微生物的培养技术及应用（第2课时）

第2节微生物的培养技术及应用(第2课时)

【学习目标】

1.概述培养基的配制方法和微生物纯培养的基本操作要求，进行酵母菌的纯培养。

2.阐明微生物选择培养的原理。

3.进行土壤中分解尿素的细菌的分离和计数。

【知识梳理】

1.概念：将接种于培养基内，在合适条件下形成的含有特定种类微生物的群体称为培养物。

由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物,获得纯培养物的过程就是纯培养。

2.微生物的纯培养步骤(以酵母菌的纯培养为例)

(1)微生物的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤。

(2)菌落的概念：分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成囱坦亘见的、

有一定形态结构的子细胞群体。

(3)接种方法：最常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法。

(4)平板划线法

①原理：通过接种环在固体培养基表面连幽线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养

基的表面。经数次划线后培养，可以分离得到单个菌落。

②操作

a.将接种环放在史上灼烧.立到接种环

的金M纥烧红,

将试管口通过火焰,并塞1:棉塞

b.在火焰旁冷却接种环同时,拔出奘有

醉璟曲培养液的试管的柏塞

在火焰附近将皿盅打开二.用接

种坏在培养基表面迅速划三至五条平行

C.将试管口通过火焰线.谖上皿或

g-灼烧接种环,待凡冷却后,从第二次则线

的末端开始作第二次划线质更以上操

在火焰附近用接种环髓取•环菌液

d.作.作第三、四、五次划级。注意不要

特般后一次的划线与笫一次的则战相连,

(5)方法步骤

f配制培养基：马铃膏、葡萄饿、琼脂等

①制备培养基天菌」-培养若一湿热灭菌

一培养m—干热灭菌

L倒平板：冷却至50t：左右时.在酒精灯

火焰附近倒平板

②髓髓一出维

③培养肝理苗一倒置、放入型七左右的恒温培养新中培养

24-48h

【课后训练】

一、单选题

1.以氮源设计选择培养基，下列叙述错误的是（）

A.培养基中以尿素为唯•氮源，分离的微生物-定是分解尿素的微生物

B.培养基中以NH3为唯一氮源可分离硝化细菌

C.培养基中无氮源，可分离固氮微牛物

D.以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养细菌后，指示剂变红色，可判断该

细菌能分解尿素

【答案】A

【分析】培养基按功能分:

种类制备方法特征用途

根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化

选择培养基中

学、物理因素的抗性而设计的培养基使混合加入青霉素分离得到醉

培养加入某种

菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌母菌和霉菌

基化学成分

的筛选率

鉴别和区分菌落相似的

鉴别加入某种依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中

微生物，如伊红和美蓝

培养试剂或化特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征

培养基可以鉴别大扬杆

基学药品变化而设计

菌

【详解】A、在以尿素为唯一氮源的培养基中能够生长繁殖的微生物不一定全是分解尿素的

微生物，因为自生固氮菌也可以在这种培养基上生存，A错误；

B、硝化细菌可利用NH3生成硝酸的过程中释放的能量将CO2和出0合成糖类，故培养基中

以NH3为唯一氮源可以分离硝化细菌，B正确；

C、缺乏氮源的培养基能砂分离固氮微生物，C正确；

D、以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养细菌后，如果pH升高，指示剂变

红，可判断该细菌能分解尿素，D正确。

故选A.；

2.如图为分离和纯化分解甲醛的细菌的实验过程，其中LB培养基能使菌种成倍扩增，以下

说法正确的是（）

活CcC挑取不同菌「悬1取样测定

售2^10mtW10mL只接种烂二^别接种,曰_甲醛浓詈

①制£②LB^③无H夜④无机固体区」

菌悬液养基，振体培养基培养基+甲⑤无机液体培养基

+甲醛，振醛，恒温+甲醛，振荡培养

A.需要对活性污泥作灭菌处理

B.②中LB培养基只能以甲醛为唯一碳源

C.目的菌种异化作用类型为厌氧型

D.经⑤处理后，应选择瓶中甲醛浓度最低的一组进一步纯化培养

【答案】D

【分析】据图分析•：在分离和纯化分解甲醛的细菌的过程中，通过①过程制取各种菌的悬

浊液，②过程用完全培养基培养后，可以获得大量微生物，从而增加目的菌的菌群数量；

③中的培养基中的碳源只含有甲醛，只有可以分解甲醛的细菌能够存活，通过③过程可以

筛选出能分解甲醛的微生物；④过程可以获得单个菌落，获得单个菌落过程中常用的接种

方法是平板划线法或者稀释涂布平板法，为避免水滴污染培养基，在恒温培养箱中培养时,

培养皿须倒置；经过⑤过程后，取样测定甲醛浓度，选出甲醛浓度最低的培养瓶，再分离、

培养菌株。

【详解】A、该实验是从活性污泥中分离和纯化能分解甲醛的细菌，故不需要对活性污泥作

灭菌处理，A错误；

B、②过程用完全培养基培养后，可以获得大量微生物，从而增加目的菌的菌群数量，故

②中LB培养基不是以甲醛为唯一碳源；③过程可以筛选出能分解甲醛的微生物，需要以

甲醛为唯一碳源的培养基，B错误；

C、图示分解甲醛的细菌是在培养皿中进行的，故目的菌种异化作用类型属于需氧型细菌，

C错误；

D、经⑤处理后，瓶中甲陛浓度降低，甲醛浓度最低的一组中分解甲醛的细菌纯度最高，可

进一步纯化培养，D正确。

故选D。

3.某同学利用选择培养基成功分离出了土壤中的自生固氮菌，得到了如图所示的实验结果，

以下说法正确的是（）

A.该实验使用了划线法接种

B.该实验使用了液体培养基

C.该实验使用了无碳培养基

D.该实验使用了无氮培养基

【答案】D

【分析】自生固氮菌可以利用空气中氮气为氮源，所以培养基中不需要添加氮源，自生固氮

菌就能生长，而在没有氮源的培养基上其它不能固氮的微生物不能生长，所以该培养基可用

于筛选自生固氮菌。

【详解】A、稀释涂布平板法是将菌液稀释成不同浓度让行涂布，而平板划线法是挑取单个

菌落在平板上划线，据此可判断该实验中将土壤浸出液接种到培养基的方法为稀释涂布平板

法，A错误；

B、图示中是将土壤浸出液接种到无氮培养基上选择自生固氮菌的过程，该培养基属于固体

培养基，B错误；

C、自生固氮微生物属于异养微生物，没有碳源不能生长，所以为了保证自生固氮菌的生长

培养基中应添加碳源，C错误；

D、由于自生固氮菌可以利用空气中氮气为氮源，而其它不能固氮的微生物不能利用氮气做

氮源，所以在无氮的培养基上可以筛选出自生固氮菌，故图示中使用了无氮培养基，D正确。

故选Do

4.如表所示为某培养基的配方，下列叙述错误的是（）

成分NaNO3K2HPO4MgSO4-7H2O(CH2O)蒸储水青霉素

含量3glg0.5g30g定容至1000mL0.1万单位

A.根据物理性质划分，该培养基属于液体培养基

B.微生物无法在该培养基表面形成肉眼可见的菌落

C.根据培养基的配方可知，该培养基培养的微生物的同化作用类型是异养型

D.固体培养基中加入少量水即可形成液体培养基

【答案】D

【分析】分析表格：该培养基没有凝固剂，属于液体培养基；该培养基中含有有机碳源（CKO）,

所培养的微生物是异养型的；该培养基中含有青霉素，属于选择培养基。

【详解】AD、液体培养基中加入凝固剂（如琼脂）可形成固体培养基，题表所示的培养基

配方中没有加凝固剂，因此属于液体培养基，A正确；

B、微生物在固体培养基表面或内部生长，形成肉眼可见的菌落，B正确；

C、该培养基中的（CHzO）可作为有机碳源，因此其培养的微生物的同化作用类型是异养型，

C正确。

D、固体培养基中有凝固剂，加入少量水即不可b形成液体培养基，D错误。

故选D。

【点睛】

5.下列有关培养基的叙述，错误的是（）

A.培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质

B.培养基只有两类：液体培养基和固体培养基

C.培养大肠杆菌的培养基中必须添加有机碳源

D.微生物在固体培养基表面生长可形成肉眼可见的菌落

【答案】B

【分析】培养基的概念、种类及营养构成：

（1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。

（2）种类：固体培养基和半固体培养基、液体培养基。

（3）营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生

长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。

【详解】A、培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求而配制出的供微生物生长繁殖

的营养基质，A正确；

B、按物理性质不同，培养基可分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基，B错误；

C、大肠杆菌属于异养型微生物，培养异养型微生物的培养基中必须添加有机碳源，C正确；

D、微生物在固体培养基上生长时。，可以形成由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,

即菌落，D正确。

故选Bo

6.下表中是某种微生物的培养基配方，下列叙述错误的是（）

成分葡萄糖水青霉素

KNO3NaH2Po4FeSO4MgSO4-7H2O

含量4g3g0.01g0.48g30g1000mL万单位

A.该培养基的碳源是葡萄糖，氮源是KNO3

B.该培养基可采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌

C.该培养基属于固体培养基，可用于微生物的分离

D.该培养基可用来筛选抗青霉素的微生物

【答案】C

【分析】微生物的营养物质主要包括碳源、氮源、水和无机盐等。有些微生物还需要特殊的

营养物质，如维生素、生长因子等。培养基中含有琼脂的一般为固体培养基。选择培养基是

指通过培养混合的微生物，仅得到或筛选出所需要的微生物，其他不需要的种类在这种培养

基上是不能生存的。细菌对青霉素敏感，含青霉素的培养基不能培养细菌。

【详解】A、分析表格中的成分可知，该培养基的碳源是葡萄糖，氮源是KNO3,A正确；

B、培养基一般采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，B正确；

C、该培养基不含琼脂，属于液体培养基，不能用于微生物的分离，C错误；

D、该培养基中加入了青霉素，具有抑制细菌生长的作用，可用来筛选抗青霉素的微生物,

D正确。

故选C。

7.下列关于微生物培养和利用的叙述，错误的是（）

A.接种前要了解固体培养基是否被污染可接种蒸馅水来培育检测

B.接种时连续划线的目的是将聚集的菌体逐步稀释获得单个菌落

C.以尿素为唯•氮源且含酚红的培养基可选择和鉴别尿素分解菌

D.利用刚果红培养基上是否形成透明圈可筛选纤维素分解菌

【答案】A

【分析】微生物接种的方法中最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，前者是指通过接种

环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种，逐步稀释分散到培养基的表面,

后者是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基

的表面，进行培养。

【详解】A、检测培养基被污染的方法是：将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时

间，观察培养基上是否有菌落产生，A错误；

B、接种换上的菌液经过连续划线，菌液中的菌体越来越少，最后容易形成单菌落，B正确；

C、鉴定尿素分解菌培养基不是无氮.有唯一氮源尿素,尿素分解菌分解尿素形成了氨气.

氨气会使培养基的碱性增强，用酚红试剂即可鉴定出，C正确；

D、当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红-纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤

维素分解菌为中心的透明圈，可通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌，D正确。

故选Ao

【点睛】

8.某实验小组探究大蒜汁对枯草芽抱杆菌的抑制作用，与实验操作有关的叙述不可砸的是

()

A.称量、溶化和倒平板都必须进行无菌操作

B.吸取适当稀释度的菌悬液滴在平板上并涂布均匀

C.分别将浸于大蒜汁和无菌水的滤纸片贴在平板不同位置

D.将平板倒置放入适宜温度的恒温培养箱中培养

【答案】A

【分析】防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物是研究和应用微生物的前提，也是发酵工

程的重要基础。在实验室培养微生物，一方面要为人们需要的微生物提供合适的营养和环境

条件；另一方面要确保其他微生物无法混入，并将需要的微生物分离出来。培养基配制过程

不需要进行无菌操作，配制好的培养基需要进行灭菌，后续需要无菌操作。

【详解】A、称量、溶化是进行配置培养基的过程，培养基配制后需要灭菌，称量和溶化不

需要无菌操作，倒平板过程需要进行无菌操作，A错误；

B、可用稀释涂布平板法进行接种，吸取适当稀释度的菌悬液滴在平板上并涂布均匀，B正

确；

C、可分别将浸于大蒜汁和无菌水的滤纸片贴在平板不同位置，加入大蒜汁的是实验组，无

菌水作为对照组，C正确；

D、平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，

既可以使培养基表面的水分更好地挥发，乂可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染,

D正确。

故选Ao

9.微生物培养时常用到无菌技术避免杂菌污染，相关叙述正确的是（）

A.无菌技术包括对操作者的衣着和手进行灭菌

B.倒平板时应该把培养ILL盖完全打开，以免培养基溅到培养皿盖上

C.配置好的培养某应放入干热灭菌箱中进行灭菌

D.接种前后接种环都必须灼烧灭菌

【答案】D

【分析1获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。无菌技术围绕着如何避免杂的的污

染展开，主要包括以下几个方面：

1、对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒；

2、将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌；

3、为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行；

4、实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。

【详解】A、对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒，A错误；

B、为防止空气中的杂菌落入培养皿中，倒平板时不能把培养皿盖完全打开，正确的操作是

将培养皿打开一条稍大于锥形瓶瓶口的缝隙，B错误；

C、配置好的培养基应放入高压蒸汽灭菌锅内进行灭菌，C错误；

D、接种前灼烧是为了保证接种时不会污染培养物，接种后再灼烧是防止菌种污染接种室或

者超净台，D正确。

故选Do

10.如图是微生物平板划线示意图，划线的顺序为132玲3玲4玲5,下列说法正确的是（）

A.操作前要将接种环用酒精消毒

B.划线操作须在酒精灯火焰附近进行

C.只有在5区才可以得到所需菌落

D.在1、2、3、4、5区域中划线前后都不需要对接种环灭菌

【答案】B

【分析】平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步

稀释分散到培养基的表面。

【详解】A、进行平板划线操作之前，以及每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的

灭菌方法应是在酒精灯火焰上灼烧，不能用酒精消毒，A错误；

B、为防止杂菌污染，划线操作须在酒精灯火焰附近进行，B正确；

C、由题图可知，5区域是最后一个区域，有可能在5区域获得所需要的菌落，但在4区域

也有可能得到所需要的菌落，C错误；

D、每次划线前后都要灼烧接种环，目的是杀死接种环上原有的微生物(第一次划线前)和

上次划线结束后接种环上残留的菌种，使每次划线的菌种都来自上一次划线的末端，划线结

束后灼烧接种环以防止污染环境和感染操作者，D错误。

故选Bo

二、填空题

11.具体操作

⑴对实验操作的、操作者的衣着和手进行清洁和。

(2)将用丁微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行o

⑶实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与接触。

⑷为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在并在

____________________________附近进行.

【答案】空间消毒灭菌周围的物品超净工作台酒精灯火焰

【解析】略

12.消毒和火苗

消毒灭菌

使用较为____的物理、化学或生物等

使用__________的理化方法杀死物体内外

概念方法杀死物体_____或内部一部分微

_____的微生物，包括________________

生物

常用______消毒法、巴氏消毒法、一消

____灭菌、干热灭菌、____灭菌

方法毒法、紫外线消毒法

适用

操作空间、双手等接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等

对象

【答案】温和表面煮沸化学药物强烈的所有芽抱和抱子湿热灼

烧

【解析】略

三、综合题

、

13.有一培养基配方如下：甘露醇（CHQG）MgSO.,xK2HPO4XCuSO八Na。、CaSO八

蒸馀水.据此问答以下相关问题：

（1）该培养基属于（填固体或液体）培养基

（2）该培养基的碳源是,能源是.

（3）该培养基缺少的成分是,适合培养的微生物是,从同化作用上

看，该微生物属于.

【答案】液体甘露醉甘露醉氮源固氮微生物异养型

【分析】1.微生物培养基的基本成分包括水、无机盐、碳源、氮源及特殊生长因子。培养基

按物理性质分为固体、半固体、液体培养基；按用途分为选择培养基和鉴别培养基。

2.无菌操作包括灭菌和消毒两种方式，消毒的方法有巴氏消毒法、酒精消毒、煮沸消毒法;

灭菌的方法有干热灭菌、灼烧灭菌和高压蒸汽灭菌。

3.微生物的接利”微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，常用

来统计样品活菌数目的方法是稀释涂布平板法。

【详解】（1）从培养基成分看，没有琼脂等凝固剂，属于液体培养基。

（2）从培养基的配方中可以发现，该培养基的碳源为甘露酸；甘露静为含碳有机物，可以

作为微生物的能源物质。

（3）培养基的配方中必须含有碳源，氮源水和无机盐等，而题中所给的培养基的配方中没

有氮源，因此，在这样的培养基中生长的微生物，一定是具有固氮作用的微生物；该培养基

中甘露醉，可以为微生物提供碳源，因此，其培养的微生物同化作用类型为异养型。

【点睛】本题考查的知识点是微生物的实验室培养、培养基的成分和制备，主要考查运