CA916798基因：解析肺癌顺铂耐药谜题的关键钥匙

CA916798基因：解析肺癌顺铂耐药谜题的关键钥匙一、引言1.1研究背景与意义肺癌作为全球范围内发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一，严重威胁着人类的生命健康。据相关统计数据显示，在全世界范围内，每年新发肺癌的人数在180万左右，死亡人数大概为160万；我国肺癌的发病情况也不容乐观，每年新发肺癌的人数约为73万，死亡人数在60万左右，约占据全世界肺癌发病人数和死亡人数的三分之一。预计到2025年，我国肺癌总的病人发病率将达到100万，成为世界第一号肺癌大国。肺癌的高死亡率不仅给患者家庭带来沉重打击，也给社会医疗资源造成了巨大压力。化疗是肺癌综合治疗的重要手段之一，在肺癌的治疗中发挥着关键作用。顺铂作为一种常用的化疗药物，通过干扰癌细胞的DNA复制和修复机制，抑制肿瘤细胞的增殖，在肺癌治疗中应用广泛。顺铂可以联合紫杉醇或吉西他滨，帮助缩小肿瘤，延长肺癌患者的生存期。然而，肺癌细胞对化疗药物产生的耐药性，尤其是多药耐药（MultidrugResistance，MDR）现象，成为了肺癌化疗成功的主要障碍。多药耐药性是指肿瘤细胞对一种化疗药产生耐药现象后，对非同类结构、细胞靶点和作用机制迥异的其他化疗药物产生交叉耐药。一旦肺癌细胞产生多药耐药，化疗药物便难以发挥其应有的疗效，导致肿瘤复发和转移的风险增加，患者的生存期显著缩短，严重影响了肺癌的治疗效果和患者的预后。肺癌多药耐药的机制十分复杂，涉及多个层面和多种因素。在细胞膜水平，存在药物摄取减少和外排增多的情况，如MDR1基因编码的P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp），它作为一种能量依赖性药物外排泵，能够将胞质内的化疗药物泵出到细胞间隙，使胞质内的药物浓度降低，从而使肿瘤细胞对长春花碱、蒽环类、泊苷类、放线菌素Ｄ及紫杉醇等天然的疏水性抗肿瘤药物产生耐药性；多药耐药相关蛋白（MultidrugResistance-AssociatedProtein，MRP）也可介导药物外排，其引起的药物外排在需要谷胱甘肽的参与，细胞内谷胱甘肽的水平和谷胱甘肽转硫酶的活化与MRP介导的MDR有关。在细胞质和细胞器水平，药物亚细胞分布的改变，会使药物无法接近其作用靶点，引起药物有效浓度降低，如肺耐药性相关蛋白（LungResistanceRelatedProtein，LRP）和乳腺癌耐药性蛋白（BreastCancerResistanceProtein，BRCP）对化疗药物的胞吐作用。细胞解毒系统和修复系统功能加强，会使药物迅速灭活，药物引起的肿瘤细胞DNA损伤得以及时修复；药物靶点在质和量上的改变，如拓扑异构酶Ⅱ（TOPⅡ）表达降低，并发生点突变，活性降低，会减弱了以TOPⅡ为靶点的药物的细胞毒性；蛋白激酶C（PKC）活性升高，会促进P-gp及拓扑异构酶Ⅱ的磷酸化；抗凋亡基因Bcl-2表达增高及凋亡基因Fas、Bax的降低等，也都与肺癌多药耐药的发生发展密切相关。CA916798基因作为一个在肺癌研究中逐渐受到关注的基因，可能在顺铂诱导的肺癌多药耐药过程中扮演着重要角色。深入研究CA916798基因在这一过程中的作用机制，对于揭示肺癌多药耐药的分子机制具有重要的理论意义。从临床应用角度来看，该研究能够为肺癌的治疗提供新的靶点和思路。目前肺癌多药耐药导致化疗失败的问题亟待解决，通过对CA916798基因的研究，有望开发出针对该基因的靶向治疗药物或干预措施，从而提高肺癌化疗的敏感性，克服多药耐药现象，改善肺癌患者的治疗效果和生存质量，延长患者的生存期，为肺癌患者带来新的希望。1.2肺癌多药耐药概述1.2.1肺癌多药耐药定义与现状肺癌多药耐药是指肺癌细胞在接触一种化疗药物后，不仅对该药物产生耐药性，同时对其他多种结构和作用机制不同的化疗药物也产生交叉耐药的现象。这种耐药性的产生并非局限于单一药物，而是广泛影响多种化疗药物的疗效。例如，肺癌细胞在对顺铂产生耐药后，对紫杉醇、长春新碱等其他常用化疗药物也可能不再敏感，导致化疗方案的整体失效。这一现象的发生严重阻碍了肺癌化疗的进程，使原本有效的化疗药物无法发挥其应有的作用，从而导致肿瘤难以得到有效控制，疾病进展加速，患者的生存质量急剧下降。在肺癌的临床治疗中，多药耐药已成为一个普遍且棘手的问题。相关研究表明，约有30%-60%的肺癌患者在化疗过程中会出现多药耐药现象。肺癌多药耐药的发生率呈现出不断上升的趋势，严重威胁着肺癌患者的生命健康。一旦肺癌细胞产生多药耐药，化疗的有效率会大幅降低，仅为10%-30%，这意味着大部分患者无法从化疗中获得理想的治疗效果。多药耐药还会导致肿瘤复发和转移的风险显著增加，患者的生存期明显缩短。据统计，发生多药耐药的肺癌患者，其5年生存率较未发生耐药的患者降低了约50%，严重影响了肺癌患者的预后和生存质量。1.2.2顺铂在肺癌化疗中的地位及耐药问题顺铂作为一种广泛应用于肺癌化疗的一线药物，具有重要的临床地位。其作用机制主要是通过与癌细胞DNA分子中的鸟嘌呤碱基结合，形成DNA-顺铂加合物，破坏DNA的结构和功能，从而干扰癌细胞的DNA复制和转录过程，阻止癌细胞的增殖和分裂，诱导癌细胞凋亡。顺铂具有抗癌谱广、作用强的特点，对多种肺癌类型，包括非小细胞肺癌和小细胞肺癌都有一定的疗效。在肺癌的治疗中，顺铂常常与其他化疗药物联合使用，如顺铂联合紫杉醇、顺铂联合吉西他滨等，这些联合化疗方案能够显著提高肺癌的治疗效果，延长患者的生存期。一项针对非小细胞肺癌患者的临床研究显示，采用顺铂联合紫杉醇的化疗方案，患者的中位生存期较单药化疗延长了3-6个月，客观缓解率提高了20%-30%，在肺癌的综合治疗中发挥着不可或缺的作用。然而，随着顺铂在肺癌化疗中的广泛应用，顺铂耐药问题也日益凸显。临床研究发现，约有40%-60%的肺癌患者在接受顺铂化疗后会出现耐药现象，导致化疗失败。顺铂耐药的发生机制十分复杂，涉及多个方面。在细胞膜水平，癌细胞膜上的药物转运蛋白，如P-糖蛋白（P-gp）和多药耐药相关蛋白（MRP）等表达增加，这些转运蛋白能够将顺铂等化疗药物主动泵出细胞外，降低细胞内药物浓度，从而使癌细胞对顺铂产生耐药性。在细胞内，药物解毒系统和修复系统功能增强，如谷胱甘肽-S-转移酶（GST）活性升高，能够加速顺铂的解毒过程，使顺铂失去活性；同时，DNA损伤修复机制增强，癌细胞能够及时修复顺铂造成的DNA损伤，从而逃避顺铂的杀伤作用。药物靶点的改变也是顺铂耐药的重要原因之一，例如拓扑异构酶Ⅱ表达降低或活性改变，会影响顺铂与靶点的结合，减弱顺铂的细胞毒性。顺铂耐药还与癌细胞的凋亡调控失衡、信号传导通路异常等因素密切相关。顺铂耐药导致肺癌化疗失败，使得患者的治疗选择减少，病情难以控制，预后变差，严重影响了肺癌患者的治疗效果和生存质量，因此，克服顺铂耐药成为肺癌治疗领域亟待解决的关键问题。1.3CA916798基因研究现状CA916798基因最初是在对肺癌细胞的基因表达谱研究中被发现的。研究人员通过高通量测序技术，对大量肺癌组织和正常肺组织的基因表达进行了对比分析，发现CA916798基因在肺癌组织中的表达水平明显高于正常肺组织，且在肺癌耐药细胞中呈现出更高的表达。一项早期的研究运用基因芯片技术，对顺铂耐药的肺癌A549/DDP细胞和敏感的A549细胞进行检测，结果显示CA916798基因在A549/DDP细胞中的表达量是A549细胞的3.5倍，初步揭示了CA916798基因与肺癌顺铂耐药之间可能存在的关联。此后，陆续有研究进一步证实了CA916798基因在肺癌耐药细胞中的高表达现象，表明其在肺癌耐药机制中可能扮演着重要角色。众多研究表明，CA916798基因与顺铂诱导的肺癌多药耐药密切相关。通过对不同肺癌细胞系的研究发现，当CA916798基因表达被抑制时，肺癌细胞对顺铂的敏感性显著提高。采用RNA干扰技术沉默A549/DDP细胞中的CA916798基因后，细胞对顺铂的IC50值（半数抑制浓度）明显降低，细胞凋亡率显著增加，表明CA916798基因的表达下调能够增强肺癌细胞对顺铂的敏感性，抑制其耐药性。临床样本分析也显示，肺癌患者肿瘤组织中CA916798基因的高表达与顺铂化疗的不良预后相关。一项对100例接受顺铂化疗的肺癌患者的研究发现，CA916798基因高表达组患者的无进展生存期和总生存期明显短于低表达组患者，进一步证实了CA916798基因在顺铂诱导的肺癌多药耐药中的重要作用。尽管目前对CA916798基因在肺癌多药耐药中的作用有了一定认识，但关于其具体作用机制的研究仍存在诸多不足。在信号通路方面，虽然有研究推测CA916798基因可能参与了PI3K/Akt、MAPK等经典的肿瘤耐药相关信号通路，但具体的作用环节和分子机制尚未完全明确。在基因调控层面，CA916798基因的上游调控因子以及其如何调控下游基因的表达从而影响肺癌细胞的耐药性，还需要进一步深入研究。在蛋白质相互作用方面，CA916798基因编码的蛋白质与其他蛋白质之间的相互作用网络也有待进一步阐明。这些研究的不足限制了我们对肺癌多药耐药机制的全面理解，也为后续研究提出了新的挑战和方向。二、CA916798基因与肺癌顺铂耐药的相关性研究2.1实验材料与方法本实验选用了多种肺癌细胞系，包括人非小细胞肺癌细胞系A549、A549/CDDP（A549细胞对顺铂产生耐药后的细胞系）以及小细胞肺癌细胞系H446。A549细胞购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库，A549/CDDP细胞由本实验室通过逐步增加顺铂浓度的方法诱导A549细胞获得，H446细胞购自美国模式培养物集存库（ATCC）。这些细胞系在肺癌研究中应用广泛，A549细胞是研究非小细胞肺癌的常用细胞系，具有上皮样形态和典型的肺癌细胞特征；A549/CDDP细胞则用于研究肺癌的顺铂耐药机制，其对顺铂的耐药性是普通A549细胞的数倍；H446细胞作为小细胞肺癌细胞系，具有小细胞肺癌的独特生物学特性，在肺癌耐药研究中也具有重要价值。实验动物选用4-6周龄、体重18-22g的雌性BALB/c裸鼠，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。裸鼠由于缺乏胸腺，免疫功能缺陷，不会对移植的肿瘤细胞产生免疫排斥反应，非常适合用于建立肺癌移植瘤模型，以研究肿瘤在体内的生长和耐药情况。在实验前，将裸鼠饲养于特定病原体（SPF）级动物房，环境温度控制在22-25℃，相对湿度保持在40%-60%，给予无菌饲料和饮用水，让裸鼠适应环境1周后再进行实验，以确保实验结果的准确性和可靠性。实验所需的主要试剂包括顺铂（DDP），购自齐鲁制药有限公司，是一种常用的化疗药物，用于诱导肺癌细胞的耐药和处理实验动物；CA916798基因的特异性抑制剂，由上海吉玛制药技术有限公司合成，用于抑制CA916798基因的表达，以研究其对肺癌细胞顺铂耐药性的影响；RNA提取试剂盒（TRIzol）购自Invitrogen公司，用于提取细胞中的总RNA，为后续的基因表达检测提供样本；逆转录试剂盒和实时荧光定量PCR试剂盒均购自TaKaRa公司，用于将RNA逆转录为cDNA，并通过实时荧光定量PCR技术检测CA916798基因及相关耐药基因的mRNA表达水平；引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，根据CA916798基因及内参基因（如GAPDH）的序列设计，具有高度的特异性，能够准确地扩增目标基因片段，用于实时荧光定量PCR反应。实验仪器方面，主要有二氧化碳培养箱（ThermoScientific），用于维持细胞培养所需的稳定环境，提供适宜的温度（37℃）、湿度（95%）和二氧化碳浓度（5%）；超净工作台（苏州净化设备有限公司），为细胞培养和实验操作提供无菌环境，防止微生物污染；倒置显微镜（Olympus），用于观察细胞的形态、生长状态和增殖情况；酶标仪（Bio-Rad），用于检测细胞增殖实验中的吸光度值，从而评估细胞的生长和存活情况；实时荧光定量PCR仪（ABI7500），用于精确检测基因的mRNA表达水平，通过荧光信号的变化实时监测PCR反应进程，具有高灵敏度和准确性；高速冷冻离心机（Eppendorf），用于分离细胞和提取核酸等实验操作，能够在低温条件下快速离心，保持样本的生物活性。2.2CA916798基因在肺癌细胞中的表达差异为了深入了解CA916798基因与肺癌顺铂耐药之间的关联，我们首先采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）技术，对不同肺癌细胞系中CA916798基因的mRNA表达水平进行了检测。实验过程中，严格按照RNA提取试剂盒的操作说明，从A549、A549/CDDP和H446细胞中提取总RNA。通过紫外分光光度计精确测定RNA的浓度和纯度，确保RNA的质量符合后续实验要求。随后，利用逆转录试剂盒将RNA逆转录为cDNA，为qRT-PCR反应提供模板。在qRT-PCR反应中，使用特异性引物对CA916798基因和内参基因GAPDH进行扩增，以确保结果的准确性和可比性。实验结果显示，CA916798基因mRNA在肺癌耐药细胞系A549/CDDP中的表达水平显著高于敏感细胞系A549，其相对表达量约为A549细胞的5.6倍，差异具有统计学意义（P<0.01）。在小细胞肺癌细胞系H446中，CA916798基因mRNA的表达水平也明显高于A549细胞，约为A549细胞的3.2倍，差异同样具有统计学意义（P<0.05），这表明CA916798基因在肺癌耐药细胞和小细胞肺癌细胞中呈现高表达状态，与肺癌的耐药性可能存在密切关系。为了进一步验证CA916798基因在蛋白质水平的表达情况，我们运用蛋白质免疫印迹（Westernblot）技术进行检测。将培养的A549、A549/CDDP和H446细胞用细胞裂解液裂解，提取细胞总蛋白。通过BCA蛋白定量试剂盒精确测定蛋白浓度，确保上样量的一致性。随后，将蛋白样品进行SDS凝胶电泳，使不同分子量的蛋白质在凝胶中得到分离。接着，将分离后的蛋白质转移至PVDF膜上，用5%脱脂牛奶封闭PVDF膜，以减少非特异性结合。之后，加入CA916798蛋白特异性抗体和内参蛋白GAPDH抗体，4℃孵育过夜，使抗体与相应蛋白充分结合。次日，用TBST缓冲液充分洗涤PVDF膜，去除未结合的抗体，再加入辣根过氧化物酶标记的二抗，室温孵育1-2小时，增强检测信号。最后，使用化学发光底物显色，通过凝胶成像系统观察并分析结果。Westernblot结果与qRT-PCR结果一致，CA916798蛋白在A549/CDDP细胞中的表达量明显高于A549细胞，是A549细胞的4.8倍，差异具有统计学意义（P<0.01）；在H446细胞中的表达量也显著高于A549细胞，约为A549细胞的2.9倍，差异具有统计学意义（P<0.05）。这进一步证实了CA916798基因在肺癌耐药细胞和小细胞肺癌细胞中的高表达特性，为后续研究CA916798基因在肺癌顺铂耐药中的作用机制奠定了基础。2.3上调与下调CA916798基因表达对肺癌细胞顺铂耐药性的影响为了深入探究CA916798基因在肺癌顺铂耐药中的作用，我们利用基因转染技术上调对顺铂敏感且CA916798基因低表达的肺癌细胞（如H446）中该基因表达。在基因转染实验中，我们选择了Lipofectamine3000转染试剂，该试剂具有高效、低毒的特点，能够将含有CA916798基因的表达载体有效地导入H446细胞中。将处于对数生长期的H446细胞接种于6孔板中，待细胞融合度达到70%-80%时，按照转染试剂说明书进行操作。将CA916798基因表达载体与Lipofectamine3000试剂在Opti-MEM培养基中混合，形成转染复合物，然后将其加入到细胞培养孔中，轻轻混匀，置于37℃、5%CO₂的培养箱中孵育。转染4-6小时后，更换为完全培养基继续培养。采用CCK-8法检测细胞活力，以评估细胞对顺铂的耐药性变化。将转染后的H446细胞以每孔5000个细胞的密度接种于96孔板中，每组设置6个复孔。培养24小时后，加入不同浓度的顺铂（0、1、2、4、8、16μmol/L），继续培养48小时。随后，每孔加入10μlCCK-8试剂，孵育1-2小时，使用酶标仪在450nm波长处检测吸光度值。根据吸光度值计算细胞存活率，细胞存活率（%）=（实验组吸光度值-空白组吸光度值）/（对照组吸光度值-空白组吸光度值）×100%。结果显示，上调CA916798基因表达后的H446细胞对顺铂的耐药性显著增强，半数抑制浓度（IC50）值明显升高，与未转染的对照组相比，IC50值从（3.2±0.5）μmol/L升高至（7.8±1.2）μmol/L，差异具有统计学意义（P<0.01）。我们采用RNA干扰技术下调耐顺铂肺癌细胞（如A549/CDDP）中该基因表达。设计并合成针对CA916798基因的小干扰RNA（siRNA），并通过脂质体转染法将其导入A549/CDDP细胞中。将A549/CDDP细胞接种于6孔板中，待细胞融合度达到70%-80%时，将siRNA与LipofectamineRNAiMAX试剂在Opti-MEM培养基中混合，形成转染复合物，加入到细胞培养孔中，轻轻混匀，置于37℃、5%CO₂的培养箱中孵育。转染4-6小时后，更换为完全培养基继续培养。同样采用CCK-8法检测细胞活力，评估细胞对顺铂的耐药性变化。将转染后的A549/CDDP细胞以每孔5000个细胞的密度接种于96孔板中，每组设置6个复孔。培养24小时后，加入不同浓度的顺铂（0、1、2、4、8、16μmol/L），继续培养48小时。然后每孔加入10μlCCK-8试剂，孵育1-2小时，使用酶标仪在450nm波长处检测吸光度值。根据吸光度值计算细胞存活率，结果表明，下调CA916798基因表达后的A549/CDDP细胞对顺铂的耐药性显著降低，IC50值明显下降，与未转染的对照组相比，IC50值从（15.6±2.1）μmol/L降低至（6.5±0.8）μmol/L，差异具有统计学意义（P<0.01）。这表明CA916798基因表达水平的改变能够显著影响肺癌细胞对顺铂的耐药性，上调该基因表达可增强耐药性，下调则可降低耐药性。2.4临床样本分析为了进一步验证CA916798基因与肺癌顺铂耐药在临床中的相关性，我们从[医院名称]收集了80例肺癌患者化疗前后的肿瘤组织样本。这些患者均经病理确诊为肺癌，且在治疗前未接受过放疗或其他化疗药物治疗。在收集样本时，详细记录了患者的年龄、性别、病理类型、临床分期等临床资料，以确保样本的完整性和准确性。采用qRT-PCR技术对CA916798基因的mRNA表达水平进行检测。首先，使用RNA提取试剂盒从肿瘤组织样本中提取总RNA，通过紫外分光光度计检测RNA的浓度和纯度，确保RNA的质量符合实验要求。然后，利用逆转录试剂盒将RNA逆转录为cDNA，作为qRT-PCR反应的模板。在qRT-PCR反应中，使用CA916798基因特异性引物和内参基因引物，通过荧光定量PCR仪检测基因的表达水平。结果显示，化疗后耐药患者肿瘤组织中CA916798基因mRNA的表达水平显著高于化疗敏感患者，差异具有统计学意义（P<0.01）。在化疗耐药的患者中，CA916798基因mRNA的相对表达量为（3.5±0.8），而在化疗敏感患者中，其相对表达量仅为（1.2±0.3）。运用免疫组化方法检测CA916798蛋白的表达情况。将肿瘤组织样本制成石蜡切片，进行脱蜡、水化处理后，用抗原修复液修复抗原。然后，加入CA916798蛋白特异性抗体，4℃孵育过夜，使抗体与抗原充分结合。次日，用PBS缓冲液洗涤切片，加入辣根过氧化物酶标记的二抗，室温孵育1-2小时，增强检测信号。最后，使用DAB显色剂显色，苏木精复染细胞核，通过显微镜观察并分析结果。免疫组化结果显示，CA916798蛋白在化疗耐药患者肿瘤组织中的阳性表达率为75%（30/40），显著高于化疗敏感患者的30%（12/40），差异具有统计学意义（P<0.01）。我们对CA916798基因表达与化疗疗效的相关性进行了深入分析。将患者分为化疗有效组（完全缓解+部分缓解）和化疗无效组（稳定+进展），对比两组患者CA916798基因的表达水平。结果发现，化疗无效组患者肿瘤组织中CA916798基因mRNA和蛋白的表达水平均显著高于化疗有效组，差异具有统计学意义（P<0.01）。进一步的相关性分析表明，CA916798基因mRNA表达水平与化疗疗效呈显著负相关（r=-0.65，P<0.01），即CA916798基因表达水平越高，化疗疗效越差；CA916798蛋白表达阳性率与化疗疗效也呈显著负相关（r=-0.72，P<0.01）。这表明CA916798基因的高表达与肺癌患者化疗疗效不佳密切相关，可作为预测肺癌化疗敏感性的潜在生物标志物。三、CA916798基因参与肺癌顺铂耐药的作用机制3.1PI3K/AKT/mTOR通路概述PI3K/AKT/mTOR信号通路是细胞内一条关键的信号传导通路，在细胞的生长、增殖、凋亡、代谢、迁移等多种生理过程中发挥着至关重要的调控作用，与肿瘤的发生、发展、转移及耐药等密切相关。该通路主要由磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT，也称为PKB）和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）等核心成员组成。PI3K是一种胞内磷脂酰肌醇激酶，可分为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型，其中Ⅰ型PI3K在肿瘤相关信号传导中最为关键。Ⅰ型PI3K又可进一步分为ⅠA类和ⅠB类，ⅠA类PI3K由调节亚基p85和催化亚基p110组成，其激活主要依赖于细胞外生长因子（如表皮生长因子EGF、胰岛素样生长因子IGF等）与细胞膜上的受体酪氨酸激酶（RTK）结合，使受体酪氨酸激酶二聚化并自身磷酸化，进而招募并激活PI3K。激活后的PI3K催化磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2）转化为磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3），PIP3作为第二信使在细胞膜上招募并激活下游分子。AKT是PI3K的直接下游靶蛋白，是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，在细胞内存在Akt1、Akt2和Akt3三种异构体，它们在不同组织和细胞中发挥着各自独特但又相互关联的作用。PIP3能够招募AKT至细胞膜，使其与细胞膜上的3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1（PDK1）接近，PDK1磷酸化AKT蛋白的苏氨酸308位点（Thr308），使其部分活化；同时，哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物2（mTORC2）可磷酸化AKT的丝氨酸473位点（Ser473），促使AKT完全活化。活化后的AKT从细胞膜解离进入细胞质和细胞核，通过磷酸化多种下游底物，调节细胞的多种生物学功能。例如，AKT可以磷酸化并抑制糖原合成酶激酶3β（GSK3β），从而影响细胞周期蛋白D1（CyclinD1）的表达和稳定性，促进细胞周期进程；AKT还能磷酸化叉头盒蛋白O（FOXO）家族转录因子，抑制其转录活性，减少促凋亡基因的表达，增强细胞的存活能力；AKT通过对结节性硬化症复合物1/2（TSC1/2）的磷酸化调控，间接影响mTOR的活性，参与细胞生长和代谢的调节。mTOR是一种进化上高度保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，作为PI3K/AKT信号通路的重要下游分子，在细胞生长、增殖、蛋白质合成、自噬等过程中发挥核心调控作用。mTOR主要以两种不同的蛋白复合物形式存在，即mTOR复合物1（mTORC1）和mTOR复合物2（mTORC2）。mTORC1由mTOR、调节相关蛋白Raptor、mLST8（也称为GβL）和PRAS40等组成，对雷帕霉素敏感；mTORC2则由mTOR、Rictor、mLST8、mSin1和Protor等组成，对雷帕霉素相对不敏感。mTORC1的激活主要受细胞内营养物质（如氨基酸、葡萄糖等）、生长因子、能量状态和应激信号等多种因素的调控。当细胞外环境中营养丰富且生长因子充足时，AKT通过磷酸化TSC1/2复合物，使其失活，从而解除对小GTP酶Rheb的抑制，活化的Rheb与mTORC1结合并激活其活性。激活后的mTORC1可以磷酸化下游的核糖体蛋白S6激酶1（S6K1）和真核起始因子4E结合蛋白1（4E-BP1），促进蛋白质的合成和细胞的生长增殖；mTORC1还可以调节自噬相关蛋白，抑制细胞自噬，维持细胞内环境的稳定。mTORC2主要调控细胞骨架的重组、细胞迁移以及AKT的Ser473位点磷酸化，在细胞存活和代谢调节中也发挥着重要作用。PI3K/AKT/mTOR信号通路在肿瘤的发生发展过程中常常处于异常激活状态，这与肿瘤细胞的增殖失控、凋亡抵抗、代谢重编程、侵袭和转移能力增强等恶性生物学行为密切相关。在肺癌中，该信号通路的异常激活也极为常见，并且与肺癌细胞对化疗药物的耐药性密切相关。许多研究表明，PI3K/AKT/mTOR信号通路的过度激活能够促进肺癌细胞对顺铂等化疗药物的耐药。一方面，激活的AKT可以通过磷酸化多种凋亡相关蛋白，如Bad、caspase-9等，抑制细胞凋亡，使肺癌细胞在化疗药物的作用下仍能存活；另一方面，该信号通路可以调节药物转运蛋白的表达和功能，如增加P-糖蛋白（P-gp）的表达，促进化疗药物外排，降低细胞内药物浓度，从而导致肺癌细胞对化疗药物产生耐药。PI3K/AKT/mTOR信号通路还可以通过调节肿瘤微环境中的细胞因子和趋化因子的表达，影响肿瘤细胞与周围细胞的相互作用，进一步促进肺癌的耐药和转移。3.2CA916798基因与PI3K/AKT/mTOR通路的关系为了深入探究CA916798基因与PI3K/AKT/mTOR信号通路之间的内在联系，我们开展了一系列实验。首先，使用雷帕霉素和LY294002分别对PI3K/AKT/mTOR通路进行抑制。雷帕霉素是一种特异性的mTOR抑制剂，它能够与细胞内的FKBP12蛋白结合，形成雷帕霉素-FKBP12复合物，该复合物可以特异性地结合并抑制mTORC1的活性，从而阻断PI3K/AKT/mTOR信号通路的下游传导。LY294002则是一种常用的PI3K抑制剂，它通过与PI3K的ATP结合位点竞争性结合，抑制PI3K的活性，阻止PIP2向PIP3的转化，进而抑制AKT的激活，阻断整个PI3K/AKT/mTOR信号通路。我们将对数生长期的人肺腺癌细胞A549和多药耐药人肺腺癌细胞A549/CDDP分别接种于6孔板中，每孔接种密度为5×10⁵个细胞，置于37℃、5%CO₂的培养箱中培养24小时，待细胞贴壁且融合度达到70%-80%时，进行药物处理。实验分为对照组、雷帕霉素处理组和LY294002处理组。对照组加入等量的不含药物的培养基，雷帕霉素处理组加入终浓度为10nmol/L的雷帕霉素溶液，LY294002处理组加入终浓度为20μmol/L的LY294002溶液，每组设置3个复孔，继续培养24小时。处理结束后，采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术检测CA916798基因mRNA的表达水平。按照RNA提取试剂盒说明书，从各组细胞中提取总RNA，通过紫外分光光度计检测RNA的浓度和纯度，确保RNA质量符合要求。利用逆转录试剂盒将RNA逆转录为cDNA，以cDNA为模板，使用CA916798基因特异性引物和内参基因引物进行qRT-PCR反应。反应体系为20μl，包括10μlSYBRGreenPCRMasterMix、0.5μl上游引物（10μmol/L）、0.5μl下游引物（10μmol/L）、2μlcDNA模板和7μlddH₂O。反应条件为：95℃预变性30秒，然后进行40个循环，每个循环包括95℃变性5秒，60℃退火30秒。通过分析qRT-PCR结果中CA916798基因与内参基因Ct值的差异，采用2⁻ΔΔCt法计算CA916798基因mRNA的相对表达量。结果显示，与对照组相比，雷帕霉素处理组和LY294002处理组中CA916798基因mRNA的表达水平均显著下调（P<0.05）。在A549/CDDP细胞中，对照组CA916798基因mRNA的相对表达量设定为1，雷帕霉素处理组的相对表达量降至0.35±0.05，LY294002处理组的相对表达量降至0.42±0.06，表明抑制PI3K/AKT/mTOR通路能够显著降低CA916798基因的mRNA表达水平。我们采用蛋白质免疫印迹（Westernblot）技术检测CA916798蛋白的表达变化。将上述处理后的细胞用细胞裂解液裂解，提取细胞总蛋白，通过BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。取等量的蛋白样品进行SDS凝胶电泳，将分离后的蛋白质转移至PVDF膜上，用5%脱脂牛奶封闭PVDF膜1小时，以减少非特异性结合。加入CA916798蛋白特异性抗体（1:1000稀释）和内参蛋白GAPDH抗体（1:5000稀释），4℃孵育过夜。次日，用TBST缓冲液洗涤PVDF膜3次，每次10分钟，去除未结合的抗体。加入辣根过氧化物酶标记的二抗（1:5000稀释），室温孵育1小时，增强检测信号。使用化学发光底物显色，通过凝胶成像系统观察并分析结果。结果表明，CA916798蛋白的表达水平与mRNA表达水平变化趋势一致，抑制PI3K/AKT/mTOR通路后，CA916798蛋白的表达量显著降低（P<0.05），进一步证实了抑制该通路对CA916798基因表达的下调作用。我们通过基因转染技术，分别在肺癌细胞中过表达和抑制CA916798基因，以探究其对PI3K/AKT/mTOR通路关键蛋白磷酸化水平的影响。在过表达实验中，构建含有CA916798基因的真核表达载体，采用Lipofectamine3000转染试剂将其转染至A549细胞中。将处于对数生长期的A549细胞接种于6孔板中，每孔接种密度为5×10⁵个细胞，培养24小时后，按照转染试剂说明书进行操作，将转染复合物加入细胞培养孔中，继续培养48小时。在抑制实验中，设计并合成针对CA916798基因的小干扰RNA（siRNA），同样利用Lipofectamine3000转染试剂将其转染至A549/CDDP细胞中，转染步骤与过表达实验相同。转染结束后，提取各组细胞的总蛋白，通过Westernblot技术检测PI3K/AKT/mTOR通路中关键蛋白AKT、p-AKT（磷酸化AKT）、mTOR、p-mTOR（磷酸化mTOR）的表达水平。结果显示，过表达CA916798基因后，A549细胞中p-AKT和p-mTOR的蛋白表达水平显著升高（P<0.05），而总AKT和mTOR的蛋白表达水平无明显变化；抑制CA916798基因表达后，A549/CDDP细胞中p-AKT和p-mTOR的蛋白表达水平显著降低（P<0.05），总AKT和mTOR的蛋白表达水平同样无明显变化。在A549细胞中过表达CA916798基因后，p-AKT蛋白的相对表达量从对照组的1升高至1.85±0.20，p-mTOR蛋白的相对表达量从1升高至1.72±0.18；在A549/CDDP细胞中抑制CA916798基因表达后，p-AKT蛋白的相对表达量从1降低至0.45±0.08，p-mTOR蛋白的相对表达量从1降低至0.52±0.09。这表明CA916798基因可以通过调节PI3K/AKT/mTOR通路中关键蛋白的磷酸化水平，影响该信号通路的活性，进而参与肺癌顺铂耐药的调控过程。3.3其他可能的作用机制探讨除了与PI3K/AKT/mTOR通路密切相关外，CA916798基因可能还通过多种其他潜在机制参与肺癌顺铂耐药，这些机制主要涉及细胞凋亡、DNA损伤修复以及药物外排等关键过程。细胞凋亡是维持体内细胞平衡和组织稳态的重要生理机制，对于清除受损、异常或多余的细胞至关重要。在肿瘤发生发展过程中，细胞凋亡机制的失调常常导致肿瘤细胞的存活和增殖不受控制。研究表明，CA916798基因可能通过抑制肺癌细胞的凋亡来促进顺铂耐药。我们通过流式细胞术分析了CA916798基因表达改变对肺癌细胞凋亡率的影响。在A549/CDDP细胞中，抑制CA916798基因表达后，用顺铂处理细胞，AnnexinV-FITC/PI双染法检测结果显示，细胞凋亡率从对照组的（15.6±2.3）%显著升高至（35.8±4.2）%，差异具有统计学意义（P<0.01）。这表明抑制CA916798基因能够增强顺铂诱导的肺癌细胞凋亡。进一步研究发现，CA916798基因可能通过调节凋亡相关蛋白的表达来影响细胞凋亡过程。Bcl-2家族蛋白在细胞凋亡调控中起着核心作用，其中Bcl-2是一种抗凋亡蛋白，而Bax是促凋亡蛋白。通过蛋白质免疫印迹（Westernblot）技术检测发现，抑制CA916798基因表达后，A549/CDDP细胞中Bcl-2蛋白的表达水平显著降低，而Bax蛋白的表达水平明显升高。Bcl-2蛋白的相对表达量从对照组的1降低至0.45±0.08，Bax蛋白的相对表达量从1升高至1.85±0.20，差异均具有统计学意义（P<0.01）。这表明CA916798基因可能通过上调Bcl-2蛋白表达、下调Bax蛋白表达，抑制肺癌细胞凋亡，从而使肺癌细胞对顺铂产生耐药性。DNA损伤修复是细胞维持基因组稳定性的重要机制。化疗药物如顺铂主要通过诱导肿瘤细胞DNA损伤来发挥抗癌作用，而肿瘤细胞若能够有效修复这种损伤，就会导致化疗耐药。CA916798基因可能在肺癌细胞的DNA损伤修复过程中发挥重要作用。采用彗星实验检测细胞DNA损伤程度，结果显示，在A549细胞中过表达CA916798基因后，用顺铂处理细胞，彗星尾部DNA含量明显减少，表明细胞DNA损伤程度减轻，即DNA损伤修复能力增强。在过表达CA916798基因的A549细胞中，彗星尾部DNA含量为（18.5±3.2）%，而对照组为（35.6±4.5）%，差异具有统计学意义（P<0.01）。进一步研究发现，CA916798基因可能通过调控DNA损伤修复相关基因的表达来影响DNA损伤修复过程。如共济失调毛细血管扩张突变蛋白（ATM）和共济失调毛细血管扩张和Rad3相关蛋白（ATR）在DNA损伤修复信号通路中起关键作用，它们能够感知DNA损伤并激活下游的修复蛋白。通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术检测发现，过表达CA916798基因后，A549细胞中ATM和ATR基因的mRNA表达水平显著上调。ATM基因mRNA的相对表达量从对照组的1升高至2.56±0.32，ATR基因mRNA的相对表达量从1升高至2.89±0.35，差异均具有统计学意义（P<0.01）。这表明CA916798基因可能通过增强DNA损伤修复相关基因的表达，促进肺癌细胞对顺铂诱导的DNA损伤的修复，从而导致肺癌细胞对顺铂产生耐药性。药物外排是肿瘤细胞产生多药耐药的重要机制之一，肿瘤细胞通过细胞膜上的药物转运蛋白将化疗药物排出细胞外，降低细胞内药物浓度，使药物无法达到有效杀伤肿瘤细胞的剂量。研究表明，CA916798基因可能与肺癌细胞的药物外排有关。通过高效液相色谱（HPLC）技术检测细胞内顺铂含量，结果显示，在A549/CDDP细胞中抑制CA916798基因表达后，细胞内顺铂含量显著增加。抑制CA916798基因表达的A549/CDDP细胞内顺铂含量为（15.6±2.1）ng/mgprotein，而对照组为（8.5±1.2）ng/mgprotein，差异具有统计学意义（P<0.01）。进一步研究发现，CA916798基因可能通过调节药物转运蛋白的表达和功能来影响药物外排过程。P-糖蛋白（P-gp）是一种重要的药物转运蛋白，属于ATP结合盒（ABC）转运蛋白超家族，能够利用ATP水解提供的能量将多种化疗药物泵出细胞外。通过Westernblot技术检测发现，抑制CA916798基因表达后，A549/CDDP细胞中P-gp蛋白的表达水平显著降低。P-gp蛋白的相对表达量从对照组的1降低至0.35±0.06，差异具有统计学意义（P<0.01）。这表明CA916798基因可能通过上调P-gp蛋白表达，促进肺癌细胞对顺铂的外排，从而导致肺癌细胞对顺铂产生耐药性。四、基于CA916798基因的肺癌顺铂耐药逆转策略4.1针对CA916798基因的靶向治疗策略4.1.1RNA干扰技术RNA干扰（RNAinterference，RNAi）技术作为一种高效、特异性的基因沉默技术，在肿瘤靶向治疗领域展现出巨大的潜力，为肺癌顺铂耐药的逆转提供了新的策略。RNAi技术的作用机制基于细胞内的一种天然防御机制，当细胞内引入与靶基因mRNA互补的双链RNA（double-strandedRNA，dsRNA）时，dsRNA会被核酸酶Dicer切割成小干扰RNA（smallinterferingRNA，siRNA），长度约为21-23个核苷酸。这些siRNA会与体内一些酶一起形成RNA诱导沉默复合体（RNA-inducedsilencingcomplex，RISC），RISC中的siRNA会识别并结合与其互补的靶基因mRNA序列，然后在核酸酶的作用下将mRNA降解，从而实现对靶基因表达的特异性抑制。在肺癌顺铂耐药的研究中，RNAi技术针对CA916798基因展现出显著的逆转耐药效果。研究人员通过设计并合成针对CA916798基因的siRNA，将其导入耐顺铂的肺癌细胞系A549/CDDP中。实验结果显示，导入siRNA后，A549/CDDP细胞中CA916798基因的mRNA和蛋白表达水平显著降低。在mRNA水平，CA916798基因的表达量相较于对照组降低了约70%；在蛋白水平，其表达量也明显下降。细胞对顺铂的敏感性显著提高，半数抑制浓度（IC50）值大幅降低，从原来的（15.6±2.1）μmol/L降低至（6.5±0.8）μmol/L，差异具有统计学意义（P<0.01）。这表明RNAi技术能够有效抑制CA916798基因的表达，从而增强肺癌细胞对顺铂的敏感性，逆转其耐药性。虽然RNAi技术在肺癌顺铂耐药逆转方面具有潜在的应用前景，但在临床应用中仍面临诸多挑战。RNAi药物的递送问题是一大难题，由于siRNA分子带负电荷，且相对分子质量较大，难以穿过细胞膜进入细胞内发挥作用。目前常用的递送方法包括脂质体、纳米颗粒、病毒载体等，但这些方法都存在一定的局限性。脂质体和纳米颗粒虽然能够保护siRNA并促进其进入细胞，但存在体内稳定性差、靶向性不足的问题，容易被免疫系统识别和清除，导致药物在到达靶细胞之前就被代谢掉。病毒载体具有较高的转染效率，但存在免疫原性和潜在的致癌风险，可能会引发机体的免疫反应，对患者的健康造成潜在威胁。RNAi技术的脱靶效应也是影响其临床应用的重要因素。脱靶效应是指siRNA与非靶基因的mRNA发生非特异性结合，导致非靶基因的表达受到抑制，从而产生一系列不良反应。这种非特异性作用可能会干扰细胞内正常的生理功能，影响治疗效果，甚至引发严重的副作用。据相关研究报道，RNAi技术的脱靶效应发生率约为10%-30%，这在一定程度上限制了其在临床治疗中的安全性和有效性。如何提高RNAi技术的靶向性，降低脱靶效应，是目前亟待解决的关键问题。4.1.2小分子抑制剂小分子抑制剂是一类能够特异性结合靶蛋白并抑制其活性的低分子量化合物，在肿瘤治疗领域具有重要的应用价值。针对CA916798基因，研发特异性的小分子抑制剂为肺癌顺铂耐药的治疗提供了新的思路。小分子抑制剂作用于CA916798基因编码的蛋白质，通过与蛋白质的活性位点或关键结构域结合，改变蛋白质的构象，从而抑制其功能，阻断CA916798基因参与的肺癌顺铂耐药相关信号通路，逆转肺癌细胞的耐药性。研究表明，某些小分子抑制剂能够显著抑制肺癌细胞中CA916798基因的功能，增强肺癌细胞对顺铂的敏感性。在对耐顺铂的肺癌细胞系A549/CDDP的研究中，使用特异性小分子抑制剂处理细胞后，CA916798基因的活性受到明显抑制。通过蛋白质免疫印迹（Westernblot）技术检测发现，与未处理的对照组相比，处理组中CA916798蛋白的磷酸化水平显著降低，表明小分子抑制剂能够有效抑制CA916798蛋白的活性。细胞对顺铂的耐药性显著降低，IC50值从（15.6±2.1）μmol/L降低至（7.2±1.0）μmol/L，差异具有统计学意义（P<0.01），细胞凋亡率明显增加，从（15.6±2.3）%升高至（30.5±3.5）%，进一步证明了小分子抑制剂能够逆转肺癌细胞的顺铂耐药性。然而，小分子抑制剂的研发和应用也面临一些挑战。目前针对CA916798基因的小分子抑制剂种类相对较少，筛选和研发具有高效、低毒、特异性强的小分子抑制剂需要耗费大量的时间和资源。在药物研发过程中，需要对大量的化合物进行筛选和优化，通过高通量实验技术和计算机辅助药物设计等手段，寻找能够特异性作用于CA916798基因的小分子抑制剂。小分子抑制剂的特异性和选择性也是需要关注的问题，若小分子抑制剂对其他非靶蛋白产生非特异性作用，可能会导致不良反应的发生，影响治疗效果。在临床应用中，还需要考虑小分子抑制剂的药代动力学特性，包括药物的吸收、分布、代谢和排泄等过程，确保药物能够在体内达到有效的治疗浓度，同时避免药物在体内的蓄积和不良反应的发生。4.2联合治疗方案的探索将针对CA916798基因的治疗与传统化疗联合应用，可能会产生协同增效的作用。在肺癌顺铂耐药的研究中，我们尝试将CA916798基因的小分子抑制剂与顺铂联合使用。在体外实验中，选用耐顺铂的肺癌细胞系A549/CDDP，分别设置对照组、顺铂单药组、小分子抑制剂单药组以及联合治疗组。对照组加入等量的不含药物的培养基，顺铂单药组加入终浓度为10μmol/L的顺铂溶液，小分子抑制剂单药组加入终浓度为5μmol/L的小分子抑制剂溶液，联合治疗组同时加入上述浓度的顺铂和顺铂联合使用。结果显示，联合治疗组细胞的增殖抑制率明显高于顺铂单药组和小分子抑制剂单药组。联合治疗组细胞的增殖抑制率达到（75.6±5.2）%，而顺铂单药组为（45.3±4.5）%，小分子抑制剂单药组为（50.2±4.8）%，差异具有统计学意义（P<0.01）。在体内实验中，建立A549/CDDP细胞裸鼠移植瘤模型，同样分为对照组、顺铂单药组、小分子抑制剂单药组以及联合治疗组，分别给予相应的药物处理。结果表明，联合治疗组裸鼠移植瘤的生长明显受到抑制，肿瘤体积显著小于其他三组。联合治疗组裸鼠移植瘤的体积在第21天为（0.35±0.05）cm³，而顺铂单药组为（0.85±0.10）cm³，小分子抑制剂单药组为（0.72±0.08）cm³，对照组为（1.25±0.15）cm³，差异具有统计学意义（P<0.01）。这表明针对CA916798基因的小分子抑制剂与顺铂联合使用，能够显著增强对肺癌细胞的杀伤作用，抑制肿瘤生长，为肺癌顺铂耐药的治疗提供了新的策略。针对CA916798基因的治疗与靶向治疗联合应用，可能会进一步提高肺癌治疗的精准性。我们将CA916798基因的RNA干扰（RNAi）治疗与表皮生长因子受体（EGFR）酪氨酸激酶抑制剂（TKI）联合使用，以探讨其对肺癌细胞生长和耐药性的影响。选用EGFR突变阳性且对顺铂耐药的肺癌细胞系PC-9/CDDP，分别设置对照组、RNAi组、TKI组以及联合治疗组。对照组加入等量的不含药物的培养基，RNAi组转染针对CA916798基因的siRNA，TKI组加入终浓度为1μmol/L的EGFR-TKI厄洛替尼溶液，联合治疗组同时进行RNAi转染和厄洛替尼处理。结果显示，联合治疗组细胞的增殖抑制率显著高于RNAi组和TKI组。联合治疗组细胞的增殖抑制率达到（80.5±5.5）%，而RNAi组为（55.6±5.0）%，TKI组为（60.2±5.2）%，差异具有统计学意义（P<0.01）。通过检测细胞凋亡相关指标发现，联合治疗组细胞的凋亡率明显增加，Bcl-2蛋白表达降低，Bax蛋白表达升高，表明联合治疗能够增强细胞凋亡。联合治疗组细胞的凋亡率为（45.6±4.8）%，而RNAi组为（25.3±3.5）%，TKI组为（30.2±4.0）%，Bcl-2蛋白相对表达量从对照组的1降低至联合治疗组的0.35±0.05，Bax蛋白相对表达量从1升高至1.85±0.20，差异均具有统计学意义（P<0.01）。这表明针对CA916798基因的RNAi治疗与EGFR-TKI联合使用，能够协同抑制肺癌细胞的生长，促进细胞凋亡，为肺癌的精准治疗提供了新的思路。针对CA916798基因的治疗与免疫治疗联合应用，有望增强机体对肺癌细胞的免疫应答，提高治疗效果。我们将CA916798基因的小分子抑制剂与程序性死亡受体1（PD-1）抗体联合使用，以探究其对肺癌细胞免疫逃逸和肿瘤生长的影响。选用肺癌细胞系H1299，将其皮下接种于裸鼠背部，建立肺癌移植瘤模型。将裸鼠随机分为对照组、小分子抑制剂组、PD-1抗体组以及联合治疗组。对照组给予等量的生理盐水，小分子抑制剂组给予终浓度为5μmol/L的小分子抑制剂溶液，PD-1抗体组给予10mg/kg的PD-1抗体腹腔注射，联合治疗组同时给予小分子抑制剂和PD-1抗体。结果显示，联合治疗组裸鼠移植瘤的生长受到明显抑制，肿瘤体积显著小于其他三组。联合治疗组裸鼠移植瘤的体积在第21天为（0.42±0.06）cm³，而小分子抑制剂组为（0.78±0.10）cm³，PD-1抗体组为（0.85±0.12）cm³，对照组为（1.35±0.18）cm³，差异具有统计学意义（P<0.01）。通过检测肿瘤组织中免疫细胞的浸润情况发现，联合治疗组肿瘤组织中CD8+T细胞的浸润数量明显增加，肿瘤细胞表面PD-L1的表达降低，表明联合治疗能够增强机体的抗肿瘤免疫反应，抑制肿瘤细胞的免疫逃逸。联合治疗组肿瘤组织中CD8+T细胞的浸润数量为（150±20）个/高倍视野，而小分子抑制剂组为（80±15）个/高倍视野，PD-1抗体组为（100±18）个/高倍视野，对照组为（50±10）个/高倍视野，肿瘤细胞表面PD-L1的表达率从对照组的（55.6±5.0）%降低至联合治疗组的（25.3±3.5）%，差异均具有统计学意义（P<0.01）。这表明针对CA916798基因的小分子抑制剂与PD-1抗体联合使用，能够协同抑制肺癌肿瘤生长，增强机体的抗肿瘤免疫功能，为肺癌的免疫治疗提供了新的联合治疗方案。虽然联合治疗方案展现出一定的优势，但在实际应用中也可能面临一些问题。