第十讲猪链球菌病诊断2讲课文档

第十讲猪链球菌病诊断第一页，共29页。优选第十讲猪链球菌病诊断第二页，共29页。一、病原分离1采样活猪：采样用灭菌棉拭子擦拭扁桃体病死猪：扁桃体、肺、肝、血液，有脑炎症状取脑组织，关节炎可取关节囊液第三页，共29页。2分离培养（1）培养基：THB培养基、绵羊血或马血平板（2）培养条件：需氧兼性厌氧、37℃、pH7.2

猪链球菌2性营养要求比马链球菌兽疫亚种低，后者需加3-5%的犊牛血清第四页，共29页。二、临床诊断

主要表现为败血症、化脓性淋巴结炎、脑膜炎、心内膜炎、关节炎等。但不同链球菌病原引起的症状类似，故该诊断不能用于确诊。第五页，共29页。关节炎症状第六页，共29页。败血症第七页，共29页。1染色镜检猪链球菌2型：革兰氏染色阳性、菌体呈圆形或椭圆形，直径小于2.0μm，一般呈短链或成双排列，革兰氏染色阳性，菌体表面能形成荚膜。

二、微生物学诊断第八页，共29页。马链球菌兽疫亚种：

革兰氏阳性球菌，直径0.5~1um，液体培养基中呈长链，菌体表面能形成荚膜。营养要求较高，在5%犊牛血清生长良好。根据类M蛋白抗原性的差异，该菌至少有15个血清型。第九页，共29页。马链球菌兽疫亚种猪链球菌2型菌（α溶血）第十页，共29页。图2猪链球菌2型

(ZY05719)

第十一页，共29页。ATCC35246株第十二页，共29页。2培养特性猪链球菌2型：

菌落形态血平板上呈灰白色小菌落，粘稠，2型在绵羊血平板上呈α溶血，马血平板则呈β溶血。第十三页，共29页。马链球菌兽疫亚种：在血清肉汤培养基中培养该菌，开始时有轻度混浊，继而变清，于管底形成沉淀。于5％绵羊血琼脂（THA）培养基上培养24h，大部分菌株形成3～4mm的粘液样大菌落，产生明显的β溶血。小部分呈非粘液样菌落，大小约1mm左右。第十四页，共29页。3生化鉴定猪链球菌2型：

发酵乳糖、海藻糖、水扬苷，部分菌株发酵棉实糖、菊糖；不发酵甘露醇、山梨醇第十五页，共29页。马链球菌兽疫亚种：能水解精氨酸，发酵乳糖、水扬苷、山梨醇产酸。不能发酵菊糖、甘露醇、棉子糖和海藻糖。V-P试验阴性，不产生靛基质，不还原硝酸盐，不液化明胶。第十六页，共29页。三、免疫学诊断1玻板凝集实验用于猪链球菌2型快速定型，但要求抗体效价高；马链球菌兽疫亚种只能用于定群

2乳胶凝集实验敏感性较高，结果容易判断，但有非特异性第十七页，共29页。3免疫荧光猪链球菌2型：用MRP特异抗体可用于菌体表面其分布的观察，但需用激光共聚焦显微镜。马链球菌兽疫亚种：用类M蛋白特异抗体可用于菌体表面其分布的观察第十八页，共29页。MRP单抗介导FITC标记SS2表面MRP的激光共聚焦图像

MRP单抗介导FITC标记SS2表面MRP的激光共聚焦图像第十九页，共29页。

SS2多抗介导FITC标记的SS2的激光共聚焦图像

第二十页，共29页。ELISA

常用链球菌多克隆抗体包被，以MRP或类M蛋白的单克隆抗体夹心，敏感性高，特异性较强。第二十一页，共29页。四、分子诊断1多酶电泳法：原理：不同型猪链球菌，胞内酶分子的氨基酸有差异，因而电荷有差异，在电场中，其迁移率有差异。用于不同型链球菌的分析第二十二页，共29页。2限制性酶切图谱分析

原理：不同种或亚种链球菌基因不同，因而用限制性内切酶酶切后，其电泳图谱不同。用于分离株变异分析，亦可用于不同种或型的鉴定第二十三页，共29页。随机扩增多态DNA分析（RAPD）用多对随机引物进行PCR扩增，可得到不同的产物，且产物具有多态性。可用于种或型的鉴定或分离株变异分析第二十四页，共29页。PCR猪链球菌2型：

mrp、ef、cps2、orf2以及溶血素基因均可作为靶基因进行检测

cps2具有型特异性第二十五页，共29页。bp970744622557mrp,ef,sly,CPS2123451:HA9801;2:ZY05719;3:Marker;4,5:阴性对照第二十六页，共29页。250bp500bp750bpM122000bp1000bpMaker1.HA9801(cps2)2.ZY05719(cps2)cps2第二十七页，共29页。250bp500bp750bp2000bpM1234ef，mrp