CN120254128A 鲜竹沥中酚类化合物和醛类化合物的定性分析方法及应用 （江西景德中药股份有限公司）

(19)国家知识产权局(10)申请公布号CN120254128A(71)申请人江西景德中药股份有限公司地址333302江西省景德镇市乐平市双田镇雷公山申请人江西中医药大学江西中医药大学附属医院江西省人民医院(72)发明人张雨恬曹萱伍振峰杨明徐葱茏陈志平张江山肖小林叶明磊(74)专利代理机构北京超凡宏宇知识产权代理有限公司11463专利代理师覃蛟(54)发明名称鲜竹沥中酚类化合物和醛类化合物的定性分析方法及应用本发明公开了一种鲜竹沥中酚类化合物和醛类化合物的定性分析方法及应用，涉及中药检测技术领域。包括将鲜竹沥样品通过顶空进样后采用气质联用色谱仪进行分析。通过采用顶空进样配合气质联用色谱仪分析鲜竹沥样品，并配合色谱过程的升温条件，可以使得鲜竹沥中酚类化合物和醛类化合物同时检出，且最多可以检出7中酚类化合物，愈创木酚、丁香醛和紫丁香醇等成分被认为具有潜在药理作用的成分也均可检出，对鲜竹沥的品质评价提供了更充分的检测方时间一>5.0010.0015.0020.0025.0021.一种鲜竹沥中酚类化合物和醛类化合物的定性分析方法，其特征在于，包括将鲜竹沥样品通过顶空进样后采用气质联用色谱仪进行分析；所述气质联用色谱仪的色谱条件包括：色谱柱采用程序升温，初始温度为30～40℃并保持4～6min;以3℃/min的速率升温至40℃,保持3～6min;以4～6℃/min的速率升温至50~60℃,保持2～4min;以10～15℃/min的速率升温至110～125℃,保持3～6min;以4～7℃/min的速率升温至115～125℃,保持1～4min;以4～7℃/min的速率升温至140～145℃,保持0～4min;以2～5℃/min的速率升温至160～180℃,保持0～4min。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述气质联用色谱仪的色谱条件还包括：进样口温度为160～200℃,色谱的分流比为8～12:1;优选地，色谱分析时的载气包括氦气、氢气中的任一种；载气为恒流模式，载气流量为3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述气质联用色谱仪的色谱条件还包括：进样口温度为170～190℃,色谱的分流比为9～11:1;4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述顶空进样的参数包括：样品平衡温度110～130℃,样品平衡时间5～15min;优选地，样品环的规格为0.5～2.0mL,样品环平衡时间为0.3～0.7min;优选地，传输线的温度为120～160℃;5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述顶空进样的参数包括：样品平衡温度115～125℃,样品平衡时间8～12min;优选地，样品环的规格为0.5～1.5mL,样品环平衡时间为0.4～0.6min;优选地，传输线的温度为130～150℃;6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述气质联用色谱仪的质谱条件包括：辅助接口温度为250～290℃,电离方式为EI,离子源温度为200～250℃,电离能量为50~100eV,四极杆温度为120～180℃,采用离子扫描。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述气质联用色谱仪的质谱条件包括：辅助接口温度为260～280℃,电离方式为EI,离子源温度为220～240℃,电离能量为60~80eV,四极杆温度为130～160℃,采用离子扫描。8.根据权利要求2～7任一项所述的方法，其特征在于，所述气质联用色谱仪为Agilent7890A/5975C型气质联用色谱仪。9.一种如权利要求1～8任一项所述的方法在区分鲜竹沥的不同炮制工艺中的应用。10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述鲜竹沥中的酚类化合物包括愈创木香酚中的至少一种；所述鲜竹沥中的醛类化合物包括5-甲基呋喃醛或香草醛。3技术领域[0001]本发明涉及中药检测技术领域，具体而言，涉及一种鲜竹沥中酚类化合物和醛类化合物的定性分析方法及应用。背景技术[0002]鲜竹沥是禾本科植物淡竹(Phyllostachysnigra)及其同属近缘植物的新鲜茎杆木脂素、维生素和微量元素等。其中，愈创木酚、丁香醛和紫丁香醇等成分被认为具有潜在的药理作用。为了确定鲜竹沥的疗效处于较佳水平，对鲜竹沥中的有效成分种类进行检测至关重要。[0003]但是不同的炮制方法对鲜竹沥中的化学成分影响较大，例如采用水煮法和水蒸气提取法制备鲜竹沥的过程中，工艺温度难以使木脂素类成分裂解，导致某些有效成分无法检出。同时，现有的鲜竹沥的有效成分种类检测方法有限，仅能检出鲜竹沥中的部分有效成分，使得鲜竹沥的综合质量评价受限。发明内容[0005]本发明的目的在于提供一种鲜竹沥中酚类化合物和醛类化合物的定性分析方法及应用。[0006]本发明是这样实现的：[0007]第一方面，本发明提供一种鲜竹沥中酚类化合物和醛类化合物的定性分析方法，包括将鲜竹沥样品通过顶空进样后采用气质联用色谱仪进行分析。[0008]气质联用色谱仪的色谱条件包括：色谱柱采用程序升温，初始温度为30～40℃并保持4～6min;以3℃/min的速率升温至40℃,保持3～6min;以4～6℃/min的速率升温至50~60℃,保持2～4min;以10～15℃/min的速率升温至110～125℃,保持3～6min;以4～7℃/min的速率升温至115～125℃,保持1～4min;以4～7℃/min的速率升温至140～145℃,保持0～4min;以2～5℃/min的速率升温至160～180℃,保持0～4min。[0009]在可选的实施方式中，气质联用色谱仪的色谱条件还包括：进样口温度为160~200℃,色谱的分流比为8～12:1。[0010]优选地，色谱分析时的载气包括氦气、氢气中的任一种；载气为恒流模式，载气流量为0.8～1.2mL/min。[0013]在可选的实施方式中，气质联用色谱仪的色谱条件还包括：进样口温度为170~190℃,色谱的分流比为9～11:1。4[0015]在可选的实施方式中，顶空进样的参数包括：样品平衡温度60～100℃,样品平衡时间110～130min,样品平衡时间5～15min。[0016]优选地，样品环的规格为0.5～2.0mL,样品环平衡时间为0.3～0.7min。[0017]优选地，传输线的温度为120～160℃。[0019]在可选的实施方式中，顶空进样的参数包括：样品平衡温度115～125℃,样品平衡时间8～12min。[0020]优选地，样品环的规格为0.5～1.5mL,样品环平衡时间为0.4～0.6min。[0023]在可选的实施方式中，气质联用色谱仪的质谱条件包括：辅助接口温度为250~290℃,电离方式为EI,离子源温度为200～250℃,电离能量为50～100eV,四极杆温度为120~180℃,采用离子扫描。[0024]在可选的实施方式中，气质联用色谱仪的质谱条件包括：辅助接口温度为260~280℃,电离方式为EI,离子源温度为220～240℃,电离能量为60～80eV,四极杆温度为130~160℃,采用离子扫描。[0025]在可选的实施方式中，气质联用色谱仪为Agilent7890A/5975C型气质联用色谱[0026]第二方面，本发明提供一种如前述实施方式任一项的方法在区分鲜竹沥的不同炮制工艺中的应用。[0027]在可选的实施方式中，鲜竹沥中的酚类化合物包括愈创木酚、4-乙基苯酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、对乙烯基愈疮木酚、紫丁香醇和二氢丁香酚中的至少一种。[0028]鲜竹沥中的醛类化合物包括5-甲基呋喃醛或香草醛。[0029]本发明具有以下有益效果：[0030]本发明提供一种鲜竹沥中酚类化合物和醛类化合物的定性分析方法及应用，通过采用顶空进样配合气质联用色谱仪分析鲜竹沥样品，并配合色谱过程的升温条件，可以使得鲜竹沥中酚类化合物和醛类化合物同时检出，且最多可以检出7中酚类化合物，愈创木酚、丁香醛和紫丁香醇等成分被认为具有潜在药理作用的成分也均可检出，对鲜竹沥的品质评价提供了更全面的检测方法。且该方法操作简单，可重复性强，具有较佳的应用价值。附图说明[0031]为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。[0032]图1为采用实施例1的方法检测混合标准样品获得的GC-MS总离子流图；[0033]图2为采用实施例1的方法检测江西某生产企业1售卖的鲜竹沥获得的GC-MS总离子流图；[0034]图3为采用实施例1的方法检测江西某生产企业2售卖的鲜竹沥获得的GC-MS总离5子流图；[0035]图4为采用实施例1的方法检测江西某生产企业3售卖的鲜竹沥获得的GC-MS总离子流图；[0036]图5为采用实施例1的方法检测江西某生产企业4售卖的鲜竹沥获得的GC-MS总离子流图；[0037]图6为采用实施例1的方法检测江西某生产企业5售卖的鲜竹沥获得的GC-MS总离子流图；[0038]图7为采用实施例1的方法检测实验室自制的鲜竹沥获得的GC-MS总离子流图；[0039]图8为采用实施例1的方法检测江西某生产企业6售卖的鲜竹沥获得的GC-MS总离子流图；[0040]图9为采用实施例1的方法检测某生产企业7售卖的鲜竹沥获得的GC-MS总离子流[0041]图10为采用实施例1的方法检测某生产企业8售卖的鲜竹沥获得的GC-MS总离子流[0042]图11为采用实施例1的方法检测某生产企业9售卖的鲜竹沥获得的GC-MS总离子流[0043]图12为采用实施例1的方法检测某生产企业10售卖的鲜竹沥获得的GC-MS总离子流图；[0044]图13为采用实施例1的方法检测某生产企业11售卖的鲜竹沥获得的GC-MS总离子流图；[0045]图14为采用实施例1的方法检测某生产企业12售卖的鲜竹沥获得的GC-MS总离子流图；[0046]图15为采用实施例1的方法检测某生产企业13售卖的鲜竹沥获得的GC-MS总离子流图；[0047]图16为采用实施例1的方法检测江西某生产企业14售卖的鲜竹沥获得的GC-MS总离子流图；[0048]图17为采用实施例1的方法检测某生产企业15售卖的鲜竹沥获得的GC-MS总离子流图；[0049]图18为采用实施例1的方法检测江西某生产企业16售卖的鲜竹沥获得的GC-MS总离子流图；[0050]图19为采用对比例1的方法检测实验室自制的鲜竹沥获得的GC-MS总离子流图；[0051]图20为采用对比例2的方法检测实验室自制的鲜竹沥获得的GC-MS总离子流图。具体实施方式[0052]为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产[0053]以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。6[0054]现有的鲜竹沥的有效成分种类检测方法由于存在温度较高，升温速率过快等缺陷，导致有效成分种类的检出数量有限，仅能检测出少部分酚类化合物，例如苯酚、愈创木酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚和6-甲氧基愈创木酚，难以实现对鲜竹沥质量的综合评价，以确定鲜竹沥的炮制方法。因此发明人提出如下解决方案。[0055]第一方面，本发明提供一种鲜竹沥中酚类化合物和醛类化合物的定性分析方法，包括将鲜竹沥样品通过顶空进样后采用气质联用色谱仪进行分析。[0056]气质联用色谱仪的色谱条件包括：色谱柱采用程序升温，初始温度为30～40℃并保持4～6min;以3℃/min的速率升温至40℃,保持3～6min;以4～6℃/min的速率升温至50~60℃,保持2～4min;以10～15℃/min的速率升温至110～125℃,保持3～6min;以4～7℃/min的速率升温至115～125℃,保持1～4min;以4～7℃/min的速率升温至140～145℃,保持0～4min;以2～5℃/min的速率升温至160～180℃,保持0～4min。[0057]通过采用顶空进样配合气质联用色谱仪分析鲜竹沥样品，并配合色谱过程的升温条件，可以使得鲜竹沥中酚类化合物和醛类化合物同时检出，且最多可以检出7中酚类化合物，愈创木酚、丁香醛和紫丁香醇等成分被认为具有潜在药理作用的成分也均可检出，对鲜竹沥的品质评价提供了更全面的检测方法。[0058]在可选的实施方式中，气质联用色谱仪的色谱条件还包括：进样口温度为160~200℃,色谱的分流比为8～12:1。[0059]优选地，色谱分析时的载气包括氦气、氢气中的任一种；载气为恒流模式，载气流量为0.8～1.2mL/min。[0062]在可选的实施方式中，气质联用色谱仪的色谱条件还包括：进样口温度为170~190℃,色谱的分流比为9～11:1。[0064]通过将色谱参数控制在上述范围内，可以提高对酚类成分及醛类成分的检测准确[0065]在可选的实施方式中，顶空进样的参数包括：样品平衡温度60～100℃,样品平衡时间110～130min,样品平衡时间5～15min。[0066]优选地，样品环的规格为0.5～2.0mL,样品环平衡时间为0.3～0.7min。[0069]在可选的实施方式中，顶空进样的参数包括：样品平衡温度115～125℃,样品平衡时间8～12min。[0070]优选地，样品环的规格为0.5～1.5mL,样品环平衡时间为0.4～0.6min。[0073]通过采用顶空进样可以简化样品前处理过程，提高样品的分析效率，提高样品分析的灵敏度和准确性。同时将样品初始温度和升温速率参数控制在上述范围内，可以有效7[0074]在可选的实施方式中，气质联用色谱仪的质谱条件包括：辅助接口温度为250~290℃,电离方式为EI,离子源温度为200～250℃,电离能量为50～100eV,四极杆温度为120~180℃,采用离子扫描。[0075]在可选的实施方式中，气质联用色谱仪的质谱条件包括：辅助接口温度为260~280℃,电离方式为EI,离子源温度为220～240℃,电离能量为60～80eV,四极杆温度为130~160℃,采用离子扫描。[0076]通过将质谱条件控制在上述范围内，可以保证分析物(鲜竹沥样品)能气化，且气化时不分解。[0077]在可选的实施方式中，气质联用色谱仪为Agilent7890A/5975C型气质联用色谱[0078]第二方面，本发明提供一种如前述实施方式任一项的方法在区分鲜竹沥的不同炮制工艺中的应用。[0079]在可选的实施方式中，鲜竹沥中的酚类化合物包括愈创木酚、4-乙基苯酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、对乙烯基愈疮木酚、紫丁香醇和二氢丁香酚中的至少一种。[0080]鲜竹沥中的醛类化合物包括5-甲基呋喃醛或香草醛。[0082]本实施例提供了一种鲜竹沥中酚类化合物和醛类化合物的定性分析方法，包括如[0083]S01、顶空进样：取鲜竹沥样品采用顶空进样，样品平衡温度120℃,样品平衡时间10min;样品环的规格为1.0mL,样品环平衡时间为0.5min;传输线的温度为140℃,进样时间为0.5min。[0084]S02、气质联用色谱技术分析：采用Agilent7890A/5975C型气质联用色谱仪对鲜竹沥样品进行色谱分析和质谱分析。用恒流模式，载气流量为1.0mL/min。进样口温度为180℃,色谱的分流比为10:1。色谱柱采用程序升温，初始温度为30～40℃并保持4～6min;以3℃/min的速率升温至40℃,保持3~6min;以5℃/min的速率升温至60℃,保持2min;以10℃/min的速率升温至1150℃,保持3min;以6℃/min的速率升温至120℃,保持4min;以6℃的速率升温至125℃,保持4min;以6℃/min的速率升温至145℃,保持Omin;以3℃/min的速率升温至160℃,保持4min。[0086]S022、质谱：辅助接口温度为270℃,电离方式为电子轰击源(EIectronimpact,EI),离子源温度为230℃,电离能量为70eV,四极杆温度为150℃,采用离子扫描。[0087]试验例1[0089]1)制备含有鲜竹沥中醛类化合物和酚类化合物的混合标准样品。[0090]采用以下物质的标准品制备混合标准样品：[0091]愈创木酚(批号：111510-202205,含量以100%计)、4-乙基苯酚(成都克洛玛生物科技有限公司，批号：CHB240123;含量以98%计)、4-甲基愈创木酚(成都克洛玛生物科技有限公司，批号：CHB210223;含量以98%计)、4-乙基愈创木酚(成都克洛玛生物科技有限公司，批号：CHB220407;含量以98%计)、对乙烯基愈疮木酚(成都克洛玛生物科技有限公司；8批号：CHB240303,含量以98%计)、紫丁香醇(中国食品药品检定研究院，批号：112114-202401,含量供鉴定用)、二氢丁香酚(成都克洛玛生物科技有限公司，批号：CHB240308,含量以98%计)、5-甲基呋喃醛(成都克洛玛生物科技有限公司，批号：CHB210222,含量以98%计)和香草醛(中国食品药品检定研究院，批号：100491-202203,含量以99.3%计)。[0092]混合标准样品的制备方法包括：精密称取愈创木酚、对乙烯基愈创木酚、4-乙基愈于乙醇溶液中，制得混合标准样品。其中，各组分的浓度为：愈创木酚4.06mg/ml、对乙烯基愈创木酚54.60mg/ml、4-乙基愈创木酚9.60mg/m1、4-甲基愈创木酚11.50mg/ml、4-乙基苯酚71.0mg/ml、二氢丁香酚12.00mg/ml、紫丁香醇9.60mg/ml、5-甲基呋喃醛9.06mg/ml和香草醛100.20mg/ml,4℃冰箱保存备用。[0093]2)实验室自制鲜竹沥：根据江西省药品监督管理局编《江西省中药饮片炮制规范[0095]3)市售购买了16种不同企业售卖的鲜竹沥作为鲜竹沥样品。[0096]将混合标准样品、实验室自制鲜竹沥和市售购买鲜竹沥均作为待检测的鲜竹沥样品，采用实施例1的方法进行测定。[0097]其中，混合标准样品中检测出愈创木酚、4-乙基苯酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、对乙烯基愈疮木酚、紫丁香醇和二氢丁香酚7种酚类化合物以及5-甲基呋喃醛和香草醛两种醛类化合物，其检测结果如图1所示。[0098]将实验室自制鲜竹沥和市售购买鲜竹沥的检测结果与混合标准样品的检测结果进行对比，分析实验室自制鲜竹沥和市售购买鲜竹沥中含有的酚类化合物和醛类化合物的种类，获得如表1和图2～18所示结果。[0099]表1不同鲜竹沥样品中酚类化合物和醛类化合物的种类9编号鲜竹沥样品定性检测结果1江西某生产企业1鉴别出2种酚类成分2江西某生产企业2鉴别出1种酚类成分3江西某生产企业3鉴别出1种醛类成分4江西某生产企业4鉴别出5种酚类成分5江西某生产企业5鉴别出5种酚类成分及1种醛类成分6实验室自制鉴别出7种酚类成分及1种醛类成分7江西某生产企业6无8某生产企业7无9某生产企业8无某生产企业9无某生产企业10无某生产企业11无某生产企业12无某生产企业13无江西某生产企业14无某生产企业15无江西某生产企业16无[0102]由图1可知，本发明实施例提供的方法可以检测出愈创木酚、4-乙基苯酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、对乙烯基愈疮木酚、紫丁香醇和二氢丁香酚7种酚类化合物以及5-甲基呋喃醛和香草醛两种醛类化合物，对鲜竹沥中的有效成分评价更全面。[0103]由图2～18以及表1可知，采用本发明实施例相同的方法检测不同炮制工艺制得的鲜竹沥中酚类化合物和醛类化合物的种类，获得的成分种类差异显著,可以用于区分不同鲜竹沥的炮制工艺，也可以作为鲜竹沥的疗效有效性的补充证明。[0104]对比例1[0105]本对比例提供了一种鲜竹沥中酚类化合物和醛类化合物的定性分析方法，具体步骤与实施例1相似，区别仅在于：色谱柱采用程序升温，初始温度为80℃,保持时间0min;以速率5℃/min升温至100℃,保持时间5min;以速率10℃/min升温至120℃,保持时间2min;以速率5℃/min升温至150℃,保持时间5min;以速率5℃/min升温至170℃,保持时间1min。[0106]对比例2[0107]本对比例提供了一种鲜竹沥中酚类化合物和醛类化合物的定性分析方法，采用直接进样方法，色谱柱采用程序升温，30～40℃并保持4～6min;以3℃/min的速率升温至40℃,保持3～6min;以5℃/min的速率升温至60℃,保持2min;以10℃/min的速率升温至115℃,保持3min;以6℃/min的速率升温至145℃,保持0min;以3℃/min的速率升温至160℃,保持4min;以速率5℃/min升温至300℃,保持时间Omin。[0109]分别采用实施例1、对比例1和对比例2的方法检测试验例1中的实验室自制的鲜竹沥样品，获得如表2和图19～20所示结果。[0110]表2不同方法检测