污染难于发现若出现传代细胞的生长速度异常，考虑交叉污染同一时间只传同一种细胞每种细胞要有单独的培养液及胰酶建立细胞库，定期更换细胞污染控制良好的规章制度良好的无菌操作合理利用抗生素污染检测完善的细胞库良好的规章制度只有相关人员才可进入细胞培养区细胞培养区必须和其他区域分开每个细胞培养区应布局合理，保证所需物品就近放置，在处理细胞时避免不必要的走动细胞培养区应避免使用水池，从而避免微生物污染详细的细胞生产记录有助于避免更大规模的污染良好的无菌操作所有玻璃器皿和培养液与试剂的配制应严格无菌避免溢出、溅出和气溶胶；吸入或吸出液体时避免倾倒；吸入或吸出液体时，不要触碰细胞培养瓶的瓶口；培养试剂应分装并置4-8oC保存；每种细胞应使用单独的培养试剂；清洁区和污染区的材料应单独处理细胞污染的检测生物污染的检测细菌细菌培养真菌细胞观察支原体支原体培养，PCR检测病毒PCR鉴定化学污染的检测常被误认为生物污染要靠逐一替换的方法确定化学污染的来源合理利用抗生素适当使用抗生素可以有效地抑制微生物污染过度依赖抗生素会使人们忽略无菌操作滥用抗生素